Характеристика т 150: Трактор Т-150 технические характеристики, особенности устройства, двигатель, трансмиссия, модификации

Содержание

ᐉ Обзор и технические параметры колесных тракторов Т-150К

Категория: Запчасти к тракторам

Тракторы Харьковского завода Т-150К известны буквально во всем мире. Выпуск их был налажен еще в период СССР, однако и в наше время их до сих пор эксплуатируют, предпочитая другим маркам спецмашины. За полувековую историю трактор модернизировали, усовершенствовали его технические характеристики, сделав более практичным и производительным. Эти свойства не остались без внимания потребителей. Тракторы Т-150К пользуются большим спросом и имеют репутацию надежной техники по обе стороны океана.

Важно: завод ХТЗ выпускал эти спецмашины в двух модификациях: на колесном и гусеничном ходу. Различия выражены только в механизме поворотов, ходовке, системе управления, раме и немного КПП. Однако колесные модели Т-150К обрели большую популярность ввиду практичности. Они характеризуются универсальностью и удобнее в эксплуатации, рассчитаны на широкий спектр операций: земельные работы, с/х, строительные, транспортные и пр.


Оснащение и основные характеристики

По техническим параметрам Т-150К во многом похож на гусеничную версию Т-150. Силовой агрегат установлен спереди, кабина оснащена рамой для повышения уровня эксплуатационной безопасности, хорошо изолирована от посторонних звуков, пыли. Установлена она в непосредственно в пределах центра тяжести, отчего минимально поддается колебаниям и водитель не чувствует дискомфорт. Дополнительно кабины современных моделей тракторов оснащены кондиционером, а за счет большой площади остекления обеспечивается отличный панорамный обзор.

Важно: КПП оснащена несколькими диапазонами переключений. В каждом предусмотрено 4 скорости. Аналогичным образом сконструирована коробка и в гусеничной модели тракторов харьковского завода.

Передачи в пределах своей скорости переключаются просто во время движения машины, не прерываясь.

А вот переход на иной диапазон осуществляется при остановке спецтехники. В Т-150К ведущими являются оба моста. Однако передний можно отключать, в то время как задний уже постоянный.

Колесные диски в спецтехнике Т-150К установлены одинакового размера все 4. Трактор комплектуется покрышками низкого давления (1440 х 510 мм), дизайн протектора которых выполнен с мощными блоками-грунтозацепами. За счет такой конфигурации шины обеспечивают отличную проходимость на грунтовке и полевых дорогах.

Еще одним уникальным свойством тракторов марки Т-150 на колесной базе является сборная рама. Она сконструирована из двух частей. Соединение между ними осуществляется при помощи шарниров (в вертикальной и горизонтальной плоскости). Такая особенность делает спецмашину более маневренной. Рулевое управление на технике модели Т-150К тоже усовершенствовано. Установлен гидроусилитель, который существенно облегчает поворот баранки.

В свое время такая конструкция стала прорывом в тракторостроении, чем и обусловлена большая популярность данной модели спецтехники. Также к характерным преимуществам относится простота в обслуживании. Запчасти на трактор Т-150 доступны в большом ассортименте для разных узлов и механизмов. Заказать оригинальные комплектующие можно на сайте «Белагро», где они представлены в широком номенклатурном разнообразии.

Модельный ряд

Мощный и надежный трактор Т-150 востребован в разных отраслях промышленности и хозяйства. Харьковский завод в основном выпускал колесную версию спецмашины, и уже на его базе разрабатывались другие модификации для разных отраслей:

  • Т-155. Эти тракторы — легкие тягачи, широко востребованы в коммунальном и сельском хозяйстве;
  • Т-157. Данная модель конструировалась для лесхозов, используется при трелевке бревен;
  • Т-150КД. Бульдозер;
  • Т-154. Тягач для армейской техники;
  • Т-150К 09. Данная модель комплектуется силовым агрегатом ЯМЗ (175 лошадей) и 2-местной кабиной.

Широкий модельный ряд делает Т-150К машиной универсального назначения, пригодной для эксплуатации в разных отраслях.

Технические характеристики

При всей мощности тракторы на колесной базе Т-150К относятся к категории небольших машин. Габариты техники: 6130х2430х3170 мм. Вес чистой техники (без навесного оборудования и горючего) составляет 8,4 т.

Длина колесной базы равна 286 см, клиренс — 40 см. Среди особых характеристик — возможность настройки колеи по ширине (168; 186 см) и высокая маневренность. За счет этих особенностей Т-150К способен разворачиваться на небольших участках (хватит и 6,5 м свободных). За счет этой особенности его работа более рациональна в условиях ограниченных площадей.

Характеристики двигателя

На Т-150 К установлен дизельный 6-цилиндровый мотор мощностью в 150 л. с. Спецтехника поздних модификаций оснащается более производительными движками — до 180 лошадиных сил. Сейчас клиентам предлагается комплектация силовым агрегатом от ЯМЗ (более мощный, 175 л. с.).

Расход дизельного топлива в рабочем режиме равен 258 г/1Вт-ч. Объем бака на первых тракторах был 375 л, на новых моделях емкость больше — 430 литров.

Важно: пуск силового агрегата осуществляется при посредстве ПД-10 (на бензине).

Охлаждение двигателя выполняется воздухом, который предварительно очищается через фильтры циклонно-масляного типа. Осенью и зимой топливо перед запуском прогревается при посредстве ПЖБ-10, что облегчает запуск техники.

Характеристики КПП

Широкие области эксплуатации тракторов с колесной базой Т-150К в числе основных причин обусловлены практичной многоступенчатой коробкой скоростей. КПП функционирует в нескольких режимах: рабочем, заднем, транспортировочном, замедленном. При этом в каждом предусмотрены 4 ступени.

Скорость передвижения — до 30 км/ч.

Характеристики трансмиссии и ходовки

На спецтехнике Т-150 К стоит механический узел. Среди особенностей такой трансмиссии:

  • плавность переключения просто в процессе езды или работы;
  • возможность регулирования тяги;
  • поддержка скоростного режима работы при комплектации навесными агрегатами.

Крутящий момент непосредственно от коробки передается к раздаточному механизму, а потом — к мостам. На трансмиссии установлен узел отбора мощности для навесных агрегатов — КЗК-10.

Оснащение кабины

Среди основных эксплуатационных характеристик — повышенный уровень комфортности. Цельнометаллический каркас для кабины делает ее устойчивой к расшатыванию. Всестороннее остекление обеспечивает круговой обзор и упрощает управление техникой.

Внутри кабины установлен вентилятор и кондиционер, которые позволяют регулировать микроклимат в кабине до максимального уровня. Приборная панель стандартной конфигурации оборудована контрольными датчиками: скорости, температуры охладителя, объема дизеля и масла.


Характеристики гидравлики

На Т-150К установлены задняя сцепка с классом тяги 3. Данный узел имеет вид шарнирного 4-звездочного 3-точечного механизма.

За счет большой мощности трактор пригоден для эксплуатации в тяжелых условиях: выполнения полевых работ (в том числе вспашки целины), уборки снега, трелевки бревен, буксировки техники и транспортировки грузовых транспортных приспособлений.

Проведение ТО

Без надлежащего ухода безотказность и нормальная функциональность Т-150К будет невозможной. Однако среди основных особенностей — доступность в техобслуживании. Меры ухода заключаются в проверке перед выездом уровня технических жидкостей: охладителя, масла, топлива. Обязательно нужно оценить функциональность систем торможения, рулевого управления, уровень заряда АКБ.

ТО включает также замену масла после отработки определенного ресурса. Выполнять данную операцию нужно через 500 моточасов. Подбирать масло нужно в зависимости от сезона (лето или зима), для работы в разных температурных режимах оно отличается по показателю вязкости.

Техническую жидкость в трансмиссии меняют 1 раз в год перед сезонными работами или по выработке 1000 моточасов.

Типичные неисправности и методы их устранения

Несмотря на надежность машин Т-150К, как и любая техника, они подвержены износу. Среди наиболее распространенных проблем:

  • нагрев кардана. Для устранения нужно осмотреть радиальный зазор на подшипниках игольчатого типа. Если расстояние превышает 0,5 мм, то требуется замена крестовины. В случаях, когда зазор меньше указанного параметра, поможет смазка узла;
  • радиальное биение кардана. Нужно проверить фланцы КПП на предмет подвижности. Если они ослаблены, то нужно затянуть крепежи;
  • не поднимается навесное оборудование. Причина кроется в отказе работы гидронасоса. Такое бывает при его выключенном состоянии, холодном масле в системе, попадании мусора на кромку гнезда в перепускном клапане.

Важно: если в ходе осмотра выявлены изношенные детали, то их обязательно следует заменить на новые, даже при условии, что трактор продолжает работать. Эксплуатация спецтехники на запчастях, отработавших свой ресурс, является основной причиной серьезных поломок, выхода машины из строя и приводит к дорогостоящему ремонту.


Посмотреть другие статьи

Трактор Т-150 — особенности, модификации, характеристики, видео

Трактор Т-150 – детище Харьковского тракторного завода. Первый тестовый экземпляр сошел с конвейера еще в 1967 году. В 1979 году трактор прошел международные технические испытания в США, на полигоне в штате Небраска. Модель выпускается по сегодняшний день и отличается своей универсальностью, проходимостью и мощностью.

Его использовали как универсальную технику общего назначения.

Трактор Т-150 успешно применяется для выполнения различных сельхоз работ (обработка земли, в том числе целины, сборка урожая), транспортировка габаритных грузов, снегоуборочные работы зимой и т. д. То есть, данную технику успешно можно использовать фактически круглый год.

Параллельно с выпуском колесного трактора Т-150 производился выпуск гусеничного варианта, который отличался повышенной проходимостью, рамой, механизмом поворота и системой управления.

Содержание

  • 1 Модификации трактора Т-150
  • 2 Конструкция трактора Т-150
  • 3 Трактор Т-150: технические характеристики
  • 4 Трактор Т-150К: технические характеристики

Модификации трактора Т-150

Данный агрегат на сегодняшний день имеет несколько модификаций, которые созданы на базе модели трактора Т-150К:

  • Т-150КД – трактор с бульдозерным ковшом;
  • Т-154 – вариант для армейского использования. Разработан специально для военного использования, для транспортировки артиллерийских установок и для выполнения разного рода строительных работ. Имеет в наличии специальный буксировочный крюк, удлиненный грузовой кузов, усиленную раму и большую скорость передвижения;
  • ЛТ-154 – трелевочный трактор для использования при лесозаготовке;
  • Т-156 – модель с ковшом для погрузочных работ;
  • Т-158 – промышленная усиленная версия данного трактора.

Конструкция трактора Т-150

Рама агрегата состоит из двух конструктивных частей (полурам), соединенных между собой горизонтальными и вертикальными шарнирными креплениями. Полурамы усилены поперечными стальными балками и продольными швеллерами. Такое устройство несущей конструкции обуславливает переднее расположение мотора.

К задней части мотора крепится коробка передач, на нее в свою очередь установлена кабина с бачком для горючего. КПП имеет несколько рабочих режимов (транспортный, тяговый, рабочий, задний ход) и по 4 передачи для каждого из них. Переключение передач происходит без остановки и перерыва под воздействием двойного переключения с помощью гидромуфт.

Гусеничный вариант имеет рулевое управление для выполнения поворотов, а переключение передач на каждой гусенице по отдельности дает возможность разворачивать агрегат фактически на месте. Поворот колесного трактора осуществляется с помощью гидроцилиндров, помогающих развернуть полурамы конструкции. Все колеса являются ведущими, ширина шин позволяет равномерно распределить вес и уменьшить давление на покрытие при передвижении.

Кабина трактора достаточно комфортабельная и безопасная. Она состоит из металлического закрытого каркаса, полностью герметична от воздействия пыли, грязи, воды. Конструктивное расположение уменьшает уровень воздействия шума и вибрации на оператора. Также в кабине предусмотрены 2 сиденья (водительское имеет возможность регулировки), дворники, обогрев, вентиляция, зеркала, освещение, есть место для аптечки и вешалка для одежды.

Трактор Т-150: технические характеристики

Все модели тракторов Т-150 оборудованы дизельным 6-цилиндровым четырехтактным наддувным двигателем СМД-60. Его мощность – 158 лошадиных сил. Размещение цилиндров – V-подобное, охлаждение – жидкостное. Запускается двигатель по двойному алгоритму – с начала стартером заводится пусковой бензиновый мотор, который в свою очередь разгоняет главный двигатель. Очистка воздуха для топливной системы трехуровневая – 2-ступенчатая очистка сухим фильтром от пыли плюс инерционно-масляная (так называемая тонкая очистка). При отрицательных температурах (от –5°С) двигатель запускается с помощью специальной нагревательной системы ПЖБ-300.

Другие технические параметры трактора:

  • вместительность бачка для горючего – 315 л;
  • средний расход топлива – 258 г*кВт/час;
  • габариты – 2945*6130*2220;
  • вес агрегата – 7685 кг;
  • ширина колеи – 1860 мм.

Трактор Т-150К: технические характеристики

Данный агрегат можно использовать как для обработки земли и других сельхозработ, так и для перевозки тяжелых грузов с прицепом. Устройство трактора Т-150К не отличается от исполнения трактора Т-150.

Отличается он лишь некоторыми техническими характеристиками:

  • мощность двигателя – 180 л. с.;
  • средний расход топлива – 248 г*кВт/час;
  • обороты коленвала – 2100 об/мин;
  • вместительность топливного бака – 330 л;
  • габариты – 3165*2520*2860;
  • ширина колеи – 1900 мм;
  • масса – 8750 кг.

Ремонт данного оборудования может доставить сложности лишь с технологичной точки зрения, поскольку запчасти к нему можно спокойно приобрести.

Вам может также понравиться:

Трактора Т-150 и Т-150К — характеристики, устройство, видео

Львиную долю производства СССР занимал выпуск спецтехники. Именно благодаря этому трактор Т 150, который начал выпускаться именно в те времена, отличался неприхотливостью и надежностью. Этот агрегат предназначался для разных целей в ведении сельского хозяйства, обслуживании и создании дорог и во многих других отраслях. Это сделало агрегат и его улучшенный аналог – трактор Т 150К универсальной машиной, готовой помочь своему владельцу в самых разных жизненных ситуациях.

Содержание

  • 1 Конструкция и технические характеристики моделей Т-150 и Т-150К
    • 1.1 Трактор Т 150 К обладает следующими характеристиками:
  • 2 Двигатель трактора – особенности и конструкция
    • 2.1 В качестве дополнительного оборудования для мотора выступает:
  • 3 Коробка переключения передач трактора
    • 3.1 Исправная работа КПП обеспечивается гидросистемой, которая состоит из:
  • 4 Устройство трансмиссии агрегата
  • 5 Габариты и масса тракторов Т-150 и Т-150К

Конструкция и технические характеристики моделей Т-150 и Т-150К

Оба агрегата представляют собой колесную или гусеничную конструкцию. Основа трактора состоит из рамы, в конструкцию которой входят передняя и задняя часть, соединенные шарнирами. Такой принцип изготовления, в паре с надежной коробкой передач, делают трактор Т 150 и его улучшенную версию достаточно маневренными, даже при наличии навесной лопаты.

Смена траектории движения машины выполняется посредством поворота полурам на шарнирном соединении вокруг вертикальной оси. Управление машиной осуществляется путем поворотов рулевого колеса. В качестве исполнительного механизма выступает гидропривод, функционирующий на базе масляного шестеренчатого насоса.

Передняя полурама оснащается мотором, трансмиссией, кабиной и расположенными внутри нее органами управления. Чтобы трактор Т 150К передвигался более плавно, его мост располагается на рессорах полуэллиптической формы. При этом задняя часть трактора жестко соединена с конструкцией рамы. Крутящий момент передается посредством открытого карданного вала.

Трактор Т150 является полноприводным агрегатом. Передние и задние колеса имеют одинаковый размер шин – 144×51 см., и диаметр. Каждый колесный агрегат оборудуются мощными грунтозацепами. Это гарантирует высокую проходимость и стабильный запуск агрегата даже при работе на плохой грунтовой дороге.

Трактор Т 150 К обладает следующими характеристиками:

  • Максимальное усилие тяги –3 тс;
  • Скорость передвижения вперед – от 1,8 км/ч., до 31,1 км/ч., назад – 6,6–10,3 км/ч.;
  • Масса в полном снаряжении – примерно 8 т.;
  • Тормозная система – пневматический барабан, работающий под воздействием крана или педали;
  • Ленточное стояночное устройство блокирует вал под воздействием рычага.

Ниже рассмотрим каждый из узлов отечественного трактора более подробно.

Двигатель трактора – особенности и конструкция

Трактора отечественного производства оснащаются дизельными моторами СМД-60, немного реже – моторами СМД-62. Обе модели специально разрабатывались для тракторов семейства Т-150, и имеют такие характеристики:

  • Тип мотора – 4-тактный, с турбонаддувом и системой жидкостного охлаждения;
  • Номинальная мощность двигателя – 165 л. с.;
  • 6 V-образных цилиндров, имеющих угол развала в 90 градусов;
  • Скорость вращения коленчатого вала – примерно 2100 об./мин.;
  • Расход топлива – 180 г/л. с./ч.;
  • Вес мотора – 1110 кг.

Пуск основного двигателя выполняется посредством дополнительного бензинового мотора П-350, мощность которого составляет 14 л. с. Пусковой мотор, в свою очередь, приводиться в работу посредством электрического стартера или резкого дергания веревки, накручиваемой вокруг шкива.

Смазочная система дизеля проходит две стадии очистки – в центрифуге удаляются крупные частицы, а бумажный фильтр задерживает мелкие фракции примесей. За давление масла отвечает шестеренчатый насос, имеющий привод от коленчатого вала.

Топливная система состоит из топливного насоса повышенного давления, 4-точечных форсунок. Объем топливного бака составляет 430 л.

В качестве дополнительного оборудования для мотора выступает:

  • Вентилятор охладительной системы;
  • Воздушный фильтр;
  • Пневматический компрессор;
  • Генератор;
  • Коллектор с глушителем и искрогасителем.

Более современные модели тракторов оснащаются моторами ЯМЗ-236. Мощность таких двигателей составляет 180 л. с. Наличие такого мотора в паре с усовершенствованной схемой электропроводки позволяет использовать любой тип навесного оборудования, при условии, если регулировка навески была выполнена правильно.

Коробка переключения передач трактора

Крутящий момент от мотора агрегата передается на элементы трансмиссии посредством сухого фрикционного сцепления. КПП используется для изменения усилий мотора и состоит из основной и раздаточной части. Каждая из них находится в отдельном корпусе. Согласно инструкции по эксплуатации, корпуса связаны между собой жестким креплением.

Механическая ступенчатая КПП имеет 12 передач, которые распределяются между 4 диапазонами – замедленным, транспортным, рабочим и задним ходом.

Конструкция трактора оснащается двумя валами – ведомым и ведущим. Переключение передач выполняется на ходу машины при помощи муфт. Это не дает прерывать поток мощности в границах одного диапазона.

В процессе переключения на пониженную или повышенную скорость на доли секунды срабатывает гидромуфта. Время срабатывания зависит от того, какой навесное оборудование установлено и сколько весит агрегат.

Управление КПП осуществляется посредством рычага. Выбрать подходящий скоростной диапазон можно лишь после полной остановки машины.

Исправная работа КПП обеспечивается гидросистемой, которая состоит из:

  • Насоса, имеющего производительность около 37 л./ч.;
  • Основного и заборного фильтров;
  • Магистрали для нагнетания;
  • Механизма распределения с предохранительным и перепускным клапанами;
  • Охлаждающего радиатора;
  • Гидроаккумулятора;
  • Магистралей и шланга.

Чтобы переключить скорость в границах одного диапазона, водитель должен выжать сцепление, и перевести рычаг в требуемое положение.

Самостоятельный ремонт коробки переключения передач достаточно прост благодаря отсутствию лишних элементов. Это дает возможность выявить неисправность и заменить новые запчасти КПП в короткие сроки прямо на рабочем месте.

Однако, не имея опыта в выполнении подобных работ, требуется внимательно изучить чертежи, прилагаемые к техпаспорту трактора.

Устройство трансмиссии агрегата

В конструкцию трактора входит механическая трансмиссия на ручном управлении. Она состоит з таких элементов:

  • Двухдискового сухого сцепления, оснащенного пневмоусилителем привода;
  • Коробки переключения скоростей;
  • Главной передачи;
  • Карданного вала;
  • Межколесного дифференциала;
  • Конечной передачи;

Узлы и механизмы трансмиссии расположены в отдельных корпусах.
Крутящий момент передается к дифференциалам заднего и переднего мостов посредством карданного вала. Они могут работать даже при сильном смещении задней и передней полурамы по отношении друг к другу.

Карданная передача снабжается промежуточной опорой с подшипником подвесного типа. И передний, и задний мост трактора являются ведущими. При этом задняя часть подключена постоянно, что гарантирует более безопасное управление агрегатом.

В конструкцию главной передачи входит ведомая и ведущая шестерни, имеющие спирально-конической зацепление. Этот механизм гарантирует различные частоты вращения колес при входе в поворот.

Сам привод выполняется при помощи колесных редукторов или конечных передач. Ведомый механизм каждой передачи установлен в отдельный корпус, расположенный в непосредственной близости к колесу.

Конструкция трансмиссии трактора не отличается сложностью. Благодаря этому даже новички, не знающие, как управлять агрегатом, достаточно быстро разберутся в принципе работы его ходовой части.

Габариты и масса тракторов Т-150 и Т-150К

Отечественный агрегат обладает классической конструкцией с расположенным в передней части мотором. К основным габаритно-массовым показателям машины относится:

  • Масса без топлива и других жидкостей – 7536 кг, а при полностью заполненном баке и картере – 8137 кг.;
  • На передний мост распределяется 5200 кг от общего веса агрегата, а на задний – 2937 кг. ;
  • Длина трактора с навесным инвентарем – 5800 мм., по кромкам крыльев сзади – 5590 мм.;
  • Ширина с узкой колеёй – 2230 мм, а с широкой – 2250 мм.;
  • Дистанция между задней и передней осью – 2865 мм.

Габариты трактора достаточно большие, из-за чего он, как правило, используется только на больших угодьях, площадью в несколько десятков гектаров.

Т-150: обзор, характеристики, сравнение параметров

Добавить к сравнению Машина добавлена к сравнению Добавить комплектацию техники к сравнению Комплектация техники добавлена к сравнению

Добавить к сравнению технику в базовой комплектации Убрать машину из сравнения Добавить к сравнению технику в текущей комплектации Убрать машину из сравнения

17 июля 1940 года было принято постановление СНК СССР и ЦК ВКП(б) о создании новых тяжёлых танков. К 5 ноября Кировским заводом был построен опытный образец Т-150. В ходе испытаний было выявлено большое количество недостатков в двигателе и трансмиссии машины. После устранения выявленных недостатков танк планировали запустить в серийное производство в июне 1941 года под индексом КВ-3, однако данные о разработке в Германии 45-тонного тяжёлого танка привели к прекращению работ над этой моделью.

Командир

Наводчик

Радист

Механик-водитель

Заряжающий

Огневая мощь

ед. Урон

мм Бронепробиваемость

0}»> ед/мин Урон в минуту

0, ‘specification_delta-good’: $data с Время сведения

0, ‘specification_delta-good’: $data м Разброс на 100 м

0}»> шт Боезапас

Мобильность

0}»> / 0}»> / т Масса/Предельная масса

0}»> л. с. Мощность двигателя

0}»> л.с./т Удельная мощность

км/ч Максимальная скорость

0}»> град/с Скорость поворота

0}»> град/с Скорость поворота башни Скорость гориз. наведения

Живучесть

0}»> ед. Прочность

/ / мм Бронирование корпуса

0}»> / 0}»> / 0}»> / / мм Бронирование башни

0, ‘specification_delta-good’: $data с Время ремонта ходовой

Наблюдение

0}»> м Обзор

0}»> м Дальность связи

Технические характеристики указаны для техники с уровнем обучения экипажа 100%.

Трактор Т-150К – устройство и технические характеристики

Главная

 < 0,05, критерий суммы рангов Уилкоксона, дополнительный рисунок 3). В то время как 5-ФУ чаще всего используется для лечения пациентов с раком молочной железы и толстой кишки, его также часто назначают пациентам с более редкими признаками рака, включая поджелудочную железу ( n  = 11), желчевыводящие пути ( n  = 6) и голову и шейка ( n  = 5). В этих типах рака мы выявили тот же мутагенный эффект 5-ФУ, что и при раке молочной железы и толстой кишки, хотя и незначительный из-за небольшого числа пациентов, что демонстрирует, что мутационный процесс 5-ФУ не зависит от ткани (дополнительная рис. 4) .

Мы наблюдали значительные колебания количества мутаций 5-ФУ на одного пациента, получавшего 5-ФУ, в диапазоне от 0 до примерно 15 000 мутаций как у пациентов с раком толстой кишки, так и у пациентов с раком молочной железы (дополнительная рис. 2). Это может быть объяснено различиями в фармакодинамике между пациентами, различиями в дозировке и продолжительности лечения 5-ФУ 25 , а также динамикой эволюции, но потенциально также и другими характеристиками опухоли. Действительно, анализ генов-возбудителей опухоли и генов-супрессоров ( n  = 378) обнаружили, что TP53 мутировавших раков накапливали больше мутаций 5-FU, чем TP53 диких типов рака, как в толстой кишке, так и в молочной железе ( P  < 0,05, критерий суммы рангов Вилкоксона, рис. 2d). Кроме того, было обнаружено, что фторурацил и капецитабин обладают мутагенным действием при раке толстой кишки, в то время как при раке молочной железы только капецитабин продемонстрировал повышенный мутагенный эффект (дополнительная рис. 5), что может отражать различия между обеими тканями в поглощении лекарств и схемах лечения. Несмотря на высокую вариабельность сигнатурных вкладов 5-FU между пациентами, мы наблюдали, что рак толстой кишки в целом имеет более высокий вклад 5-FU, чем рак молочной железы, со средним числом мутаций 1180 и 139.мутации соответственно.

О лежащей в основе клональной архитектуре мутационных событий можно судить по частоте вариантных аллелей (VAF), что дает более полное представление о времени активности конкретных мутационных процессов. По сравнению с клональными мутациями мы обнаружили примерно трехкратное увеличение относительного мутационного вклада сигнатуры 5-FU для субклональных мутаций ( P  < 0,05, критерий суммы рангов Уилкоксона, дополнительная рис.  6). Это указывает на то, что мутагенная активность, индуцированная 5-ФУ, более выражена в метастатических колониях и, следовательно, возникает на более поздней стадии развития опухоли, что соответствует времени диагностики рака и последующего лечения 5-ФУ.

Мутации 5-ФУ в парных биопсиях

В изученной когорте пациентов с метастатическим раком 53 пациента подверглись двум или более последовательным биопсиям, что может быть использовано для обеспечения более прямого подхода к изучению хронологической синхронизации активности мутационных процессов. Эта группа пациентов с множественными биопсиями состояла из различных типов рака, из которых 8 пациентов (колоректальный рак ( n  = 4) и рак молочной железы ( n  = 4)) получали системное лечение, связанное с 5-ФУ, после первой биопсии. и перед одной из следующих биопсий. Для каждого пациента мы определили профили мутаций обеих биопсий и исследовали разницу в количестве мутаций для каждого из 96 типов мутаций, полагая, что характерные типы мутаций 5-ФУ, особенно мутации C[T>G]T, будут увеличивать мутационную нагрузку. Регрессионный анализ со смешанными эффектами действительно выявил положительную корреляцию между нормализованным абсолютным количеством мутаций C[T>G]T из первой биопсии по сравнению со второй биопсией у пациентов, получавших 5-ФУ (линейная смешанная модель ANOVA; P ). < 0,05) (рис. 3). Более того, итерация этого статистического анализа для каждого из 96 возможных типов мутаций привела к значительным P — значения для всех типов мутаций, которые преобладают в ранее идентифицированной сигнатуре 5-ФУ (рис. 3). Следует отметить, что не было обнаружено корреляций между характерными типами мутаций 5-ФУ и любым другим назначаемым лечебным препаратом (карбоплатин, цисплатин, оксалиплатин, пазопаниб, пембролизумаб и пеметрексед), демонстрируя, что сигнатура высоко специфично индуцируется 5-ФУ (дополнительная рис. 7).

Рис. 3

Анализ мутационного обогащения для пациентов с множественными биопсиями у пациентов, получавших 5-ФУ, и пациентов, не получавших 5-ФУ. a Пример тепловой карты одного пациента, показывающий нормализованное количество мутаций каждого типа мутаций из первой (вверху) и второй (внизу) биопсии. Этот этап нормализации был выполнен на обоих образцах каждого пациента. b Регрессионный анализ линейной смешанной модели нормализованного количества мутаций одного типа мутаций (здесь мутации T[T>G]C) между пациентами, получавшими лечение 5-ФУ между двумя биопсиями, и пациентами, не получавшими лечение 5-ФУ между двумя биопсиями две биопсии (см. Также дополнительную рис. 7). В модели мы контролировали дозу и время воздействия, а также другие методы лечения, которые применялись к пациенту между первой и второй биопсией. P -значения были получены путем выполнения теста ANOVA на регрессионной модели. График прямоугольников и усов отображает первый и третий квартили (верхняя и нижняя части прямоугольника), медиану (вертикальная линия внутри прямоугольника), экстремумы (усы) и отдельные точки данных (одиночные точки). c Гистограмма, показывающая вероятность типа мутации для сигнатуры COSMIC 17, ниже полученных значений P из линейной смешанной модели для каждого типа мутации. Обратите внимание, что большинство типов мутаций, которые характеризуют сигнатуру COSMIC 17, демонстрируют значительное увеличение нормализованного количества мутаций у пациентов, получавших 5-FU, между обеими биопсиями

Изображение в натуральную величину

5-FU сигнатура напоминает COSMIC сигнатуру 17

Мы сравнили полученную 5-FU сигнатуру с известной COSMIC сигнатурой и обнаружили высокое сходство (коэффициент Пирсона  = 0,97; косинус sim = 0,97) с COSMIC сигнатурой 17 (Рис. 4а), который преимущественно обнаруживается при ранее не подвергавшихся лечению раке пищевода и желудка. Недавняя работа разделила сигнатуру COSMIC 17 на две составляющие сигнатуры (SBS17a, преимущественно характеризующийся мутациями T>C, и SBS17b, характеризующийся мутациями T>G) 19 , что предполагает два различных мутационных процесса. Однако полученный здесь спектр мутаций 5-FU in vitro показал мутации как T>C, так и T>G, как и в COSMIC сигнатуре 17, и, таким образом, наши результаты не дают доказательств того, что COSMIC сигнатура 17 демонстрирует образец двух независимых мутационных процессов.

Рис. 4

Сравнение сигнатуры 5-ФУ и сигнатуры COSMIC 17. a Тепловая карта, показывающая оценки косинусного сходства для спектра мутаций 5-ФУ in vitro и сигнатуры 5-ФУ, полученной in vivo, с сигнатурами COSMIC . Оба паттерна очень похожи на COSMIC Signature 17. b Смещение цепи репликации мутаций C[N>N]T в образцах толстой кишки и молочной железы, предварительно обработанных 5-ФУ, а не в образцах пищевода, предварительно обработанных 5-ФУ. Относительные уровни каждого типа замены оснований в левой (ведущей) и правой (отстающей) цепях ДНК показаны для каждой когорты. Звездочки указывают на значительную разницу ( P  < 0,05, двусторонний критерий Пуассона). c Контекст сигнатуры C[T>G]T из одиннадцати оснований представлен в виде графиков Logo. Мутированный T центрирован на каждом графике с фиксированными позициями слева (направление 5′) и справа (направление 3′) от положения мутации 9.0003

Полноразмерное изображение

Затем мы исследовали, включает ли сигнатура 5-FU более подробные молекулярные признаки, характерные для сигнатуры COSMIC 17. В соответствии с сигнатурой COSMIC 17 26,27 , мы также обнаружили Контекст мутации для мутаций C[T > G]T у пациентов с раком толстой кишки и молочной железы, предварительно обработанных 5-ФУ, в котором преобладают основания A/T в положениях -4, -3 и -2 от мутированного положения основания (рис. 4c) . Кроме того, было показано, что сигнатура COSMIC 17 демонстрирует более высокую скорость мутаций в отстающей цепи 9.0073 28,29 . В соответствии с этими сообщениями мы наблюдали сильное смещение цепи репликации в сторону отстающей цепи для типов мутаций C[T>G]T в предварительно обработанных 5-FU образцах рака толстой кишки и молочной железы (рис. 4b). Кроме того, мы также отметили незначительное смещение цепи транскрипции в образцах толстой кишки для мутаций C[T>G]T (дополнительная рис. 8). Учитывая это сильное совпадение характеристик обеих сигнатур, мы заключаем, что идентифицированная сигнатура 5-FU такая же, как сигнатура COSMIC 17, и не представляет собой новую сигнатуру.

Влияние на онкогенез

Мы наблюдали среднее увеличение (~ 20%) общего TMB для рака, обработанного 5-FU, по крайней мере, для пациентов с раком толстой кишки ( P  < 0,05, критерий суммы рангов Уилкоксона) (рис. 2д). Однако вклад 5-ФУ в ТМБ сильно различается у каждого пациента (дополнительная рис. 9), где у большинства пациентов с раком, предварительно получавших 5-ФУ (65% и 85% для толстой кишки и молочной железы, соответственно), наблюдается ограниченное влияние 5-ФУ на TMB (<10%) и только несколько пациентов (6% и 3% для толстой кишки и молочной железы, соответственно) демонстрируют существенный вклад 5-FU, которые влияют на TMB по крайней мере на 30%. Чтобы исследовать влияние этих мутаций 5-ФУ на эволюцию опухоли и прогрессирование заболевания, мы выбрали все субклональные синонимичные и несинонимичные мутации, которые, скорее всего, были вызваны воздействием 5-ФУ у каждого пациента (см. Методы) для количественной оценки онкогенных драйверных мутаций, вызванных по 5-ФУ (дополнительный рис. 10). Мы не наблюдали увеличения числа подтвержденных онкогенных драйверов 30 у пациентов с раком толстой кишки, предварительно обработанных 5-ФУ (5 управляющих мутаций), и молочной железы (5 управляющих мутаций) по сравнению с предварительно обработанными 5-ФУ пациентами с раком толстой кишки (2 управляющие мутации, P  = 0,56, точный критерий Фишера) и молочной железы ( 5 драйверных мутаций, P  = 0,26, точный критерий Фишера) больных раком (дополнительная таблица 2).

В попытке охарактеризовать гены, которые могли способствовать устойчивости к 5-ФУ, мы провели анализ dN/dS, в который были включены все однонуклеотидные мутации, а также небольшие вставки и делеции (INDELS), но не выявили значительно мутированных генов в в отличие от резистентности к гормональной терапии (например, ESR1 для груди и AR для простаты 17,31 ) и целенаправленное лечение (например, вторичные мутации BRAF при лечении меланомы вемурафенибом 32 и вторичные мутации EGFR при лечении ингибиторами EGFR 33 ).

Затем мы исследовали случаи потери функции (LOF) и усиления функции (GOF) ключевых ферментов метаболических путей пиримидинов. TYMS считается ключевой терапевтической мишенью для 5-ФУ, и сверхэкспрессия его гена была связана с устойчивостью к 5-ФУ как в экспериментах in vitro, так и в экспериментах in vivo 34,35 . TYMS не показал мутаций LOF в когорте молочной железы и колоректального рака, подтверждая выводы о том, что TYMS является важным геном 36 . С другой стороны, события GOF TYMS посредством прироста числа копий были обнаружены у предварительно леченных 5-ФУ пациентов с раком толстой кишки ( n  = 44 из 231) по сравнению с пациентами, не получавшими лечения ( n  = 8 из 121). ) ( P  < 0,05, точный критерий Фишера) (дополнительный рисунок 11), хотя этого не наблюдалось у пациентов с раком молочной железы. Это указывает на избирательное давление в сторону повышения уровня активности TYMS после введения 5-FU. Уровень числа копий TYMS , по-видимому, обратно коррелирует с абсолютным вкладом паттерна 5-FU (дополнительная рис. 11), что может свидетельствовать о том, что избыточная экспрессия TYMS может блокировать мутационный процесс 5-FU путем преодоления связывания 5-FdUMP одним лишь количеством TYMS. белок.

Интересно отметить, что, как мы показали в экспериментах с органоидами, нормальные клетки также накапливают мутации 5-ФУ. Следовательно, можно постулировать, что не только раковые клетки, но и любые другие клетки организма, подвергшиеся воздействию 5-ФУ, могут накапливать мутации, приводящие к возникновению вторичных злокачественных новообразований. Чтобы количественно оценить этот риск, мы смоделировали вероятность появления мутации, вызывающей рак, в результате лечения 5-ФУ, используя контекст конкретной мутации 5-ФУ и наблюдаемую in vivo среднюю скорость мутации (дополнительная рис. 12). По оценкам этой модели, около 300 онкогенных мутаций вводятся in vivo за 10 9 лет. 0073 8 стволовых клеток толстой кишки на лечение 5-ФУ, что в 50 раз выше, чем в нормальных условиях в результате мутационных процессов in vivo, связанных со старением. Таким образом, один полный цикл лечения 5-ФУ отражает «нормальное» накопление мутаций в стволовых клетках толстой кишки примерно за 20 лет 16 . Таким образом, последствия введения 5-ФУ могут быть ограниченными для пациентов старше 60–70 лет, но могут быть значительными для онкологических больных в относительно молодом возрасте (20–30 лет). Кроме того, пациенты, несущие варианты зародышевой предрасположенности (например, мутация APC при синдроме FAP, приводящая к развитию опухолей в относительно молодом возрасте), имеют повышенный риск повторного поражения и могут быть противопоказанием для лечения 5-FU. Мы также смоделировали этот сценарий и обнаружили 20-кратное увеличение риска по сравнению с нелечеными пациентами, что эквивалентно снижению среднего возраста начала развития опухоли у пациентов с САП на 10 лет.

Обсуждение

Здесь мы демонстрируем причинно-следственную связь между лечением 5-ФУ и COSMIC сигнатурой 17, характеризующейся заменами оснований C[T > G]T.

Этот вывод отличается от предыдущего исследования, в котором не было обнаружено измеримого мутагенного эффекта воздействия 5-ФУ на культивируемые куриные лимфобласты 37 . Это несоответствие может быть связано с различиями в условиях эксперимента (доза 5-ФУ, обнаружение мутаций) или в используемых моделях in vitro. Действительно, известно, что нечеловеческие клеточные линии различаются по восприимчивости к повреждению ДНК 38 , напр. воздействие афлатоксина на клеточные линии, опухоли мыши и опухоли человека приводит к большому разнообразию профилей мутаций 39 . Аналогичным образом, цисплатиновые сигнатуры, характерные для клеточных линий различных модельных организмов 12,37 , не повторяют цисплатиновые паттерны, недавно обнаруженные при раке человека 11,19 .

Поскольку 5-ФУ структурно подобен тимидиновым и урациловым нуклеотидам, и ранее было показано, что он препятствует биосинтезу нуклеотидов и пулам нуклеотидов 40,41,42 ожидалось мутагенное действие 5-ФУ. Однако сильное сходство с ранее описанной сигнатурой, которая уже была связана с другим потенциально лежащим в основе механизмом, было неожиданным. КОСМИЧЕСКАЯ сигнатура 17 является отличительной чертой рака пищевода и желудка, и предполагается, что наличие желудочного рефлюксата является ответственным мутагеном при этих типах рака. Высокие характеристики COSMIC 17 иногда обнаруживаются у пациентов, не получавших 5-ФУ, у которых также диагностированы другие типы рака 9,23 . Например, всестороннее исследование выявило внутриопухолевую гетерогенность трех ранее не леченных колоректальных опухолей, одна из которых показала обширную сигнатуру 17 вклад 43 . Таким образом, сигнатура 17 отражает последствия мутационного процесса, который может быть запущен несколькими триггерами, включая воздействие 5-ФУ.

В недавней работе было высказано предположение, что сигнатура COSMIC 17 отражает мутагенные последствия присутствия окисленных нуклеотидов dGTP в пуле нуклеотидов 29 . Действительно, ряд исследований показал, что присутствие окисленных гуаниновых нуклеотидов (8-оксо-dGTP) увеличивает частоту мутаций T>G 44,45 . Соответственно, было показано, что ингибирование ферментов, ответственных за удаление окисленных нуклеотидов, таких как MTh2, MTh3 и NUDT5, также способствует мутациям T>G 46 . Кроме того, контекст фланкирующей последовательности доминантного типа мутации Signature 17 отражает контекст доминирующего типа мутации Signature 18. Этот мутационный процесс был связан с прямым окислением гуанина, расположенного внутри ДНК 9.0073 47,48 . Следовательно, заманчиво предположить, что окисление dGTP в пуле нуклеотидов лежит в основе COSMIC Signature 17. Таким образом, присутствие желчного рефлюкса может быть правдоподобным объяснением повышенных уровней 8-оксо-dGTP при раке пищевода 49 . Однако недавнее исследование показало, что рефлюксат желчи сам по себе не генерирует 8-оксо-дГТФ, но желчной кислоте также требуется кислая среда для стимулирования производства 8-оксо-дГТФ. Это было обнаружено только в эпителиальных клетках предраковых клеток пищевода Барретта, которые получили переносчики желчных кислот, что потенциально объясняет, почему здоровые клетки пищевода не обнаруживают мутаций Signature 17 49,50,51 . На основании этого можно предположить, что воздействие 5-ФУ индуцирует аналогичную среду окислительного стресса в клетке, которая генерирует 8-оксо-дГТФ, тем самым стимулируя мутации T>G в контексте C[T>G]T. В соответствии с этим обработка 5-ФУ менее цитотоксична в сочетании с антиоксидантами , 52, , а выработка АФК напрямую коррелирует с обработкой 5-ФУ , 53,54, .

Альтернативное объяснение лежащего в основе мутационного процесса COSMIC Signature 17, наблюдаемого у пациентов, получавших 5-FU, может быть связано с дисбалансом пула нуклеотидов из-за ингибирования TYMS, которое считается основной мишенью для 5-FU. Метаболит 5-FU 5-FdUMP препятствует синтезу dTMP, что приводит к истощению dTTP в пуле нуклеотидов 55,56 и нарушение биосинтеза dTMP приводит к ускорению включения геномного дезоксиуридинтрифосфата (dUTP) 57,58 . Наряду с dUTPs, родственный 5-FU побочный продукт 5-FdUTP может быть включен во время репликации, что приводит к накоплению пар оснований U:A и 5-FU:A 56 . Эти типы мутаций в значительной степени повторяют сигнатуру 17, и по этой причине дисбаланс нуклеотидов за счет ингибирования TYMS также является вероятной причиной наблюдаемых здесь мутаций 5-FU, хотя сильное сходство с процессом, активным при раке пищевода, нелегко объяснить. В любом случае потребуется дальнейшее экспериментальное наблюдение, чтобы проанализировать лежащие в основе молекулярные механизмы и сделать вывод о том, отвечает ли один мутационный механизм за накопление мутаций, специфичных для 5-ФУ, или же сигнатура 5-ФУ является результатом нескольких мутационных процессов, действующих одновременно. на геном (например, 8-оксо-dGTP, dUTP и 5-FdUTP), которые сопровождаются механизмами репарации ДНК (например, удаление урацила с помощью урацил-ДНК-гликозилазы [UDG]). Действительно, недавняя работа показала, что механизм репарации базовой эксцизионной ДНК избирательно исправляет мутации Signature 17 в зависимости от его положения вокруг нуклеосомы 9.0073 59 . Участие репарации ДНК может также объяснить, почему опухоли с дефицитом пути регуляции контрольной точки повреждения ДНК p53 накапливают больше мутаций 5-FU. Интересно, что недавно было показано, что опухоли молочной железы с высоким вкладом мутаций Signature 17 имеют плохой прогноз 60 .

Тем не менее, мы обнаружили, что мутационный вклад введения 5-ФУ не оказывает большого влияния на общее мутационное бремя опухоли и драйверный ландшафт рака у большинства пациентов. Однако, поскольку механизмы, вызывающие резистентность к 5-ФУ, еще предстоит выяснить, нельзя исключать, что индуцированные мутации вносят свой вклад в этот процесс.

Кроме того, мы подсчитали, что молодые люди, перенесшие рак, демонстрируют повышенный риск развития вторичных злокачественных новообразований, связанных с химиотерапией, поскольку 5-ФУ может ускорить скорость появления новых онкогенных мутаций в нормальных клетках. Поэтому лица, принимающие решения о лечении, должны быть осведомлены о повышенных факторах риска при назначении 5-ФУ онкологическим больным в относительно молодом возрасте 61,62 .

Здесь мы показали, что введение фторпиримидинов активирует мутационный процесс, который приводит к очень характерным мутационным сигнатурам и, таким образом, вносит свой вклад в мутационный ландшафт человеческих (раковых) клеток. Более того, наши результаты показывают, что разные триггеры или процессы могут быть причиной очень похожих мутационных сигнатур. Выводы из этого исследования могут послужить основой для будущих исследований, чтобы выяснить, когда и как эти мутагенные агенты сходятся в сходных молекулярных механизмах.

Методы

Когорта пациентов

Мы выбрали пациентов клинических исследований CPCT-02 (NCT01855477) и DRUP (NCT024), которые были одобрены комитетами по медицинской этике (METC) Медицинского центра Университета Утрехта и Института рака Нидерландов. , соответственно. Эта национальная инициатива включает около 50 онкологических центров из Нидерландов и направлена ​​на улучшение индивидуального лечения рака. С этой целью Медицинский фонд Хартвиг ​​секвенирует и характеризует геномный ландшафт большого числа пациентов. Кроме того, данные геномики объединяются с клиническими данными, которые состоят из типа первичной опухоли, местоположения биопсии, пола, типа предварительной обработки до биопсии и типа лечения после биопсии. Подробное описание консорциума и всей когорты пациентов подробно описано Priestley et al. 17 . Для этого исследования мы выбрали рак с первичной локализацией опухоли в молочной железе, толстой кишке и пищеводе. Затем мы также включили все идентификаторы образцов, независимо от локализации первичной опухоли, в которых было выполнено как минимум 2 биопсии. Образцы, для которых предварительная обработка не была задокументирована (имеет SystemicPreTreatment = NA), были исключены из этого исследования. Все используемые в этом исследовании идентификаторы образцов можно найти в нашем репозитории GitHub (https://github.com/UMCUGenetics/5FU/blob/master/data/invivo/Used_Sample_IDs.txt).

Культивирование органоидов

Медицинский этический комитет UMC Utrecht (METC UMCU) получил подписанное разрешение на использование штамма STE072 линии органоидов тонкой кишки человека по протоколу STEM (METC 10/402). Эти изогенные органоиды тонкой кишки здорового человека культивировали, как описано ранее 15 . Вкратце, органоиды выращивали на среде Complete Human Intestinal Organoid (CHIO) с добавлением 30% Adv+++ (Advanced DMEM F12 [Thermofisher], с добавлением глутамакса [1%, Thermofisher], гепеса [10  мМ, Thermofisher], пенициллина/стрептомицина. [1%, Thermofisher]), собственного производства Wnt (50%) 63 и R-спондин (20%) 63 , добавка B27 (1×, Thermofisher), никотинамид (10 мМ Sigma), N-ацетилцистеин (1,25 мМ, Sigma), примоцин (0,1   мг/мл, Invivogen) , A83–01 (0,5 мкМ, Tocris Bioscience), рекомбинантный ноггин (0,1 мкг/мл, Peprotech), SB202190 (10 мкМ, Sigma) и hEGF (50 нг/мл, Peprotech). Органоиды заключали в матригель и обновляли среду каждые 2–3 дня. Серию титрования проводили в пределах от 0 до 100 мкМ 5-ФУ (0, 3,13, 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 мкМ). Выбранная концентрация 6,25 мкМ была такой, при которой примерно 50% органоидов продолжали расти после 5 циклов обработки. Выбранная концентрация (т. е. 6,25 мкМ) ниже, чем часто используемая в экспериментах по острому дозированию, поскольку было обнаружено, что эти условия убивают или стареют все клетки. Среду CHIO, содержащую 6,25 мкМ 5-ФУ, добавляли к органоидам через 5 дней после посева в течение 3 дней, после чего среду, содержащую 5-ФУ, обновляли средой CHIO, не содержащей 5-ФУ, в течение двух дней подряд. Затем органоиды оставляли отдыхать на 2 дня. Этот 7-дневный цикл обработки повторяли в течение 5 недель, после чего среду снова заменяли стандартной средой и органоиды оставляли в покое еще на один день. Органоиды затем диссоциировали на отдельные клетки путем трипсинизации и высевали в серии ограниченных разведений. Это было дополнено средой CHIO, содержащей ингибитор ROCK (10 мкМ, Abmole) и добавку для клонирования и восстановления клеток hES (1×, Tebu-Bio). Впоследствии отдельные клональные органоиды были отобраны вручную и расширены, чтобы получить достаточно материала для WGS.

Выделение ДНК и WGS линий органоидов

Органоиды диссоциировали и выделяли ДНК с использованием мини-набора QiaSymphony DSP DNA (Qiagen, кат. №

6). Библиотеки готовили с использованием набора для подготовки нанобиблиотек Truseq DNA (Illumina, кат. № 20015964). Секвенирование парных концов было выполнено (2 × 150 bp) на сгенерированных библиотеках с 30-кратным охватом с использованием Illumina HiSeq Xten в Hartwig Medical Foundation.

Вызов соматических мутаций

Данные о соматических мутациях проекта CPCT и DRUP были любезно предоставлены HMF 1 сентября 2018 г. Чтобы исключить различия в точности и чувствительности рабочих процессов соматических вызовов между данными in vivo и in vitro, мы вытащили HMF рабочий процесс соматической мутации с https://github. com/hartwigmedical/pipeline и установил конвейер локально с помощью GNU Guix с рецептом с https://github.com/UMCUGenetics/guix-additions. Полное описание конвейера дано Priestley et al. 17 , а подробности и настройки всех инструментов можно найти на их странице Github. Вкратце, прочтения последовательности картировали относительно эталонного генома человека GRCh47 с использованием выравнивания Берроуза-Уилера (BWA-MEM) v0.7.5a 64 . Впоследствии были определены соматические замены одиночных оснований (SBS) и небольшие вставки и делеции (INDELS) путем предоставления данных секвенирования генотипа и опухоли (или органоида для анализа in vitro) в Strelka v1.0.14 65 с корректировками, как описано в другом месте 17 . Чтобы получить высококачественные соматические мутации, которые можно отнести к воздействию 5-FU в органоидных линиях, мы охарактеризовали мутации, которые накопились между последовательным этапом клональной экспансии. Таким образом, мы рассматривали только соматические мутации с частотой вариантного аллеля от 0,3 до 0,7, поскольку мутации, выходящие за пределы этого диапазона, потенциально индуцировались in vitro после стадии клонирования.

Анализ сигнатур мутаций

Выделение сигнатур мутаций de novo проводили с использованием пакета NMF (v0.21.0) со 100 итерациями 18 . Неотрицательная матричная факторизация (NMF) — это неконтролируемый подход, который разлагает многомерные наборы данных на уменьшенное количество значимых шаблонов. Для образцов in vivo мы использовали NMF в когорте рака толстой кишки и молочной железы, включая две линии органоидов, подвергшихся воздействию 5-ФУ, и шесть линий органоидов, которые культивировались в идентичной среде в течение 140–146 дней. Чтобы охарактеризовать оптимальное количество паттернов, мы сравнили коэффициент кофенетической корреляции в диапазоне возможных сигнатур и присвоили шестнадцать сигнатур de novo. Этот набор извлеченных de novo сигнатур сравнивали с мутационными сигнатурами рака COSMIC (http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic/signatures), с расширенным списком мутационных сигнатур 19 и сигнатуры из других исследований 20,21 с использованием косинусного сходства из пакета Mutation Patterns R в качестве меры близости 66 . Мы также использовали мутационные паттерны для определения абсолютного вклада каждой полученной de novo сигнатуры для метастатической и первичной когорт. Вкратце, вектор из 96 подсчетов тринуклеотидного контекста для каждого образца был подобран с использованием неотрицательной регрессии наименьших квадратов к матрице 96 × n (где n — количество сигнатур), состоящей из вероятностей тринуклеотидного контекста для каждой сигнатуры. Относительный вклад каждой сигнатуры рассчитывали путем деления абсолютных значений на общее количество мутаций (т.е. мутационную нагрузку опухоли) в образце.

Парные биопсии

Чтобы проверить, было ли число мутаций, специфичных для 5-ФУ, выше в образце, биопсийном после лечения 5-ФУ, чем в образце до лечения, мы сначала составили таблицу подсчета 96 мутаций для каждого образца. Затем мы нормализовали абсолютное количество мутаций для каждого набора парных образцов на пациента, используя алгоритм медианного отношения из пакета Deseq2 67 . Впоследствии мы выполнили линейный анализ смешанных эффектов с использованием пакета nlme R 9.0073 68 для каждого типа мутации, чтобы оценить взаимосвязь между нормализованным количеством мутаций для каждого типа мутации и лечением. Мы ввели в модель все различные лечебные препараты, которые вводили как минимум трем пациентам после первой биопсии (5-ФУ, карбоплатин, цисплатин, оксалиплатин, пазопаниб, пембролизумаб и пеметрексед), и добавили случайные эффекты для корректировки времени воздействия и дозы. для каждого лечебного препарата, а также фармакогенетика на уровне пациента. Мы повторили этот анализ, используя относительное количество мутаций для каждого типа мутаций.

Анализ плоидности и числа копий

Мы использовали PURPLE 17 для получения высококачественных областей соматической плоидности и числа копий (CN) (https://github.com/hartwigmedical/hmftools/tree/master/purity-ploidy-estimator ). Вкратце, этот инструмент объединяет частоту B-аллеля (BAF), глубину считывания и структурные варианты для оценки чистоты и профиля CN образца опухоли.

Клональность

Определение клональности каждой мутации было взято из Priestley et al. 17 . Вкратце, локальный уровень плоидности каждого варианта рассчитывали путем умножения показателя аллеля с поправкой на опухоль, полученного из PURPLE, на уровень локального числа копий. Все варианты с оценкой выше 1 считаются клональными. Варианты, демонстрирующие оценку ниже 1, искали для субклонального пика с использованием оценки плотности ядра с шириной полосы ядра 0,05 после построения показателей плоидности вариантов для всех вариантов образца. Все варианты, присутствующие в пиках ниже пика плоидности = 1, рассматривались как субклональные мутации. Образцы, имеющие не менее 500 субклональных мутаций и демонстрирующие общий вклад 5-ФУ (не менее 5%), были включены в субклональный анализ. 96}}} \right)}}$$

(1)

В этом исследовании мы исключили гипермутантные образцы (>10 мутаций/Mbp), как определено Campbell et al. 69 , так как образцы гипермутантов влияют как на абсолютный, так и на относительный анализ вклада мутаций.

Обнаружение значительно мутировавших генов

Используя все варианты SBS и INDEL из генов, кодирующих белок, мы запустили dNdScv 51 , чтобы найти значительно мутировавшие гены, используя все варианты SBS и INDEL из генов, кодирующих белок. Эта модель может тестировать нормализованное соотношение каждого несинонимичного типа мутации в отдельности (миссенс, нонсенс и сплайсинг) по сравнению с фоновыми (синонимичными) мутациями, в то же время корректируя состав последовательности и мутационные сигнатуры. Глобальный q -значение ≤0,1 использовали для идентификации статистически значимых генов-драйверов. Был проведен точный тест Фишера post hoc, чтобы оценить, увеличилось ли количество мутаций отдельных генов между двумя когортами.

Смещение цепи транскрипции и репликации

Для сравнения смещения цепи репликации и транскрипции между когортами мы отобрали образцы с высоким вкладом COSMIC Signature 17 (абсолютный вклад >2000 мутаций и относительный вклад >25% (предобработанная 5-FU толстая кишка 9). 0105 n  = 41, грудь, предварительно обработанная 5-ФУ n  = 9, пищевод без предварительной обработки 5-ФУ n  = 34). Затем мы выбрали все точечные мутации, имеющие контекст C[N>N]T, где N может быть любым нуклеотидом, исходя из того, что большинство мутаций C[T>G]T можно отнести к воздействию 5-ФУ в толстой кишке и молочной железе. рак и независимые от 5-ФУ мутационные процессы при раке пищевода. Таким образом, типы мутаций, отличные от C[T>G]T, можно рассматривать как контроль.

Чтобы оценить цепь репликации ДНК, мы загрузили данные секвенирования репликации (Replic-Seq) от Tomkova et al. 29 , который охарактеризовал профили времени репликации от Haradhvala 70 . Как и в Tomkova et al., мы использовали информацию о нити репликации областей размером 1 Мбп слева и справа от каждого источника 29 . Затем мы создали матрицу подсчета мутаций 12 (6 тринуклеотидов × 2 нити) для каждого образца с информацией о нити репликации, используя пакет Mutation Patterns R 66 . После подсчета количества мутаций на каждой цепи в зависимости от типа рака и типа мутации был проведен критерий Пуассона на асимметрию цепи для проверки значимости. Точно так же была создана матрица подсчета мутаций из 12, содержащая информацию о цепях транскрипции всех точечных мутаций с контекстом C[N>N]T, которые попадают в тело гена. Транскрибируемые единицы всех кодирующих белок генов основаны на Ensembl v75 (hg19), включая интроны и нетранслируемые области. После оценки частоты мутаций в транскрибируемых и нетранскрибируемых цепях также выполняли тест Пуассона на асимметрию цепей для проверки значимости. Этот пакет также содержит функции для определения времени репликации. Короче говоря, были проверены все точечные мутации, локализованы ли они в промежуточной, ранней или поздней репликационной области. Анализ обогащения или истощения точечных мутаций в этих областях генома выполняли с использованием функций геномного распределения из пакета Mutation Patterns R 9.0073 66 .

Ассоциация точечных мутаций с мутационными моделями

Мы оценили, какой мутационный процесс наиболее вероятен в происхождении каждой точечной мутации, как это ранее было сделано в Letouzé et al. 28 . При этом мы учитывали категорию мутации (тип замены и тринуклеотидный контекст (TNC)) и относительный вклад каждой мутационной сигнатуры из каждого образца опухоли. Вероятность точечной мутации с определенным контекстом из 96 тринуклеотидов (TNC), индуцированной сигнатурой мутации X из образца Y, может быть выражена следующим образом: 9{Sig\,x}\) вероятностей каждой мутации всей когорты. Все мутации с оценкой выше 0,5 для данной сигнатуры считались происходящими из этой сигнатуры и вводились в dNdSCV для анализа селекции.

Риск мутации, вызывающей рак, вызванный 5-ФУ

Мы использовали количественные данные in vivo и качественные мутационные характеристики для моделирования количества онкогенных мутаций в зависимости от количества клеток в отсутствие отрицательного отбора. Мы применили следующую формулу: 9{{\ mathrm {активный}}} \ влево ( N \ вправо) = 0,015 \ cdot dp \ cdot N \ cdot \ mu \ cdot \ mathop {\ sum} \ nolimits_ {{\ begin {array} {* {20} {c}} {X \in \{C,T\}} \\ {\begin{array}{*{20}{c}} {Y \in \{A,C,G,T\}} \ \ {\begin{array}{*{20}{c}} {i,j \in \{A,C,G,T\} } \\ {X \ne Y} \end{массив}} \end {массив}} \end{массив}}} \left({P_{iXj \to Y} \cdot \frac{{n_{iXj \to Y}}}{L}}\right)$$

(3 )

где M активный количество мутаций, активирующих драйверные гены, dp истощение кодирующей последовательности (CDS), µ — это скорость мутации, N — количество ячеек, P IXJ> Y — шанс на I x J > Y Мутация на основе спецификации мутации, N 9 > > . iXj> Y — количество позиций, в которых мутация i X j  > Y приводит к активации онкогена, а L — длина CDS.

Мы использовали следующие параметры: 1,5% генома кодируют экзоны; Мутационное истощение (вероятно, из-за репарации) кодирующей последовательности составляет 0,309.4464 (результаты получены от Blokzijl et al. 16). В среднем 2000 дополнительных мутаций с сигнатурой 5-ФУ в год накапливаются в опухолях из-за лечения 5-ФУ (данные основаны на этом исследовании) — 40 мутаций накапливаются в год в отсутствие 5-ФУ (нормальный спектр мутаций in vivo, 25% ~ подпись 1 и 75% подпись 5 — результаты получены от Blokzijl et al., 16 ). Рак толстой кишки возникает в одной из 10 8 стволовых клеток толстой кишки 71 . Вероятность мутации сигнатуры 17 с включением тринуклеотидного контекста (предварительно обработанного 5-ФУ) и сигнатуры 1 (25%) + сигнатуры 5 (75%) для модели, не обработанной 5-ФУ; Список проверенных онкогенных мутаций (существует примерно 10 000 вариантов супрессоров и драйверов опухоли, полученный от Tamborero et al. 30 . Длина кодирующей последовательности клеток тонкого кишечника: 22563618  п.н.; Средняя продолжительность режима лечения 5-ФУ составляет 24 недели (12 циклов по 2 недели).

Сравнение с когортами, ранее не получавшими лечения рака

SBS были вызваны с использованием Varscan 2.0 и постфильтрованы с оценкой QSS выше 30. Полное описание этой когорты можно найти в Schütte et al. 22 . Обе когорты состоят из больных раком, ранее не получавших лечения.

Статистические данные

Если не указано иное, мы провели критерий суммы рангов Уилкоксона для сравнения непрерывных переменных (например, относительный или абсолютный вклад мутационных сигнатур по сравнению с получавшими и не получавшими лечение), а точный критерий Фишера использовался для оценки категорийных данных. (лечение против возникновения определенной мутации). Все статистические тесты были двусторонними и считались статистически значимыми при P  < 0,05. Для статистического анализа использовалась версия R 3. 4.4.

Сводка отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

Доступность данных

Данные WGS и соответствующие клинические данные были получены от Hartwig Medical Foundation и предоставлены под номером запроса данных DR-047. Как WGS, так и клинические данные находятся в свободном доступе для академического использования в Медицинском фонде Хартвига посредством стандартизированных процедур, а формы запросов можно найти по адресу https://www.hartwigmedicalfoundation.nl. Данные секвенирования человека обработанных 5-ФУ и контрольных линий органоидов были депонированы в Европейском архиве генома-фенома (http://www.ebi.ac.uk/ega/) под инвентарными номерами (EGAS0000100359).2 и (EGAS00001002955) соответственно. Для когорты первичного рака молочной железы мы использовали общедоступные соматические мутации из когорты BASIS (набор данных BRCA-EU с https://dcc.icgc.org/), которые были загружены с портала данных ICGC 2 августа 2017 г. Эта когорта состоит из 560 первичных раков молочной железы и ранее был подробно охарактеризован 23 . Соматические мутации 41 образца первичного рака толстой кишки были любезно предоставлены Институтом Макса Планка с подписанным соглашением о передаче данных и образцов (http://www.oncotrack.eu). Все другие данные, подтверждающие результаты этого исследования, доступны в статье и ее дополнительных информационных файлах, а также у соответствующего автора по обоснованному запросу. Сводка отчетов для этой статьи доступна в виде файла с дополнительной информацией.

Наличие кода

Весь код и отфильтрованные файлы vcf из линий органоидов, обработанных 5-FU, находятся в свободном доступе на https://github.com/UMCUGenetics/5FU.

Ссылки

  1. Лонгли, Д. Б., Харкин, Д. П. и Джонстон, П. Г. 5-фторурацил: механизмы действия и клинические стратегии. Нац. Преподобный Рак 3 , 330–338 (2003).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  2. Ezzeldin, H. & Diasio, R. Дефицит дигидропиримидиндегидрогеназы, фармакогенетический синдром, связанный с потенциально опасной для жизни токсичностью после введения 5-фторурацила. клин. Колоректальный рак 4 , 181–189 (2004).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  3. де Грамон, А. и др. Лейковорин и фторурацил с оксалиплатином или без него в качестве терапии первой линии при распространенном колоректальном раке. Дж. Клин. Онкол. 18 , 2938–2947 (2000).

    Артикул пабмед Google ученый

  4. Boige, V. et al. Фармакогенетическая оценка токсичности и исхода у пациентов с метастатическим колоректальным раком, получавших LV5FU2, FOLFOX и FOLFIRI: FFCD 2000-05. Дж. Клин. Онкол. 28 , 2556–2564 (2010).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  5. Кэмерон, Д. А., Габра, Х. и Леонард, Р. К. Непрерывное применение 5-фторурацила при лечении рака молочной железы. Бр. J. Рак 70 , 120–124 (1994).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  6. Sommer, H. & Santi, D.V. Очистка и аминокислотный анализ пептида активного центра тимидилатсинтетазы, содержащего ковалентно связанные 5-фтор-2′-дезоксиуридилат и метилентетрагидрофолат. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 57 , 689–695 (1974).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  7. Pettersen, H.S. et al. Инициируемая UNG эксцизионная репарация оснований является основным путем репарации 5-фторурацила в ДНК, но цитотоксичность 5-фторурацила зависит главным образом от включения РНК. Рез. нуклеиновых кислот. 39 , 8430–8444 (2011).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  8. Huehls, A.M. et al. Включенный в геном 5-фторурацил, который избегает репарации оснований, инициируемой UNG, блокирует репликацию ДНК и активирует гомологичную рекомбинацию. Мол. Фармакол. 89 , 53–62 (2016).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  9. Александров Л.Б. и др. Признаки мутационных процессов при раке человека. Природа 500 , 415–421 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  10. Филлипс, Д. Х. Спектры мутаций и сигнатуры мутаций: понимание этиологии рака и механизмов повреждения и восстановления ДНК. Восстановление ДНК 71 , 6–11 (2018).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  11. Бут, А. и др. Углубленная характеристика мутационной сигнатуры цисплатина в клеточных линиях человека, а также в опухолях пищевода и печени. Рез. генома. 28 , 654–665 (2018).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  12. Meier, B. et al. Секвенирование всего генома C. elegans выявило мутационные сигнатуры, связанные с канцерогенами и дефицитом репарации ДНК. Рез. генома. 24 , 1624–1636 (2014).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  13. Behjati, S. et al. Мутационные сигнатуры ионизирующего излучения при вторичных злокачественных опухолях. Нац. коммун. 7 , 12605 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  14. «>

    Дэвидсон, П. Р., Шерборн, А. Л., Тейлор, Б., Накамура, А. О. и Накамура, Дж. Л. Объединенный мутационный анализ идентифицирует связанные с ионизирующим излучением мутационные сигнатуры, сохраняющиеся между злокачественными новообразованиями мыши и человека. Науч. Респ. 7 , 7645 (2017).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  15. Джагер, М. и др. Измерение накопления мутаций в отдельных стволовых клетках взрослого человека путем полногеномного секвенирования органоидных культур. Нац. протокол 13 , 59–78 (2018).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  16. Блокзейл, Ф. и др. Накопление тканеспецифических мутаций в стволовых клетках взрослого человека в течение жизни. Природа 538 , 260–264 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  17. «>

    Пристли, П. и др. Полногеномный панраковый анализ метастатических солидных опухолей. bioRxiv 415133 https://doi.org/10.1101/415133 (2018).

  18. Gaujoux, R. & Seoighe, C. Гибкий пакет R для неотрицательной матричной факторизации. БМК Биоинформа. 11 , 367 (2010).

    Артикул Google ученый

  19. Александров Л.Б. и др. Репертуар мутационных сигнатур рака человека. bioRxiv 322859 https://doi.org/10.1101/322859 (2018).

  20. Lee-Six, H. et al. Ландшафт соматических мутаций в нормальных колоректальных эпителиальных клетках. bioRxiv 416800 https://doi.org/10.1101/416800 (2018 г.).

  21. Бут, А. и др. Анализ мутационных сигнатур азиатских OSCC показывает новую мутационную сигнатуру с исключительной специфичностью контекста последовательности. bioRxiv 368753 https://doi. org/10.1101/368753 (2018 г.).

  22. Schütte, M. et al. Молекулярная диссекция колоректального рака в доклинических моделях идентифицирует биомаркеры, предсказывающие чувствительность к ингибиторам EGFR. Нац. коммун. 8 , 14262 (2017).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  23. Ник-Зайнал, С. и др. Ландшафт соматических мутаций в 560 последовательностях полного генома рака молочной железы. Природа 534 , 47–54 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  24. Yates, L. R. et al. Геномная эволюция метастазов и рецидивов рака молочной железы. Раковая клетка 32 , 169–184.e7 (2017).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  25. «>

    Грэм, Дж. Л. 5-Фторурацил: сорок с лишним лет, и все еще тикает. Обзор его доклинических и клинических исследований. Инвест. New Drugs 18 , 299–313 (2000).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  26. Морганелла, С. и др. Топография мутационных процессов в геномах рака молочной железы. Нац. коммун. 7 , 11383 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  27. Secrier, M. et al. Мутационные сигнатуры при аденокарциноме пищевода определяют этиологически различные подгруппы, имеющие терапевтическое значение. Нац. Жене. 48 , 1131–1141 (2016).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  28. Letouzé, E. et al. Мутационные сигнатуры раскрывают динамическое взаимодействие факторов риска и клеточных процессов во время онкогенеза печени. Нац. коммун. 8 , 1315 (2017).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  29. Томкова М., Томек Дж., Криаучионис С. и Шустер-Бёклер Б. Распределение сигнатур мутаций зависит от времени репликации ДНК и асимметрии нитей. Геном Биол. 19 , 129 (2018).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  30. Тамбореро, Д. и др. Интерпретатор генома рака аннотирует биологическую и клиническую значимость опухолевых изменений. Геном Мед. 10 , 25 (2018).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  31. Зехир, А. и др. Опечатка: Мутационный ландшафт метастатического рака, выявленный в результате проспективного клинического секвенирования 10 000 пациентов. Нац. Мед. 23 , 1004 (2017).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  32. Poulikakos, P. I. et al. Резистентность к ингибиторам RAF опосредуется димеризацией аберрантно сплайсированного BRAF(V600E). Природа 480 , 387–390 (2011).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  33. Morgillo, F., Della Corte, C.M., Fasano, M. & Ciardiello, F. Механизмы устойчивости к препаратам, нацеленным на EGFR: рак легких. ESMO Open 1 , e000060 (2016).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  34. Watson, R.G. et al. Амплификация тимидилатсинтетазы у пациентов с метастатическим колоректальным раком, предварительно получавших химиотерапию на основе 5-фторурацила. евро. J. Рак 46 , 3358–3364 (2010).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  35. Интуйод, К. и др. FOXM1 модулирует чувствительность к 5-фторурацилу при холангиокарциноме через тимидилатсинтазу (TYMS): последствия разъединения оси FOXM1-TYMS при устойчивости к 5-ФУ. Смерть клеток Dis . 9 , 1185 (2018).

  36. Бломен В.А. и др. Генная эссенциальность и синтетическая летальность в гаплоидных клетках человека. Наука 350 , 1092–1096 (2015).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  37. Szikriszt, B. et al. Всестороннее исследование мутагенного воздействия распространенных цитотоксических веществ, вызывающих рак. Геном Биол. 17 , 99 (2016).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  38. «>

    MacRae, S.L. et al. Репарация ДНК у видов с экстремальными различиями в продолжительности жизни. Старение 7 , 1171–1184 (2015).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  39. Huang, M. N. et al. Мутационные сигнатуры афлатоксина в масштабе генома в клетках, мышах и опухолях человека. Рез. генома. 27 , 1475–1486 (2017).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  40. Myers, C.E., Young, R.C. & Chabner, B.A. Биохимические детерминанты ответа 5-фторурацила in vivo. Роль расширения пула дезоксиуридилата. Дж. Клин. Инвестировать. 56 , 1231–1238 (1975).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  41. Peters, GJ, Laurensse, EJ, van Groeningen, CJ, Meijer, S. & Pinedo, HM в Purine and Pyrimidine Metabolism in Man VI: Part A: Clinical and Molecular Biology (eds. Mikanagi, K. , Nishioka, K. & Kelley, W.N.) 439–445 (Springer US, 1989).

  42. Berger, F.G. & Berger, S.H. Тимидилатсинтаза как мишень химиотерапевтического препарата: где мы находимся через пятьдесят лет? Рак Биол. тер. 5 , 1238–1241 (2006).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  43. Roerink, S. F. et al. Внутриопухолевая диверсификация при колоректальном раке на уровне одной клетки. Природа 556 , 457–462 (2018).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  44. Хидака, К. и др. Специфичность мутаций, вызванных включением окисленных dNTP в ДНК ДНК-полимеразой человека eta. Восстановление ДНК 7 , 497–506 (2008).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  45. Иноуэ, М. и др. Индукция мутаций хромосомного гена в Escherichia coli путем прямого включения нуклеотидов, поврежденных окислительными процессами. Новый метод оценки мутагенеза поврежденных предшественников ДНК in vivo. Дж. Биол. хим. 273 , 11069–11074 (1998).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  46. Suzuki, T. & Kamiya, H. Мутации, вызванные 8-гидроксигуанином (8-оксо-7,8-дигидрогуанином), типичным окисленным основанием, в клетках млекопитающих. Гены Окружающая среда. 39 , 2 (2017).

    Артикул пабмед Google ученый

  47. Poetsch, A.R., Boulton, SJ & Luscombe, N.M. Геномный ландшафт окислительного повреждения и восстановления ДНК раскрывает региоселективную защиту от мутагенеза. Геном Биол. 19 , 215 (2018).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  48. Pilati, C. et al. Анализ сигнатур мутаций выявляет дефицит MUTYH при колоректальном раке и карциномах коры надпочечников. Дж. Патол. 242 , 10–15 (2017).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  49. Дворжак, К. и др. Желчные кислоты в сочетании с низким рН вызывают окислительный стресс и окислительное повреждение ДНК: значение для патогенеза пищевода Барретта. Gut 56 , 763–771 (2007).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  50. Yokoyama, A. et al. Возрастное ремоделирование эпителия пищевода мутировавшими факторами рака. Природа 565 , 312–317 (2019).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  51. «>

    Martincorena, I. et al. Универсальные закономерности отбора в раковых и соматических тканях. Сотовый 173 , 1823 (2018).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  52. Fu, Y. et al. Антиоксиданты снижают апоптотический эффект 5-Fu при раке толстой кишки, регулируя Src-зависимое фосфорилирование каспазы-7. Гибель клеток Dis. 5 , e983–e983 (2014 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  53. Focaccetti, C. et al. Влияние 5-фторурацила на морфологию, клеточный цикл, пролиферацию, апоптоз, аутофагию и продукцию АФК в эндотелиальных клетках и кардиомиоцитах. PLoS One 10 , e0115686 (2015 г.).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  54. «>

    Negrei, C. et al. Сигнатура экспрессии генов клеток рака толстой кишки в ответ на лечение 5-фторурацилом, оксалиплатином и фолиевой кислотой. Перед. Фармакол. 7 , 172 (2016).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  55. An, Q., Robins, P., Lindahl, T. & Barnes, D.E. 5-фторурацил, встроенный в ДНК, вырезается ДНК-гликозилазой Smug1 для снижения цитотоксичности лекарственного средства. Рак Res. 67 , 940–945 (2007).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  56. Паркер, Дж. Б. и Стиверс, Дж. Т. Динамика урацила и 5-фторурацила в ДНК. Биохимия 50 , 612–617 (2011).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  57. MacFarlane, A.J. et al. Ядерная локализация пути биосинтеза тимидилата de novo необходима для предотвращения накопления урацила в ДНК. Дж. Биол. хим. 286 , 44015–44022 (2011 г.).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  58. Вертесси, Б. Г. и Тот, Дж. Предотвращение проникновения урацила в ДНК: физиологическая роль, структура и каталитический механизм dUTPases. Согл. хим. Рез. 42 , 97–106 (2009).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  59. Пич, О. и др. Периодичность соматических и зародышевых мутаций соответствует ориентации малой бороздки ДНК вокруг нуклеосом. Cell 175 , 1074–1087.e18 (2018).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  60. Бертуччи, Ф. и др. Геномная характеристика метастатического рака молочной железы. Природа 569 , 560–564 (2019).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед Google ученый

  61. «>

    Райт, К. Д. и др. Фаза I исследования 5-фторурацила у детей и молодых людей с рецидивирующей эпендимомой. Нейро. Онкол. 17 , 1620–1627 (2015).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  62. Gladsjo, J. A., Alió Sáenz, A. B., Bergman, J., Kricorian, G. & Cunningham, B. B. 5% крем с 5-фторурацилом для лечения обыкновенной бородавки у детей. Педиатр. Дерматол. 26 , 279–285 (2009).

    Артикул пабмед Google ученый

  63. Брутье, Л. и др. Культивирование и создание самообновляющихся 3D-органоидов печени и поджелудочной железы взрослых людей и мышей и их генетические манипуляции. Нац. протокол 11 , 1724–1743 (2016).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  64. Ли, Х. и Дурбин, Р. Быстрое и точное выравнивание коротких считываний с преобразованием Берроуза-Уилера. Биоинформатика 25 , 1754–1760 (2009).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  65. Saunders, C. T. et al. Стрелка: точный соматический вызов малых вариантов из секвенированных пар опухолевых и нормальных образцов. Биоинформатика 28 , 1811–1817 (2012).

    КАС Статья пабмед Google ученый

  66. Блокзейл, Ф., Янссен, Р., ван Бокстель, Р. и Куппен, Э. Мутации: комплексный полногеномный анализ мутационных процессов. Геном Мед. 10 , 33 (2018).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  67. Лав, М. И., Хубер, В. и Андерс, С. Модерированная оценка изменения кратности и дисперсии для данных секвенирования РНК с помощью DESeq2. Геном Биол. 15 , 550 (2014).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  68. Эззе Ф. и Пинейро Дж. К. Линейные, обобщенные линейные и нелинейные модели смешанных эффектов. в Фармакометрия . 103–135

  69. Campbell, B.B. et al. Комплексный анализ гипермутаций у человека. Раковая клетка 171 , 1042–1056.e10 (2017).

    КАС Google ученый

  70. Haradhvala, N.J. et al. Асимметрия мутационных цепей в геномах рака раскрывает механизмы повреждения и восстановления ДНК. Cell 164 , 538–549 (2016).

    КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  71. Франк, С. А. Эволюция в области здравоохранения и медицины Коллоквиум Саклера: Соматическая эволюционная геномика: мутации в процессе развития вызывают весьма вариабельный генетический мозаицизм с риском рака и нейродегенерации. Проц. Натл акад. науч. США 107 (Приложение 1), 1725–1730 (2010 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

Загрузить ссылки

Благодарности

Эта публикация и лежащее в ее основе исследование стали возможными частично на основе данных, которые Медицинский фонд Хартвиг ​​и Центр персонализированного лечения рака (CPCT) предоставили исследованию. Мы также благодарим Сабину Миддендорп за то, что она поделилась линией кишечных органоидов. Кроме того, мы также хотели бы поблагодарить USEQ из UMCU за секвенирование линий органоидов. Наконец, мы особенно благодарны всем онкологическим больным, участвующим в проекте CPCT, за предоставление их данных для фундаментальных исследований рака. Эта работа выполнена при финансовой поддержке Oncode Institute и программы NWO zwaartekracht Cancer Genomics.nl, финансирующей EC 9.0003

Информация об авторе

Авторы и организации

  1. Центр молекулярной медицины и Институт Онкода, Университетский медицинский центр Утрехта, Universiteitsweg 100, 3584 CG, Утрехт, Нидерланды Janssen, Sander Boymans, Ewart Kuijk, Edwin Cuppen и Arne Van Hoeck

  2. Отделение медицинской онкологии, Онкологический институт Erasmus MC, Медицинский центр Университета Erasmus, Doctor Molewaterplein 40, 3015 GD, Роттердам, Нидерланды

    Джон В. М. Мартенс

  3. Центр персонализированного лечения рака, Роттердам, Нидерланды

    Джон В. М. Мартенс и Эдвин Куппен

  4. МАКСПЛЕКТИВНАЯ ИНСТИТУТА ДЕНЬ МОЛЕКУЛАНСКИЙ ГЕНЕТИКИ, IHNERSE 63, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14195, 14194, 14195, 14195, 14195, 14195, максимальный институт молекулярной генетики, Ihnestra. Laure Yaspo

  5. Медицинский фонд Хартвиг, Австралия, Сидней, Австралия

    Питер Пристли

  6. Медицинский фонд Хартвиг, Научный парк 408, 1098 XH, Амстердам, Нидерланды

    Edwin Cuppen

Авторы

  1. Sharon Christensen

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  2. Bastiaan Van der Roest

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  3. Николь Бесселинк

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  4. Roel Janssen

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  5. Sander Boymans

    Посмотреть публикации автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  6. John W. M. Martens

    Посмотреть публикации авторов

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  7. Marie-Laure Yaspo

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  8. Peter Priestley

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  9. Ewart Kuijk

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

  10. Edwin Cuppen

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

  11. Arne Van Hoeck

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Contributions

S.C., EK, EC и A.V.H разработали исследование. С.К., Н.Б. и Э.К. провел мокрые лабораторные эксперименты. Б.В.д.Р. и А.В.Х. проанализировал данные. Р.Дж. и С.Б. обеспечена биоинформационная поддержка. J.W.M.M., M-L.Y. и П.П. предоставлены данные пациента. Б.В.д.Р. и А.В.Х. проанализировали данные пациентов. С.К., Б.В.д.Р. и А.В.Х. разработал теоретическое моделирование. С.К., А.В.Х. и EC написали статью. Э.К. и А.В.Х. руководил исследованием. Все авторы вычитали, внесли замечания и одобрили статью.

Автор, ответственный за переписку

Эдвин Куппен.

Заявление об этике

Конкурирующие интересы

Авторы не заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Дополнительная информация

Информация о рецензировании Nature Communications благодарит Moritz Gerstung, Maria Secrier и других анонимных рецензентов за их вклад в рецензирование этой работы. Доступны отчеты рецензентов.

Примечание издателя Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Дополнительная информация

Дополнительная информация

Файл рецензирования

РЕЗЮМЕ Отчетности

Права и разрешения

Открытие доступа . , совместное использование, адаптация, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате, при условии, что вы укажете первоначальных авторов и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Изображения или другие сторонние материалы в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной строке материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons статьи, а ваше предполагаемое использование не разрешено законом или выходит за рамки разрешенного использования, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Перепечатка и разрешения

Об этой статье

Дополнительная литература

  • Мутационные сигнатуры являются маркерами лекарственной чувствительности раковых клеток.

    • Юрица Леватич
    • Марина Сальвадорес
    • Фрэн Супек

    Nature Communications (2022)

  • Классификация тканей происхождения на основе машинного обучения для рака с неизвестной первичной диагностикой с использованием признаков полногеномных мутаций

    • Луан Нгуен
    • Арне Ван Хек
    • Эдвин Куппен

    Nature Communications (2022)

  • h4K27me3 обусловливает химиотолерантность при тройном негативном раке молочной железы

    • Жюстин Марсолье
    • Паком Промпси
    • Селин Валло

    Природа Генетика (2022)

  • Сравнительный анализ мутаций гена рака с использованием таргетного секвенирования при первичном и рецидивном раке желудка после химиотерапии

    • Ён-Джу Ху
    • Сун-Юп Чо
    • Джу-Хо Ли

    Гены и геномика (2022)

  • Разнообразные мутационные ландшафты в лимфоцитах человека

    • Хизер Э. Мачадо
    • Эмили Митчелл
    • Питер Дж. Кэмпбелл

    Природа (2022)

Комментарии

Отправляя комментарий, вы соглашаетесь соблюдать наши Условия и Правила сообщества. Если вы обнаружите что-то оскорбительное или не соответствующее нашим условиям или правилам, отметьте это как неприемлемое.

Антиген CD21 в опухолевых лимфоидных клетках Т-линии: характерная экспрессия на стадии 9 тимуса0001

. 1994 г., февраль; 45 (2): 150-5.

doi: 10.1002/ajh.2830450211.

Э Тацуми 1 , Н. Йонеда, С. Кавано, Н. Ямагути

принадлежность

  • 1 Кафедра лабораторной медицины, Медицинский факультет Университета Кобе, Япония.
  • PMID: 7511331
  • DOI: 10.1002/аджх.2830450211

E Тацуми и др. Am J Гематол. 1994 фев.

. 1994 г., февраль; 45 (2): 150-5.

doi: 10.1002/ajh.2830450211.

Авторы

Э Тацуми 1 , Н. Йонеда, С. Кавано, Н. Ямагути

принадлежность

  • 1 Кафедра лабораторной медицины, Медицинский факультет Университета Кобе, Япония.
  • PMID: 7511331
  • DOI: 10.1002/аджх.2830450211

Абстрактный

Экспрессию антигена CD21, рецептора C3d-фрагмента комплемента и вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), исследовали в общей сложности в 85 случаях неопластических лимфоидных клеток, включая 39 случаев острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ)/лимфобластной линии Т-лимфоцитов. лимфомы (LBL), хотя антиген CD21 обычно рассматривается как антиген пан-В. Антиген CD21 экспрессировался одним из восьми случаев неопластических лимфоидных клеток, экспрессирующих антиген CD7 в виде единственного пан-Т-антигена, тремя из 20 случаев про- или ранней стадии тимуса (CD7+ CD5+ CD2-, CD7+ CD5- CD2+ , или CD7+ CD5+ CD2+, и 10 из 11 случаев тимической стадии (CD3+/- CD4+ CD8+), но ни одного случая поздней тимической стадии (CD3+ CD4+ CD8-) T-ALL/LBL клеток Антиген CD21 не экспрессировался любым из 11 случаев Т-клеточного лейкоза взрослых (АТЛ) или двух случаев хронического лейкоза Т-линии. Не более 4% нормальных тимоцитов, полученных от семи младенцев или детей, экспрессировали антиген CD21. В то время как только очень ограниченная популяция нормальных тимоцитов экспрессирует антиген CD21, клетки T-ALL/LBL на стадии тимуса характерно экспрессируют антиген CD21 в отличие от про- или ранних ALL/LBL или опухолевых Т-клеток на периферической стадии.Полезно оценить экспрессию антигена CD21 для определения стадий дифференцировки при T-ALL/LBL. Кроме того, эти наблюдения примечательны, учитывая возможность того, что сообщенные Т-клеточные лимфомы, несущие EBV, являются результатом проникновения EBV в EBV-негативные опухолевые Т-клетки.

Похожие статьи

  • Характер экспрессии изоформных антигенов CD45 RA/RO в новообразованиях Т-линии.

    Кавано С., Тацуми Э., Йонеда Н., Тани А., Накамура Ф. Кавано С. и др. Am J Гематол. 1995 г., май; 49(1):6–14. doi: 10.1002/ajh.28304. Am J Гематол. 1995. PMID: 7741140

  • Определение происхождения лимфобластов CD7+ CD5-CD2- и CD7+ CD5+ CD2-: исследования фенотипа, генотипа и экспрессии генов миелопероксидазы, CD3-эпсилон и CD3-дельта.

    Йонеда Н., Тацуми Э., Тешигавара К., Нагата С., Нагано Т., Кисимото Ю., Кимура Т., Ясунага К., Ямагути Н. Йонеда Н. и др. Am J Гематол. 1994 г., апрель; 45(4):310-20. doi: 10.1002/ajh.2830450408. Am J Гематол. 1994. PMID: 7513945

  • [Фенотипический анализ незрелых клеток Т-линии].

    Тацуми Э., Йонеда Н., Кавано С., Ямагути Н. Тацуми Э. и др. Риншо Бёри. 1993 сент; 41 (9): 966-75. Риншо Бёри. 1993. PMID: 8254974 Японский.

  • [Вирус Эпштейна-Барр (EBV)-положительная линия NK-клеток YT и ALL/LBL NK-линии].

    Тани А., Тацуми Э., Накамура Ф., Кумагаи С. Тани А. и др. Риншо Бёри. 1996 г., октябрь; 44 (10): 936-43. Риншо Бёри. 1996. PMID: 8

    3 Обзор. Японский.

  • Лимфобластная лимфома.

    Кортелаццо С., Понцони М., Феррери А.Дж., Хельцер Д. Кортелаццо С. и др. Crit Rev Oncol Hematol. 2011 г., сен; 79(3):330-43. doi: 10.1016/j.critrevonc.2010.12.003. Epub 2011 26 января. Crit Rev Oncol Hematol. 2011. PMID: 21273093 Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

термины MeSH

вещества

Вставка кодов символов ASCII или Unicode в Word

Word для Microsoft 365 Word 2021 Word 2019 Word 2016 Word 2013 Word 2010 Дополнительно. ..Меньше

Вставка символа с помощью клавиатуры с кодами символов ASCII или Unicode

Символы и специальные символы вставляются с использованием кодов ASCII или Unicode. Вы можете сказать, что есть что, когда вы ищете код для символа.

  1. Перейти к Вставить > Символ > Дополнительные символы .

  2. Найдите нужный символ.

    Совет: Шрифт Segoe UI Symbol содержит очень большую коллекцию символов Unicode, из которых можно выбирать.

  3. В правом нижнем углу вы увидите Код символа 9. 0111 и из: . Код символов — это то, что вы должны ввести, чтобы вставить этот символ с клавиатуры. Поле from: сообщает вам, является ли это символом Unicode или ASCII.

Юникод

ASCII

Вставка символов Юникода

  1. Введите код символа, в который вы хотите вставить символ Unicode.

  2. Нажмите ALT+X, чтобы преобразовать код в символ.

    Если вы помещаете свой символ Unicode сразу после другого символа, выберите только код, прежде чем нажимать ALT+X.

Совет: Если вы не получили ожидаемый символ, убедитесь, что выбран правильный шрифт.

Вставка символов ASCII

Используйте цифровую клавиатуру с включенной функцией Num Lock для ввода чисел ASCII, а не цифр в верхней части клавиатуры.

Все коды символов ASCII состоят из четырех цифр. Если код нужного символа короче четырех цифр, добавьте нули в начало, чтобы получить 4 цифры.

  1. Перейдите на вкладку Home , в группе Font измените шрифт на Wingdings (или другой набор шрифтов).

  2. Нажмите и удерживайте клавишу ALT и введите код символа на цифровой клавиатуре.

  3. org/ListItem»>

    Измените шрифт обратно на ваш предыдущий шрифт после вставки символа.

Для получения дополнительных символов см. карту символов, установленную на вашем компьютере, коды символов ASCII или таблицы кодов символов Unicode по сценарию.

г. г. г. 9

Глиф

Код

Глиф

Код

Символы валюты

£

ALT+0163

¥

ALT+0165

¢

ALT+0162

$

0024+ALT+X

€

ALT+0128

¤

ALT+0164

г.

Юридические символы

©

ALT+0169

®

ALT+0174

§

ALT+0167

™

ALT+0153

Математические символы

°

ALT+0176

 г.

º

ALT+0186

√

221А+АЛТ+Х

+

ALT+43

#

ALT+35

мкм

 г.

ALT+0181

<

ALT+60

>

ALT+62

%

ALT+37

(

ALT+40

[

ALT+91

)

ALT+41

г.

]

ALT+93

∆

2206+ALT+X

Дроби

=

ALT+0188

½

ALT+0189

¾

ALT+0190

Пунктуационные и диалектические символы

?

ALT+63

À

ALT+0191

!

ALT+33

‼

203+ALT+Х

—

ALT+45

‘

ALT+39

»

 г.

ALT+34

,

ALT+44

.

ALT+46

|

ALT+124

/

ALT+47

ALT+94

«

ALT+0171

»

 г.

ALT+0187

«

ALT+174

»

ALT+175

~

ALT+126

и

ALT+38

:

ALT+58

{

ALT+123

;

ALT+59

}

ALT+125

Символы формы

□

25A1+ALT+X

√

221А+ALT+Х

Полный список глифов и их кодов символов см. в Карте символов.

г. г. г. г. г. г. г.

Глиф

Код

Глиф

Код

Ã

ALT+0195

х

ALT+0229

Å

ALT+143

х

ALT+134

г.

Ä

ALT+142

и

ALT+132

А

ALT+0192

и

ALT+133

Б

ALT+0193

а

ALT+160

Â

ALT+0194

–

ALT+131

Ç

 г.

ALT+128

и

ALT+135

Ч

010C+ALT+X

—

010D+ALT+X

Э

ALT+144

и

ALT+130

È

ALT+0200

и

ALT+138

К

ALT+202

ê

ALT+136

Ë

ALT+203

 г.

—

ALT+137

÷

0114+ALT+X

—

0115+ALT+X

→

011E+ALT+X

№

011F+ALT+X

→

0122+ALT+Х

—

0123+ALT+X

Р

ALT+0207

ï

 г.

ALT+139

О

ALT+0206

î

ALT+140

Í

ALT+0205

и

ALT+161

М

ALT+0204

х

ALT+141

С

ALT+165

–

ALT+164

…

ALT+153

или

ALT+148

г.

Ô

ALT+212

х

ALT+147

О

014C+ALT+X

–

014D+ALT+X

Т

ALT+0210

х

ALT+149

О

ALT+0211

—

ALT+162

Ø

 г.

ALT+0216

ø

00F8+ALT+X

×

015C+ALT+X

№

015D+ALT+X

Ş

015E+ALT+X

ş

015F+ALT+X

О

ALT+154

ü

ALT+129

→

ALT+016A

–

016B+ALT+X

Û

ALT+0219

 г.

х

ALT+150

Ù

ALT+0217

х

ALT+151

Ú

00DA+ALT+X

у

ALT+163

Ÿ

0159+ALT+Х

ÿ

ALT+152

Дополнительные сведения о типографских лигатурах см. в разделе Типографские лигатуры. Для получения дополнительной информации см. Карта символов.

г. г. г.

Глиф

Код

Глиф

Код

Æ

ALT+0198

æ

ALT+0230

ß

ALT+0223

ß

ALT+225

–

ALT+0140

–

ALT+0156

ʩ

02A9+ALT+X

ʣ

02A3+ALT+Х

ʥ

02A5+ALT+X

ʪ

02AA+ALT+X

ʫ

02AB+ALT+X

ʦ

0246+ALT+X

ʧ

02A7+ALT+X

Љ

0409+ALT+X

 г.

Ю

042E+ALT+X

Њ

040А+АЛТ+Х

Ѿ

047E+ALT+x

Ы

042B+ALT+X

Ѩ

0468+ALT+X

Ѭ

049C+ALT+X

ﷲ

FDF2+ALT+X

Номера таблиц ASCII 0–31 назначаются для управляющих символов, используемых для управления некоторыми периферийными устройствами, такими как принтеры.

г.

Десятичный

Символ

Десятичный

Символ

ноль

0

Выход канала передачи данных

 г.

16

начало товарной позиции

1

устройство управления 1

 г.

17

начало текста

2

устройство управления 2

 г.

18

конец текста

3

устройство управления 3

 г.

19

конец передачи

4

устройство управления 4

 г.

20

запрос

5

отрицательное подтверждение

 г.

21

подтвердить

6

синхронный холостой ход

 г.

22

звонок

7

конец блока передачи

 г.

23

назад

8

отменить

24

горизонтальная вкладка

9

конец среды

25

перевод строки/новая строка

10

замена

26

вертикальная вкладка

11

побег

27

подача формы/новая страница

12

разделитель файлов

28

возврат каретки

13

разделитель групп

29

сменить

14

разделитель записей

30

сдвиг в

15

разделитель блоков

31

пробел

32

ДЕЛ

127

Клинико-генетические характеристики сахарного диабета 2 типа с наличием и отсутствием антител к ГТР. | Диабет

Пропустить пункт назначения

Аннотация| 01 января 1999 г.

Т Туоми;

Карлссон;

Б Исомаа;

А Миеттинен;

Нильссон;

М Ниссен;

Б О Эрнстрем;

Б Форсен;

Б Сникарс;

К Лахти;

С Форсблом;

С Салоранта;

М Р Таскинен;

LC Груп

Диабет 1999;48(1):150–157

https://doi. org/10.2337/diabetes.48.1.150

  • Разделенный экран
  • Просмотры
    • Содержание артикула
    • Рисунки и таблицы
    • Видео
    • Аудио
    • Дополнительные данные
    • Экспертная оценка
  • PDF
  • Делиться
    • MailTo
    • Твиттер
    • LinkedIn

  • Иконка Цитировать Цитировать

  • Получить разрешения

Citation

Т. Туоми, А. Карлссон, Х. Ли, Б. Исомаа, А. Миеттинен, А. Нильссон, М. Ниссен, Б. О. Эрнстрем, Б. Форсен, Б. Сникарс, К. Лахти, К. Форсблом, К. Салоранта, М. Р. Таскинен, Л. К. Груп; Клинико-генетические характеристики сахарного диабета 2 типа с наличием и отсутствием антител к GAD.. Диабет 1 января 1999 г.; 48 (1): 150–157. https://doi.org/10.2337/diabetes.48.1.150

Скачать файл цитаты:

  • Рис (Зотеро)
  • Менеджер ссылок
  • EasyBib
  • Подставки для книг
  • Менделей
  • Бумаги
  • Конечная примечание
  • RefWorks
  • Бибтекс
панель инструментов поиск

Расширенный поиск

Целью исследования было 1) установить распространенность антител к GAD (GADab) в популяционном исследовании диабета 2 типа в западной Финляндии, 2) генетически и фенотипически охарактеризовать эту подгруппу и 3) дать определение для латентного аутоиммунного диабета у взрослых (LADA). Распространенность GADab составила 9,3% среди 1122 пациентов с диабетом 2 типа, 3,6% среди 558 пациентов с нарушением толерантности к глюкозе (НТГ) и 4,4% среди 383 контрольных субъектов без диабета. Антитела к островковому антигену 2 (IA2ab) или антитела к островковым клеткам были обнаружены только у 0,5% пациентов с GADab. У пациентов с GADab+ были более низкие концентрации C-пептида натощак (медиана [межквартильный диапазон]: 0,46 [0,45] против 0,62 [0,44] нмоль/л, P = 0,0002) и более низкий ответ инсулина на пероральный прием глюкозы по сравнению с пациентами с GADab-. Что касается особенностей метаболического синдрома, то у пациентов с GADab+ систолическое давление было ниже (140 [290,1] против 148 [26,0] мм рт. ст., P = 0,009) и диастолического (79,2 [17,6] против 81,0 [13,1] мм рт. ст., P = 0,030) значений артериального давления, а также более низкие концентрации триглицеридов (1,40 [1,18] против , 1,75 [1,25] ммоль/л, P = 0,003). Мужчины с GADab+ имели более низкое соотношение талии и бедер по сравнению с пациентами с GADab-. По сравнению с пациентами с GADab- и контрольной группой у пациентов с GADab+ была повышена частота HLA-DQB1*0201/0302 (13 против 4%; P = 0,002) и других генотипов, содержащих аллель *0302 (22 против 12%; P = 0,010). Однако частота этих генотипов высокого риска была значительно ниже у пациентов с GADab+ типа 2, чем у пациентов с сахарным диабетом 1 типа в молодом или взрослом возрасте (0201/0302 или 0302/X: 36 против 66 против 64%, P <0,001). . Группа GADab+ типа 2 не отличалась от контрольных субъектов ни в отношении генотипов, содержащих защитные аллели DQB1 *0602 или *0603, ни в отношении генотипа высокого риска типа 1 при ИЗСД1 (Hph2 +/+). Мы пришли к выводу, что пациенты с GADab+ отличаются как от пациентов с диабетом 2-го типа, так и от пациентов с диабетом 1-го типа в отношении функции бета-клеток, особенностей метаболического синдрома и генов предрасположенности к диабету 1-го типа. Кроме того, мы предлагаем определять LADA как положительную реакцию на GADab (> 5 относительных единиц) у пациентов старше 35 лет на момент начала диабета 2 типа.

Этот контент доступен только в формате PDF.

150+ полезных причуд персонажей (плюс несколько клише, которых следует избегать)

Написание отличных персонажей — это постоянное балансирование: вы хотите, чтобы у каждого из них были определенные причуды и недостатки характера, но вы не хотите, чтобы они были НАСТОЛЬКО глупыми, что они отталкиваете читателей. Итак, как вы можете придумать реалистичные черты, которые очеловечивают ваших персонажей, не впадая в клише?

К счастью, этот пост предлагает список из более 150 уникальных причуд и черт характера , которые избегают клише и могут помочь сделать людей в вашей истории гораздо более близкими! Но прежде чем мы углубимся в это, вот несколько заметок о том, что такое причуды персонажей в историях и как их использовать.

Что такое причуды персонажей?

Причуда персонажа — это необычная особенность, которая отличает вашего персонажа от других. Многие из самых известных фигур в литературе имеют характерные причуды, от шрама в виде молнии Гарри Поттера до умопомрачительных детективных способностей Эркюля Пуаро.

Чтобы уточнить, «причуда» означает не просто описательное качество — например, наличие каштановых волос не делает вашего персонажа особенным. А вот с голубыми волосами — совсем другое дело. По сути, чтобы что-то было причудливым, оно должно выделяться из общей массы; это должно быть, ну, причудливо.

Это может быть физическая черта или что-то в характере вашего персонажа. Это может быть особый талант (например, повышенный интеллект) или парализующий страх (например, арахнофобия). Но что бы это ни было, оно должно быть достаточно необычным, чтобы читатели запомнили его и связали с любым персонажем, обладающим этой чертой.

Как использовать причуды персонажей

Вы можете подумать, что применить причуду персонажа довольно просто — просто придумайте одну, добавьте ее в описание, и все готово! Но на самом деле это немного больше нюансов, чем это. Вот несколько способов убедиться, что эти причуды эффективно работают в вашей истории.

Сделайте их важными для сюжета

(Изображение: Lionsgate)

Некоторые из лучших причуд — это те, которые в конечном итоге помогают персонажу или вносят существенный вклад в сюжет. Например, одна из черт Китнисс в The Hunger Games заключается в том, что она исключительная охотница, и ее умение обращаться с луком и стрелами в конечном итоге помогает ей выжить в играх. Или подумайте о приведенном выше примере со шрамом Гарри — это не только уникальная физическая особенность, но и позволяет ему узнать, когда Волан-де-Морт находится поблизости.

Не злоупотребляйте ими

Не делайте своих персонажей слишком причудливыми. Вы же не хотите, чтобы кто-то из них, особенно женские персонажи, переходил черту от уникального до невероятно своеобразного.

Также избегайте слишком подробного описания этих причуд, так как это может привести к чрезмерно витиеватым описаниям, которые заставят читателей съежиться. Если вы поймаете себя на том, что пишете абзац в своем романе для подростков о «ее веснушчатом лице, похожем на созвездие орешника, мерцающие точки, практически прыгающие с ее лица», остановитесь и переоцените. Даже при представлении причуды достаточно краткого упоминания: «На ее веснушчатом лице появилось озадаченное выражение».

Быть последовательным, за редкими исключениями

Некоторые из этих черт должны определять поведение ваших персонажей в большинстве случаев, но правила созданы для того, чтобы их нарушать, поэтому время от времени позволять людям идти против своих причуд — это нормально. Например, заведомо несмешной человек может отпустить приличную шутку, а кто-то суперстоик может прослезиться. В конце концов, если персонаж время от времени не бросает вызов своим типичным чертам, он рискует стать плоским.

Старайтесь оставаться оригинальным

Пока вы выясняете, какие причуды наделить своих персонажей, постарайтесь быть как можно более инновационным и оригинальным. Хотя почти каждая причуда в книге использовалась в тот или иной момент, черты ваших персонажей должны действовать по-разному и создавать совершенно уникальную динамику в вашей истории.

Тем не менее, вот несколько идей, как начать работу над различными причудами, которые вы можете использовать. Для удобства просмотра они разделены по физическим характеристикам, личностным чертам, сильным и слабым сторонам. В самом конце также есть список избитых причуд, так что вы точно знаете, каких из них следует избегать. Наслаждаться!

🖊️

Кто вы из современных авторов?

Узнайте, кто из сегодняшних великих людей подходит вам по сценарию. Занимает одну минуту!

Более 150 полезных причуд персонажей

Физическая

Такие причуды! (Фото Дмитрия Совяка)

Эти черты связаны с чьей-то внешностью или физическими манерами.

  • Уникальный цвет глаз или волос
  • Чрезвычайно низкий или высокий
  • Какой-то заметный физический признак — родимое пятно, веснушка, родинка или шрам
  • Носит необычные очки
  • Имеет подтяжки и головной убор
  • Большие ноги — может означать, что они неуклюжие
  • кусает ногти/губы или грызет волосы
  • Постоянно ерзает и не может усидеть на месте
  • Акне, экзема или другие кожные заболевания
  • Много татуировок или пирсинга
  • Часто болеет или страдает аллергией (постоянно сопит/сморкается)
  • Говорит очень громко или тихо
  • Говорит все как вопрос
  • Ужасное дыхание — может быть кофеман
  • Легко потеет (особенно когда нервничает)
  • Необычно волосатые руки или ноги
  • Очень длинные накрашенные ногти
  • Всегда носит макияж на лице
  • Заикание или другие дефекты речи
  • Часто заправляет волосы за уши
  • Постоянно жует жвачку
  • Всегда ковыряют в зубах
  • Курит, у него хриплый голос
  • Тяжело дышит или храпит
  • Чрезвычайно мускулистый
  • Ходит очень медленно или быстро
  • Левша или амбидекстр
  • Постоянно чешется
  • Имеет заметный физический тик, например подергивание
  • Всегда носит определенный предмет одежды или аксессуар — любимую пару носков, счастливую майку или даже определенный оттенок помады

Если вы решите назначить персонажу определенную физическую причуду, помните о последовательности! Читателей может отвлекать, если кто-то постоянно меняет цвет глаз или если он должен быть очень низким, но без проблем достает до верхней полки.

Конечно, это могут быть одни из самых сложных деталей для запоминания, поскольку внешний вид не является неотъемлемой частью личности вашего персонажа и не обязательно влияет на то, как он действует. Попробуйте использовать шаблон профиля персонажа, чтобы отслеживать эти причуды, чтобы случайно не противоречить самому себе!

Говоря о личности…

Личность

Интроверт (Фото: Sweet Ice Cream Photography)

Эти качества описывают, как человек действует и какой он.

  • Очень замкнутый, тихий и замкнутый, замкнутый в себе
  • Высокий экстраверт, любит общение и новые знакомства
  • Мега помешанный на контроле, который должен добиваться всего, чего хочет
  • Аккуратный помешанный (часто совпадает с помешанным на контроле)
  • Полный разгильдяй, который никогда не знает, где что находится
  • Очень упрямы и никогда не признают своей неправоты
  • Жестко честен и не может солгать, чтобы спасти свою жизнь
  • Крайне осуждающий других людей
  • Вспыльчив, особенно когда раздражен
  • Всегда терпелив, даже когда расстроен
  • Веселое или странное чувство юмора
  • Очень трудно их рассмешить
  • Любит поесть и одержима едой
  • Любит выпить и постоянно устраивает вечеринки
  • Постоянно на все жалуется
  • Чрезвычайно лояльны и сделают все для своих друзей/семьи
  • Авантюрист и готов попробовать что угодно
  • Осторожен и осторожен несмотря ни на что
  • Энергичный, почти никогда не нуждается в отдыхе
  • Все время спит и все равно устает в течение дня
  • Ужасное чувство направления и постоянно теряется
  • Преуспевающий, который любит школу/структуру
  • Очень скромные и никогда не будут хвастаться собой
  • Чрезвычайно эмоционален и расплачется при первой же возможности
  • Стойкий и отстраненный, редко проявляет эмоции
  • Подстановочный знак, чье поведение непредсказуемо даже для друзей
  • Печально известный двуличен и предаст любого
  • Харизматичен и может убедить любого выполнить его приказ
  • Очень корректен и всегда вежлив с другими
  • Встречается с кучей людей и каждую неделю заводит нового парня или девушку
  • Навязчивая личность — будь то телешоу, бренд, музыкальный исполнитель или даже другой человек, они привязываются и постоянно думают/говорят об этом

Некоторые из них явно совпадают друг с другом (например, предприимчивость и энергичность), а некоторые противоположны (например, вспыльчивость и терпение). Тем не менее, некоторые из них могут пересекаться, даже если кажется, что они не должны — например, кого-то с отличным чувством юмора может быть трудно рассмешить, потому что у него очень высокие стандарты в отношении того, что смешно. Когда вы создаете персонажей, тщательно подумайте об этих чертах и ​​о том, как они могут быть связаны друг с другом.

Сильные и слабые стороны

Приготовление закваски — так необычно! (Фото Натана Думлао)

В этом разделе содержатся предложения об уникальных сильных сторонах и талантах, а также о слабостях или отрицательных чертах, которыми может обладать человек.

Сильные стороны/таланты:

  • Превосходный повар или пекарь
  • Квалифицированный музыкант (фортепиано, гитара, скрипка и т. д.)
  • Художественный талант (рисунок, живопись, скульптура и т. д.)
  • Модель спортсмена (футбол, хоккей, плавание и др.)
  • Отлично владеет голосом/чревовещанием
  • Может ловкость рук — может быть карманником
  • Говорит на нескольких языках, даже на малоизвестных
  • Знает все об истории
  • Математический или научный гений
  • Блестящий кодер и может взломать любую базу данных
  • Опытный изобретатель-механик
  • Может построить или собрать что угодно
  • Сверхбыстрое логическое мышление
  • Исключительная память/интеллектуальный интеллект гениальности (некоторые из вышеперечисленных могут подпадать под этот)
  • Специальная связь с животными
  • Сверхчуткий и понимающий других людей
  • Чрезвычайно быстрый бегун
  • Конторсионист (может принимать любую форму)
  • Экстрасенсорный талант (может предсказывать будущее)
  • Удивительный механик
  • Сверхсила, полет, невидимость или другие сверхспособности
  • Необычно высокая переносимость боли
  • Навыки выживания, такие как охота и рыбалка
  • Быстрые рефлексы, быстрые действия в кризисной ситуации
  • Храбрый и бесстрашный, ничего не боящийся
  • Умение уговорами выйти из любой неприятности/придумывать истории на лету

Слабые стороны/отрицательные черты:

  • Ужасный водитель
  • Всегда опаздывает
  • Неразборчивый почерк
  • Ужасно в публичных выступлениях
  • Социально неуклюжие — им трудно завести друзей
  • Имеет тонны долгов по кредитным картам из интернет-магазинов
  • Саморазрушительны и всегда хотят для себя самого худшего
  • Напивается до потери сознания каждый раз, когда выходит из дома
  • Крайне тщеславный или высокомерный
  • Компульсивный лжец
  • Манипулятор друзей
  • ревнует по пустякам
  • Часто злит без причины
  • Невероятно эгоцентричный
  • Чрезвычайно пассивно-агрессивный
  • Арахнофобия (иррациональная боязнь пауков)
  • Коулрофобия (иррациональная боязнь клоунов)
  • Агорафобия (иррациональный страх выхода из дома)
  • Пантофобия (боязнь всего)

Будьте осторожны при включении этих сильных и слабых сторон, так как вы не хотите, чтобы их включение казалось неестественным. В конце концов, черты личности имеют тенденцию проявляться ежедневно, но это может быть не так в отношении их особых талантов и страхов.

Действительно, иногда лучший способ использовать подобные причуды — удивить ими своего читателя в нужный момент. Может быть, это одиннадцатый час, и вашему МС больше некуда обратиться, только для особого умения их друга, чтобы спасти положение!

Кроме того, как видно из обоих списков, существует целый ряд сильных и слабых сторон, которыми вы можете наделить своих персонажей. Некоторые из этих талантов требуют больше практики, чем другие, а некоторые слабости являются большими недостатками, чем другие — например, быть подлым или манипулятивным человеком, очевидно, намного хуже, чем иметь плохой почерк. Тем не менее, полезно быть знакомым с широким спектром как основных, так и второстепенных причуд, чтобы вы могли создавать более разносторонних персонажей.

Разное

Это идиосинкразии, которые на самом деле не вписываются ни в одну из вышеперечисленных категорий, но все же могут быть полезны в вашей истории.

  • Платья одного цвета
  • Спальня оформлена точно так же, как на картинке Pinterest
  • Негазированную воду не пью, только газированную
  • Отказывается пользоваться наушниками и публично включает свою музыку
  • Всегда одевается слишком красиво по случаю
  • Ходит босиком, даже в магазинах и других общественных местах
  • Ненавидит находиться внутри, спит и ходит в туалет на улице
  • Не могу не смотреть в каждое зеркало, мимо которого они проходят
  • Везде носит небольшой пластиковый рюкзак
  • Готовит еду за три недели вперед
  • Пить эспрессо в течение всего дня
  • Поет оперу в душе
  • Делает свои собственные (ужасные) абстрактные рисунки и вешает их на стены
  • В восторге от Рождества, а затем в январе 90 572 действительно впадает в депрессию.
  • Отказывается носить очки, хотя они им нужны
  • Носит с собой секретного плюшевого мишку
  • Три года носит один и тот же браслет дружбы
  • Скрупулезно скатывает всю свою одежду
  • Выйдет из магазина или ресторана, если кто-то войдет с ребенком
  • Крайне суеверен (стучит по дереву, избегает числа 13 и т. д.)
  • Выбрасывает все, что другие люди просят держать
  • Любит танцевать в одиночестве
  • Предпочитает постоянно выключать или приглушать свет
  • Читает только книги, написанные до 1900 года
  • Смотрит только фильмы с очень плохими отзывами
  • Всегда носит несколько свитеров друг на друге
  • Не ест ничего, кроме хлеба (по крайней мере, на гарнир)
  • Думает, что они путешественники во времени из средневековья
  • Делает друзьям и близким отличные домашние подарки
  • Каждый день выходит из офиса последним, чтобы передвинуть все стулья в
  • Ненавидит неровные цифры (всегда заправляет свой бензобак до доллара, отправляет электронные письма в час и т. д.)
  • Есть воображаемый друг, с которым они разговаривают даже во взрослом возрасте
  • У него есть ящерица, которую они пытаются использовать в качестве сторожевой собаки
  • Слушает исключительно Бритни Спирс
  • Делает небольшие заметки в библиотечных книгах для будущих читателей
  • Использует ткани, чтобы держаться за столбы в общественном транспорте
  • носит свои волосы в пучках принцессы Леи
  • Ни дня не проходит без разговоров с мамой
  • Напевает «В зале горного короля», когда они в стрессе
  • Цокает языком при ходьбе, поэтому звучит как лошадь
  • Цитаты из «Криминального чтива»
  • Любит тусоваться в абсолютно пустых местах
  • Убеждены, что погибнут в результате несчастного случая
  • Выращивает всю еду на своем огороде
  • Никогда не платит за билеты на поезд или автобус
  • Может читать сонеты Шекспира
  • Перерабатывает и питается вегетарианцем, но только из чувства вины
  • Имеет «доску визуализации» на потолке
  • Любит пляж, но ненавидит плавать
  • Бьет людей по лбу, когда они раздражаются
  • Смеется над всем, даже над плохими шутками
  • Ведет отличную ленту уличного искусства в Instagram

Клишированные «причуды», которых следует избегать

Предоставление вашим персонажам интересных приемов может превратиться в неуклюжее письмо, если ваши причуды используются слишком часто, например:

  • Бледная кожа
  • Кривая улыбка
  • «Напряженный» взгляд
  • Безжалостная неуклюжесть
  • Искусственные краски для волос, которые предположительно являются натуральными
  • Персонажи думают, что они непривлекательны, когда все остальные думают, что они красивы
  • По сути, любой недостаточно развитый архетип

Когда читатели видят эти черты на странице, они закатывают глаза и думают: «Тьфу, только не снова».

About the author

Related Posts

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *