Лспр 200: Леса рамные ЛСПР-200 | Завод Ремстройдормаш — Строительная большегрузная техника для бизнеса

Содержание

Рамные леса ЛСПР-200

Рамные леса

Рамные строительные леса, самый популярный вид лесов — отличаются своей низкой ценой по отношению к другим видам строительных лесов, удобством быстрого монтажа — демонтажа.

Строительные леса ЛСПР-200 – самые лёгкие, представляют собой рамные конструкции, соединённые между собой горизонтальными и диагональными связями высотой до 40 метров для отделочных и фасадных работ нагрузкой 200 кг./кв.м. Для увеличения рабочей нагрузки с дополнительной жёсткостью и удобства монтажа настилов, леса ЛСПР-200 могут комплектоваться ригелями из трубы прямоугольного сечения 60х30х2мм, монтируемые на рамы. Строительные леса ЛСПР-200 покрыты порошковой эмалью; несущие рамы выполнены из круглой трубы; связи из трубы с толщиной стенки 1.2 мм, толщина трубы в рамах 1.5мм.

Максимальная высота лесов, м	40
Шаг рам по высоте, м	2
Шаг рам вдоль стены, м	3
Ширина яруса (прохода) между стойками, м	0,95
Нормативная нагрузка, кг/м2	200
Несущая труба, диаметр/толщина стенки	42мм /1,5мм

Леса рамные ЛСПР-200 состоят из следующих элементов:

Рама проходная
Основной несущий элемент конструкции лесов. Рамы устанавливаются вертикально и соединяются друг с другом «труба в трубу», ставятся перпендикулярной фасаду. Изготавливаются в виде сварного прямоугольника 1х2 м, на поперечный элемент которого укладываются ригели для настила.


Рама с лестницей
Также основной несущий элемент лесов. Устанавливаются вертикально, соединяются друг с другом «труба в трубу», ставятся перпендикулярно фасаду. Выглядят как сварной прямоугольник 1х2м. с лестницей внутри, которая используется для подъёма строителей на ярусы лесов. Рамы с лестницей рекомендуется ставить с торцов, лестницы в данном случае будут обеспечивать торцевое ограждение конструкции.


Связь горизонтальная
Горизонтальная связь служит для обеспечения жесткости конструкции лесов, чаще всего устанавливаются со стороны фасада. Крепятся к рамам с помощью флажковых замков и могут ставиться на трех различных уровнях рамы. Длина горизонтальной связи 3,05 метра. При установки с внешней стороны могут служить перилами рабочих ярусов.


Связь диагональная
Диагональные связи также нужны для повышения жесткости конструкции лесов и соединения рам друг с другом. Состоят из двух труб, длиной 3,3 м. соединенных между собой болтом. Крепятся к рамам с внешней стороны, образуя крест и выполняя функцию ограждения яруса.


Опора	Флажковый замок
Опора устанавливается в нижнем ряду рам на основание. Рама соединяется с опорой «труба в трубу».	Приварен к рамам. С его помощью диагональные и горизонтальные связи крепятся к рамам.


Ригель	Щиты настила (не входят в поставку)
Ригель устанавливается на верхние перекладины рам, обеспечивает дополнительную жесткость конструкции, увеличивает рабочую нагрузку лесов. При 2-х ригелях удобна укладка щитов настила рамных лесов.	Дощатый настил (доска толщиной не менее 30мм с поперечной сшивкой брусками при продольной укладке) должен обеспечивать безопасные условия труда при работе на лесах.
	Обычно, для удобства монтажа, длина дощатого настила при продольной укладке без ригелей с нахлёстом на пролётах — 3,2м. Ширина настила — до 850мм. При применении ригелей, настил можно использовать меньшей длины при поперечном опирании на 2 ригеля (щитовой настил с досками толщиной не менее 25мм).

Преимущества рамных лесов

По удобству и скорости сборки гораздо предпочтительней других видов строительных лесов. Собранная конструкция не только обеспечивает свободный доступ абсолютно ко всем прилегающим поверхностям, но и позволяет визуально контролировать ход процесса, а также качество выполнения работы. Ширина настилов обеспечивает свободу движений для рабочих и их удобное расположение. Леса не препятствуют естественному освещению и вентиляции.

Их каркасная система выполнена из трубы, поэтому они самые легкие по сравнению с остальными видами лесов. Свое название леса строительные рамные получили потому, что состоят из вертикальных рам, которые крепятся между собой диагональными и горизонтальными связями. Рамы собираются из унифицированных элементов трубчатого сечения и жестко фиксируются связями.

Даже при большой площади такая конструкция обладает минимальным весом, что немаловажно как при установке, так и при перевозке и хранении.

Леса рамные просты в использовании. Крепление связей осуществляется посредством флажкового замка и не требует использования специального инструмента. Применение унифицированных элементов и универсальных способов крепления делает процесс возведения лесов схожим со сборкой конструктора. Поэтому установка и демонтаж такой пространственной конструкции занимает минимум времени, что особенно важно для соблюдения установленных сроков.

Несомненным преимуществом также является невысокая стоимость данного вида оснащения. Если учесть, что рамные леса имеют продолжительный срок эксплуатации и применимы для работы практически на любых объектах, то затраты на их приобретение становятся незначительными.

Несмотря на минимальный вес конструкции, она надежна и обеспечивает высокую безопасность людей. Стальные трубы малого сечения позволяют с уверенностью располагать на лесах не только рабочих, но и все необходимые инструменты. К примеру, при монтаже систем кондиционирования и вентиляции часто используется тяжелое громоздкое оборудование и инструменты. Заложенная прочность лесов позволяет выдерживать довольно большие нагрузки и гарантирует безопасные условия труда при выполнении всех видов работ.

Леса строительные рамные ЛСПР-200 секция 2х3 м

Екатеринбург

Компании:	30 802
Товары и услуги:	17 806

Статьи и публикации:	1 150 (+2)
Тендеры и вакансии:	115

Вход в личный кабинет

А ваша компания есть в справочнике?

Компании
Товары и услуги
Тендеры
Вакансии
Статьи и публикации

3 200 р.

Купить

Строительные рамные леса представляют собой вспомогательные конструкции для размещения рабочих и материалов при выполнении строительных, ремонтных, отделочных работ снаружи или внутри зданий.

Строительные рамные леса ЛСПР-200 — это конструкция, состоящая из рам проходных, рам с лестницей, диагональных и горизонтальных стяжек, ригелей настила, анкерных кронштейнов, опор, предназначенная для проведения работ на высоте до 40 метров. Флажковые замки позволяют производить сборку лесов без использования дополнительных инструментов.

В производстве рамных лесов используется облегченная стальная труба (диаметр 42 мм, толщина стенки 1,5 мм), поэтому рамные леса обладают самым легким весом среди остальных видов лесов. Максимальный вес одного элемента (рама с лестницей) составляет 12 кг.
Строительные леса ЛСПР-200 — наиболее распространенный и экономичный вид строительных лесов.

посмотреть все (30)

Другие товары и услуги компании:

Леса строительные рамные ЛСПР-200 4х6 м

Леса строительные рамные ЛСПР-200 4х6 м, площадь по фасаду 24 м2.

5 490 р.

Леса строительные рамные ЛСПР-200 8х12 м, 96 м2.

Фасадные приставные леса рамного типа ЛСПР-200 размер 8х12 м, площадь по фасаду 96 м2. Выполнены из стальной трубы 42 мм.

18 550 р.

Леса строительные рамные ЛСПР-200 секция 6х9 м

Строительные рамные леса представляют собой вспомогательные конструкции для размещения рабочих и материалов при выполнении строительных, ремонтных, отделочных работ

11 240 р.

Растворосмеситель принудительный РН-200

Растворосмеситель РН-200 имеет больший объем, чем РН-80 или РН-150. Кроме того, электродвигатель и редуктор в РН-200 закрыты защитным кожухом.

67 000 р.

Тачка строительная ТСО-02

Одноколесные строительные тачки ТСО пригодны для перевозки щебня, песка, земли, бетона, так как имеют грузоподъемность 120 кг и колеса на подшипниках.

3 000 р.

Тачка строительная ТСО 2-02

Двухколесная строительная тачка ТСО 2-02, с пневматическими или цельнолитыми колесами.

4 000 р.

Товары и услуги других компаний:

Клык рыхлитель komatsu 220 200 300 рыхлитель hyundai 290 260 320

Рыхлитель клык jcb 160 jcb 200 jcb 220 Komatsu pc 220 из наличия для мерзлоты, рыхлитель Hyundai 200W, Hyundai 250, Hyundai 290, рыхлитель hitachi ZX 200, hitachi ZX-270.

Штукатурная станция (машина, агрегат) Knauf PFT G5 C Plus, 2005 года выпуска

Продается Штукатурная станция (машина, агрегат) Knauf PFT G5 C Plus, 2005 года выпуска

200 000 р.

Аренда компрессора FUBAG

Компрессор FUBAG F1-310/24 CM3 — одноступенчатый масляный компрессор. Используется с различными пневмоинструментами в автосервисных мастерских и на строительных площадках.

600 р.

Клык рыхлитель jcb 210 220

Клык рыхлитель jcb 210 220 рыхлитель ковши jcb 160 180 jcb 200 из наличия

Защитно-улавливающая система ЗУС

Защитно-улавливающая система (горизонтальная), применяется как средство коллективной защиты и используется при строительных работах, для безопасности людей, производящих высотные работы.

7 500 р.

Фрезеровальная машина ES-200EL (с электроприводом) 2007 года выпуска

Продается Фрезеровальная машина ES-200EL (с электроприводом) 2007 года выпуска

68 000 р.

Промышленные материалы и оборудование

Строительные леса Строительное оборудование

Информация о продавце

Стройтехника

+7 (343) 372-57-52
г. Екатеринбург, ул. Шефская, 2В, здание АБК, 1 этаж
www.alstr.ru

ООО «Стройтехника» — поставщик строительного оборудования и инструмента, строительных лесов и вышек-тур. Мы успешно работаем для Вас с 2000 года.

Разработка безэтикеточного датчика LSPR-Apta для обнаружения золотистого стафилококка

. 2020 18 мая; 3(5):3066-3077.

doi: 10.1021/acsabm.0c00110. Epub 2020 6 мая.

Хеба Хатеб ¹ , Гуннар Клёс ¹ , Рикке Л. Мейер ¹ , Дункан С. Сазерленд ¹

принадлежность

¹ Междисциплинарный центр нанотехнологий (iNANO), Орхусский университет, Gustav Wieds Vej 14, 8000 Aarhus C, Дания.

PMID: 35025353
DOI: 10.1021/acsabm.0c00110

Хеба Хатеб и др. Приложение ACS Bio Mater. 2020 .

. 2020 18 мая; 3(5):3066-3077.

doi: 10.1021/acsabm.0c00110. Epub 2020 6 мая.

Авторы

Хеба Хатеб ¹ , Гуннар Клёс ¹ , Рикке Л. Мейер ¹ , Дункан С. Сазерленд ¹

принадлежность

¹ Междисциплинарный центр нанотехнологий (iNANO), Орхусский университет, Gustav Wieds Vej 14, 8000 Aarhus C, Дания.

PMID: 35025353
DOI: 10.1021/acsabm.0c00110

Абстрактный

За последние годы увеличился риск болезней пищевого происхождения. Мы разработали простой, портативный и не содержащий меток оптический датчик с помощью аптамерного распознавания Staphylococcus aureus на наноструктурированных плазмонных элементах. Разработанные аптамеры, конъюгированные с датчиком локализованного поверхностного плазмонного резонанса (LSPR), применяли как в чистой культуре, так и в образцах искусственно контаминированного молока, обеспечивая предел обнаружения 10 ³ КОЕ/мл для S. aureus в молоке. Отсутствовала необходимость в стадии предварительного обогащения, а общее время анализа сократилось с 30 мин до 120 с. Временная область с конечными разностями использовалась для моделирования экспериментально измеренных оптических откликов для ряда различных конструкций датчиков (диски 100 и 200 нм) с учетом роли ближнего поля и собственной чувствительности показателя преломления. Сравнение подходов к распознаванию на основе аптамера и антитела показало, что толщина чувствительного слоя была критической, при этом реакция на более тонкий слой аптамера была значительно выше. Сравнение металлических наноструктур разного размера показало значительно более высокую чувствительность для диаметра 200 нм по сравнению с дисковыми структурами диаметром 100 нм в результате как увеличения чувствительности объемного показателя преломления, так и степени, в которой локальное поле распространяется от поверхности металла. Эти результаты подтвердили, что разработанные сенсорные чипы LSPR на основе золотых нанодисков могут способствовать чувствительному обнаружению S. aureus в образцах пищевых продуктов.

Ключевые слова: оценка ККТ; апта-сенсор ЛСПР; золотистый стафилококк; обнаружение; мониторинг продуктов питания; оптические биосенсоры; плазмонный биосенсор.

Цитируется

Флуоресцентный биосенсор на основе наноматериалов для анализа безопасности пищевых продуктов.
Чжоу Дж., Гуй Й., Ур. X, Хэ Дж., Се Ф., Ли Дж., Цай Дж. Чжоу Дж. и др. Биосенсоры (Базель). 2022 23 ноября; 12(12):1072. дои: 10.3390/биос12121072. Биосенсоры (Базель). 2022. PMID: 36551039 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Последние достижения в области аптасенсоров для быстрого и чувствительного обнаружения Золотистый стафилококк .
Чен В., Лай К., Чжан Ю., Лю З. Чен В. и др. Фронт Биоэнг Биотехнолог. 2022 23 мая; 10:889431. doi: 10.3389/fbioe.2022. 889431. Электронная коллекция 2022. Фронт Биоэнг Биотехнолог. 2022. PMID: 35677308 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.

Усиленная наночастицами золота и рулонная наноимпринтированная платформа LSPR для обнаружения интерлейкина-10

Введение

Датчики локализованного поверхностного плазмонного резонанса (LSPR) могут отслеживать различные события связывания, включая взаимодействия белок-лиганд (McFarland and Van Duyne, 2003; Holzinger et al., 2014; Jang et al., 2014; Liu et al., 2018). ), гибридизация ДНК (Storhoff et al., 2004; Sönnichsen et al., 2005; Baek et al., 2014) и взаимодействия биомаркеров (Im et al., 2014; Xu et al., 2018; Bellassai et al., 2019; Ван и др., 2019). Когда происходят события связывания, изменение свойств LSPR проявляется как сдвиг пика экстинкции, который легко измеряется с помощью спектроскопии в ультрафиолетовой и видимой областях (UV-vis) (Sepúlveda et al., 2009).). Поведение экстинкции включает события как поглощения, так и рассеяния падающего света датчиком LSPR. Благодаря простому и удобному процессу определения характеристик датчик LSPR рассматривался как потенциальный инструмент обнаружения в твердофазном иммуноферментном анализе (ELISA) (Chen et al., 2011).

Известно, что сдвиг пика экстинкции связан с изменением показателя преломления на поверхности структуры LSPR, когда аналит связывается с плазмонными наноструктурами, такими как золото (Au) и серебро (Ag) (Willet and Van Duyne, 2007). ; Холл и др., 2011). Чтобы улучшить способность обнаружения LSPR, мы разработали двойные плазмонные структуры, индуцируя плазмонную связь между коллоидным нанокубом Au (AuNC) и многократно изогнутой нанополосой Au.

Недавно Wi et al. исследовали двойную изогнутую структуру Au на гибкой полиэтилентерефталатной (ПЭТ) пленке и ее влияние на чувствительность свойств LSPR, что позволяет обнаруживать белки с чувствительностью на уровне фемтограмм (Wi et al., 2017). В отчете моделирование методом конечных разностей во временной области (FDTD) показывает, что складывание структур Au приспосабливает более длительные колебания плазмы в замкнутых структурах, обеспечивая высокую чувствительность к изменению показателя преломления окружающей среды (Миллер и Лазаридес). , 2005; Майер и Хафнер, 2011). Здесь мы представляем метод наноотпечатка с рулона на рулон для производства платформ наноархитектуры, таких как структуры нанолиний или наноточек. В частности, осаждение Au на платформе нанорешетки приводит к построению многоизогнутой структуры Au с сильным пиком экстинкции при ~760 нм. С помощью этой платформы Au LSPR мы представляем метод обнаружения интерлейкина-10 (IL-10), одного из цитокинов, участвующих в поддержании гомеостаза иммунной системы.

Чтобы применить многоизогнутую структуру Au для протокола ELISA, мы попытались интегрировать двойные структуры наночастиц Au/полосок Au в настольное оборудование для считывания микропланшетов. В частности, мы прикрепили ПЭТ-пленки, имеющие многократно изогнутые структуры Au, к дну обычного 96-луночного микропланшета, который затем пропитали раствором реагента. Мы выполнили протокол ELISA с использованием стандартных реагентов, включая захватывающее антитело, целевой аналит и первичное антитело. Чтобы обнаружить белок IL-10, специфически связанный с антителом IL-10, мы использовали коллоидный AuNC в качестве вспомогательного средства для анализа иммунозолота в протоколе ELISA. В результате мы заметили, что AuNC увеличивает сдвиг пика на 450% по сравнению с отсутствием AuNC. На основе этой двойной платформы анализа Au LSPR нам удалось обнаружить модельный белок IL-10 в наномолярном диапазоне.

Материалы и методы.

Материалы. Гидрат хлорида золота (III) (HAuCl

₄), боргидрид натрия (NaBH ₄), L-аскорбиновая кислота, 11-меркаптоундекановая кислота (MUA) и бычий сывороточный альбумин (BSA) были приобретены у Sigma-Aldrich. 1-Этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (EDC) и N-гидроксисульфосукцинимид (NHSS) были приобретены у Thermo Fisher Scientific Inc. Бромид гексадецилтриметиламмония (CTAB) был приобретен у Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS) для биофункционализации AuNC был приобретен у Biosesang.

Изготовление полосы Au LSPR

Полоса Au LSPR была изготовлена с использованием рулонной наноимпринтной литографии (Koo et al., 2016; Wi et al., 2017). Сначала были изготовлены нанорешетчатые структуры из полиуретанакрилата (ПУА) на ПЭТ-пленке с использованием силиконового шаблона с шагом 200 нм и высотой 100 нм. На изготовленные нанорешетчатые структуры с помощью термического испарителя (Ultech, EasyDEP-5) последовательно наносили титан (Ti) (толщиной 5 нм) и Au (толщиной 50 нм).

Синтез коллоида AuNC

AuNC были синтезированы в соответствии с ранее описанным методом посева-роста (Sau and Murphy, 2004; Wu et al., 2010; Jang et al., 2014). Раствор затравочных наночастиц готовили путем добавления 250 мкл 0,01 М HAuCl ₄ и 600 мкл 0,01 М NaBH ₄ к 7,5 мл 0,1 М CTAB, как описано на рисунке S1A. Раствор выдерживали при 29°С в течение 1 часа. Для ростового раствора 6,4 мл 0,1 М ЦТАБ, 800 мкл 0,01 М раствора HAuCl ₄, 3,8 мл 0,1 М раствора L-аскорбиновой кислоты и 20 мкл 10-кратно разбавленного затравочного раствора последовательно добавляли к 32 мл DI. воды, как показано на рисунках S1B,C. Полученный раствор инкубируют при 29°С в течение ночи. Мы центрифугировали раствор при 11000 об/мин в течение 6 мин и ресуспендировали в деионизированной воде для удаления избытка ЦТАБ.

Иммобилизация детектирующего антитела на поверхности коллоидного AuNC

Для формирования самособирающегося монослоя (SAM) на поверхности AuNC 10 мкл 10 мМ MUA добавляли к 990 мкл раствора AuNC перед присоединением антител через EDC/NHSS. химия сшивания. Покрытые MUA поверхности Au реагировали с 10 мкл 7,5 мМ EDC и 1,5 мМ NHSS в деионизированной воде при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученный раствор AuNC оставляли на 3 ч при 29°C после добавления детектирующего антитела IL-10. После реакции раствор AuNC с иммобилизованными антителами центрифугировали при 11000 об/мин в течение 6 мин и ресуспендировали в PBS. Биофункционализированный коллоид AuNC был охарактеризован с помощью настольного считывателя микропланшетов (Molecular Devices, SpectraMax).

Иммобилизация захватывающего антитела на поверхности полоски Au LSPR

Аналогичная химия поверхности использовалась для иммобилизации захватывающего антитела IL-10 на полоске Au LSPR. Полоску Au LSPR замачивали в этанольном растворе MUA в течение ночи. После образования SAM 10 мкл 7,5 мМ EDC и 1,5 мМ NHSS в деионизированной воде реагировали на полоске Au LSPR при комнатной температуре в течение 30 мин. Поверхность золота с концевыми карбоновыми кислотами выдерживали в течение 3 ч при 29°C после добавления захватывающего антитела IL-10. Полоска Au LSPR с модифицированной поверхностью характеризовалась устройством для считывания микропланшетов с нормальным колориметрическим режимом сканирования.

Характеристики полосы AuNC и Au LSPR

Полоски AuNC и Au LSPR были охарактеризованы с помощью сканирующей электронной микроскопии с полевой эмиссией (FE-SEM, Hitachi SU8220) и просвечивающей электронной микроскопии с полевой эмиссией (FE-TEM, FEI Titan G2 ChemiSTEM, зонд Cs корректор) с помощью энергодисперсионной рентгеновской спектроскопии (EDX). Для химического анализа AuNC элемент серы (S), присутствующий на поверхности Au, анализировали с использованием спектрометра с индукционно-связанной плазмой (ICP, Optima 7300DV и Avio500). Кроме того, поверхностно-функционализирующие элементы полосы Au LSPR, а именно S и азот (N), были проанализированы с помощью рентгеновской фотоэлектронной спектроскопии (XPS, ThermoFisher).

Результаты и обсуждение

Для создания двойной изогнутой наноструктуры Au мы термически напыляли Au на нанорешетку из ПЭТ-пленки под углом наклона 20°. На рис. 1 показана схема рулонного изготовления нанолиний на ПЭТ-пленке, на которую Ti/Au осаждали с помощью термического испарителя. На рис. 1А показан процесс печати с рулона на рулон на ПЭТ-пленке. Сначала мы обернули цилиндрический рулон с печатной формой для штамповки наноархитектуры на ПЭТ-пленке, покрытой УФ-отверждаемой полимерной смолой, с использованием процесса нанесения аэрографа (Koo et al., 2016). Когда покрытые смолой ПЭТ-пленки проходят через цилиндрический валик, УФ-свет отверждает отпечатанную пленку на выходе. Изображение с цифровой камеры на рисунке 1B показывает камеру теплового испарителя. Область красной линии на рисунке 1B увеличена на рисунке 1C. Мы наклонили подложку на 20°, чтобы создать наноархитектуру Au с двойным изгибом на одной стороне стенки наноархитектуры. На рисунке 1D показано, как оснастить пленку ПЭТ с наноимпринтом на стадии вафли камеры в тепловом испарителе. Направление отпечатанной нанолинии должно быть параллельно оси наклона, как показано на правом рисунке рисунка 1D. Рисунок 1E представляет собой схематический вид в поперечном сечении до и после осаждения Au на ПЭТ-пленку с наноимпринтом. Обратите внимание, что наклонное осаждение Au позволяет получить структуру Au с двойным изгибом, что является важным элементом для свойства LSPR. Рисунок 1F представляет собой изображение с цифровой камеры двойного изгиба ПЭТ-пленки с осажденным золотом для сенсорной платформы LSPR.

Рис. 1. (A) Схема изготовления рулонной нанопечатной ленты с нанесением полимерного покрытия на основе аэрографа на ПЭТ-пленку. (B) Изображение камеры теплового испарителя, сделанное цифровой камерой. (C) Увеличенное изображение прямоугольника с красной линией на рис. (B) показывает наклоненный на 20° вал пластинчатого столика. (D) Схема столика с полосовым образцом, который наклонен на 20° для формирования наноструктур Au с двойным изгибом. (Э) Поперечное сечение двойной изогнутой ПЭТ-пленки с нанесенным золотом. (F) Гибкая и прозрачная ПЭТ-пленка с напылением золота.

Нанесение Au под углом на нанорешетчатую ПЭТ-пленку имеет значительные преимущества. Условия полосы Au LSPR были проверены путем изменения углов осаждения, как показано на рисунке S2. В качестве контрольного образца, когда золото было нанесено на плоскую ПЭТ-пленку (без нанорешетчатых структур), мы могли почти наблюдать пик экстинкции, как показано на рисунке S2A. Однако, поскольку золото осаждается под разными углами на ПЭТ-пленке с нанорешеткой, пики LSPR были идентифицированы на разных длинах волн, как показано на рисунке S2B. Мы получили наиболее выраженный пик LSPR при угле наклона 20°, поэтому впоследствии использовали это условие.

Чтобы подтвердить структуру золота на ПЭТ-пленке, мы выполнили СЭМ-характеристику путем наклона и вращения образца (Nam, 2018; Baek et al., 2020). На рис. 2А описан подход к визуализации Au, нанесенного на боковую стенку, сформированную на пленке ПЭТ с наноимпринтом. Мы поворачивали столик для пластин либо против часовой стрелки, либо по часовой стрелке на 30°, а затем наклоняли на 30°. На рисунке 2B показано, что СЭМ-изображения сторон стенки нанолиний различаются, так как левая боковая стенка покрыта золотом (левое изображение), а правая боковая стенка свободна от осаждения золота (правое изображение). Среднее изображение на рисунке 2B представляет собой изображение полоски Au LSPR сверху вниз.

Рис. 2. (A) 3D-схема СЭМ-изображения полос с осажденным золотом. (B) Левое и правое СЭМ-изображения представляют собой пленки наноархитектуры с нанесенным золотом, снятые под углом поворота 30° и углом наклона 30°. Левое и правое изображения были получены при вращении предметного столика против и по часовой стрелке соответственно. На среднем изображении SEM показан вид сверху на полоску Au LSPR.

На рис. 3 представлен обзор функционализации полос AuNC и Au LSPR. AuNC были синтезированы, как кратко описано на рисунке S1. Мы протестировали различные формы наночастиц Au, включая наносферы, наностержни и нанокубы. Среди них состояние AuNC очень подходит для наших экспериментов, поскольку оно допускает монодисперсную коллоидную структуру и однородные плазмонные свойства, как показано на рисунке S3. Кроме того, AuNC хорошо ресуспендируется в буферном растворе во время стабилизации антитела с покрытием на поверхности Au. Синтезированные AuNC были охарактеризованы с помощью TEM и EDX, как показано на рисунке S3. Для биофункционализации мы обработали поверхность AuNC MUA с последующим химическим сшиванием EDC/NHSS для образования ковалентного присоединения антитела для обнаружения IL-10, как описано на рисунке 3A (Baek et al. , 2014; Jang et al., 2014). Вкратце, мы добавили этанольный MUA к коллоидному AuNC, чтобы сформировать SAM на поверхности AuNC. Затем мы функционализировали коллоидный AuNC, используя химию сшивания EDC/NHSS, которая необходима для образования амидных связей между SAM и антителом, как описано на вставке к рисунку 3A.

Рисунок 3 . Схематический обзор стратегии датчика Au LSPR с помощью AuNC. (A) Функционализация антител для обнаружения IL-10 на поверхностях AuNC посредством образования монослоя MUA с последующим химическим сшиванием EDC/NHSS. (B) Та же самая химия была использована для иммобилизации захватывающего антитела IL-10 на полоске Au LSPR. (C) Двойная сенсорная платформа Au LSPR, в которой цитокин IL-10 заключен между AuNC и полоской Au.

На рис. 3В показан процесс модификации поверхности полосы Au LSPR. Подобно функционализации коллоидного AuNC, структуры Au с двойным изгибом обрабатывали MUA с последующим химическим сшиванием EDC/NHSS. Затем захватывающее антитело IL-10 иммобилизуют на поверхности полоски Au LSPR. На фигуре 3C показано формирование сэндвич-ELISA для антигена IL-10 путем сочетания коллоидного AuNC с полоской Au LSPR. Полоска Au LSPR, покрытая захватывающим антителом к IL-10, нагружается антигеном IL-10, а затем антителом для обнаружения IL-10. Детали общего процесса, включая этапы промывки для анализа полосы AuNC-конъюгированного Au LSPR, обобщены на рисунке S4.

На рис. 4 показан результат функционализации поверхности AuNC и полосы Au LSPR. Как показано на изображении ПЭМ на рисунке 4A, монодисперсный AuNC имеет пик экстинкции при 534 нм, как показано на рисунке 4B. На рисунке 4C показано СЭМ-изображение полосы Au LSPR, которая имеет сильный пик экстинкции при 744 нм, как показано на рисунке 4D. Сдвиг пика экстинкции был охарактеризован до и после иммобилизации антител на коллоидной полоске AuNC и Au LSPR, как показано на рисунках 4B, D соответственно. Сдвиг пика LSPR возникает из-за изменения показателя преломления вокруг поверхности структур Au. В этом измерении пик AuNC смещается с 534 до 537 нм (рис. 4B), а пик полосы Au LSPR смещается с 744 до 749 нм.нм (рис. 4D), что указывает на то, что биомолекулы иммобилизованы на поверхностях Au. Таким образом, красные смещения пика экстинкции оказались равными 3 и 5 нм для AuNC и Au LSPR соответственно, что согласуется с предыдущими выводами (Hall et al., 2011). Красные сдвиги обычно наблюдаются после конъюгации антител, что подразумевает увеличение диэлектрической проницаемости вокруг поверхностей Ag или Au из-за дополнительных молекулярных слоев (Willet and Van Duyne, 2007). Чтобы подтвердить иммобилизацию антитела на поверхности Au, мы охарактеризовали поверхность полосок AuNC и Au LSPR с помощью ICP и XPS соответственно. На рисунке S5 данные ICP коллоидного AuNC показывают появление пика S после обработки MUA. На рисунке S6 данные XPS поверхности полоски Au LSPR показывают появление пиков S и N после обработки антителом MUA и IL-10 соответственно. Мы наблюдали повышенный сигнал N, означающий, что антитело IL-10 было успешно конъюгировано с полоской Au LSPR (Guo et al. , 2017).

Рисунок 4 . Иммобилизация антител на поверхности Au. (A) ПЭМ-изображение синтезированного AuNC. (B) Данные УФ-видимого спектра, показывающие иммобилизацию антител для обнаружения IL-10 на AuNC. (C) СЭМ-изображение изготовленной полоски Au LSPR. (D) Данные УФ-видимого спектра, показывающие иммобилизацию захватывающего IL-10 антитела на полоске Au LSPR. В (B,D) черные пунктирные линии представляют собой до конъюгации антител, а красные линии — после конъюгации антител с поверхностями Au.

На рис. 5 показан спектр экстинкции, демонстрирующий ИФА на основе коллоидного AuNC на полоске Au LSPR с двойным изгибом. Мы исследовали влияние концентрации IL-10 на сдвиг пика спектров экстинкции, как показано на рисунках 5A-D. На рисунке 5A подготовленный чип LSPR показывает кривую УФ-спектра с пиком экстинкции при ~ 760 нм. После замачивания чипа LSPR в растворах реагентов ELISA мы отслеживали сдвиг пика с помощью настольного считывателя микропланшетов. Вместо традиционных реакций фермент-субстрат, таких как система пероксидазы хрена (HRP)-3,3′,5,5′-тетраметилбензидин (TMB) (Van Weemen and Schuurs, 1971), мы ввели систему детектирующих антител, конъюгированных с AuNC, как показано на вставке к рис. 3C. После завершения реакций с ИЛ-10 в концентрациях 200, 20, 2 и 0,2 нМ с последующими этапами промывки для удаления избытка AuNC, а также неспецифически связывающих молекул мы получили спектры, окрашенные в красный цвет, на рисунках 5A–D. , соответственно. Подробный протокол представлен на рисунке S4. Когда 200 нМ концентрации белка IL-10 применяли для сэндвич-ELISA, пик экстинкции смещался в красную область на 18 нм от 769 нм.до 787 нм, как указано синей стрелкой на рисунке 5А.

Рисунок 5 . Спектры экстинкции для обнаружения IL-10 на сэндвич-платформе для анализа AuNC-конъюгированного Au LSPR. Черные линии представляют собой спектры экстинкции полосы Au LSPR с иммобилизованным антителом к IL-10, а красные линии представляют собой после специфического связывания белка IL-10 и антитела для обнаружения IL-10. Концентрации IL-10 составляли (A) 200 нМ, (B) 20 нМ, (C) 2 нМ и (D) 0,2 нМ. (E) График сдвига пика экстинкции при изменении концентрации IL-10 от 0,2 до 200 нМ. Планки погрешностей рассчитывали из среднего значения 3 повторных измерений. (F) СЭМ-изображение AuNC-конъюгированной полосовой платформы Au LSPR.

При более низкой концентрации IL-10, равной 20 нМ, мы отслеживали сдвиг пика экстинкции, как показано на рисунке 5B. После реакции ELISA пик экстинкции смещается в красную область с 758 до 770 нм, сдвиг пика составляет 12 нм. При еще более низких концентрациях, таких как 2 и 0,2 нМ, как показано на рисунках 5C,D, сдвиги пиков измеряются как 9и 6 нм соответственно. На фигуре 5E смещения пиков экстинкции представлены как функция концентрации IL-10 в наномолярном диапазоне. СЭМ-изображение на рис. 5F показывает структуру полоски AuNC-конъюгированного Au LSPR для концентрации 200 нМ образца для анализа IL-10.

Для оценки неспецифической адсорбции мы разработали четыре различных типа в качестве отрицательного контроля, как показано в таблице 1 (e–h). Для первого [Таблица 1(e)] и второго [Таблица 1(f)] отрицательного контроля вместо IL-10 использовали белки IL-2 и BSA в концентрации 200 нМ соответственно. Для третьего отрицательного контроля [Таблица 1 (g)] мы использовали только антитело для обнаружения IL-10 без конъюгации AuNC. В таблице 1 (а) и таблице 1 (ж), которые представляют собой те же условия, за исключением присутствия AuNC, смещения пиков экстинкции составляют 18 нм и 4 нм соответственно. Поэтому мы оцениваем, что производительность усиления AuNC достигает 450%. Это предполагает, что плазмонное взаимодействие происходит между коллоидным AuNC и полосой Au LSPR. Для последнего отрицательного контроля [Таблица 1 (h)] мы использовали антитело для обнаружения IL-6 вместо антитела для обнаружения IL-10. Для всех образцов отрицательного контроля сдвиг пика экстинкции был менее 4 нм, что свидетельствует о том, что вклад неспецифической адсорбции в сигнал LSPR был незначительным.

Таблица 1 . Краткое изложение двойной сенсорной платформы Au LSPR и отрицательных контролей (NC).

Выводы

Мы сообщаем о двойной платформе Au LSPR, которая может обнаруживать белок IL-10 в наномолярном диапазоне. Мы изготовили двойные изогнутые структуры Au на ПЭТ-пленке с использованием наноимпринтинга с рулона на рулон, чтобы получить пик экстинкции при 759 (±10) нм. Используя полоску AuNC и Au LSPR, мы успешно продемонстрировали аналитическую стратегию на основе LSPR для обнаружения IL-10. Усиление сдвига экстинкционного пика можно объяснить комбинацией двух механизмов: один — увеличение показателя преломления, а другой — плазмонная связь между AuNC и полосой Au LSPR. Наноструктура золота с несколькими изгибами имеет сильные плазменные колебания, но сдвиг пика экстинкции очень мал, когда события связывания происходят только с аналитами и белками антител. Вводя AuNC в качестве усиливающего фактора, мы демонстрируем двойной анализ полосы AuNC-Au LSPR, который можно легко применять для обнаружения различных биомолекул с высокой чувствительностью.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без неоправданных оговорок любому квалифицированному исследователю.

Вклад авторов

S-WN, SB и HL придумали идею и разработали эксперименты. SB выполнил синтез наночастиц, изготовление, подготовку анализа и оптическую характеристику. SB и S-WN выполнили электронную микроскопию, спектроскопический и спектрометрический анализ. HS и MK занимались изготовлением пленок с наноимпринтом. SL помогал с работой испарителя. J-EK и YK предложили модель белка. MK, J-SW и JO предоставили пленки с наноимпринтом. JP и S-WN получили финансирование. S-WN, SB и HL написали рукопись. SB, MK, HL и S-WN обсудили результаты, и все авторы предоставили комментарии к рукописи.

Финансирование

Это исследование было поддержано грантом Корейского проекта исследований и разработок в области технологий здравоохранения через Корейский институт развития индустрии здравоохранения (KHIDI), финансируемого Министерством здравоохранения и социального обеспечения Республики Корея (номер гранта: HI15C0001).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fchem.2020.00285/full#supplementary-material

Ссылки

Baek, S.H., Lee , S., Bae, J-H., Hong, C-W., Park, M-J., Park, H., et al. (2020). Изготовление наностолбиков и наноотверстий с помощью смешанной литографии. Materials Research Express 7 , 035008. doi: 10.1088/2053-1591/ab77ed

CrossRef Полный текст | Академия Google

Бэк, С. Х., Уорк, А. В., и Ли, Х. Дж. (2014). Обнаружение тромбина методом поверхностного плазмонного резонанса с усилением двойными наночастицами при субаттомолярных концентрациях. Анал. хим. 86, 9824–9829. doi: 10.1021/ac5024183