Вектор некст: ПАЗ 320405-04 Вектор NEXT 7.6 — характеристики, фото, цена у дилеров ГАЗ

Токио 108-0075

Vector Japan Co. Ltd.

Глобальные ворота, 10 эт.,
4-60-12 Hiraike-cho, Nakamura-ku, Nagoya-shi

Aichi, 453-6110

Vector Japan Co. Ltd.

9F Shin-Osaka Doi Building No.5
1-2-4 Miyahara, Yodogawa-ku, Osaka-shi

Osaka 532-0003

Vector Japan Co. Ltd.

31F Shinagawa Season Terrace,
1-2-70, Конан, Минато-ку

Токио 108-0075

Vector Japan Co. Ltd.

10F Global Gate,
4-60-12 Хирайке-чо, Накамура-ку, Нагоя-ши

Аити, 453-6110

Vector Japan Co. Ltd.

31F Shinagawa Season Terrace,
1-2-70, Конан, Минато-ку

Токио 108-0075

Vector Japan Co. Ltd.

31F Shinagawa Season Terrace,
1-2-70, Конан, Минато-ку

Токио 108-0075

Онлайн: support.vector.com

Часы приема указаны по следующему адресу:
— Телефон 10-12 / 13-17 (Пн- Пт, кроме выходных)
— Электронная почта, факс / круглосуточно в любое время

Vector Japan Co. Ltd.

31F Shinagawa Season Terrace,
1-2-70, Конан, Минато-ку

Токио 108-0075

Vector Japan Co. Ltd.

31F Shinagawa Season Terrace,
1-2-70, Конан, Минато-ку

Токио 108-0075

Штаб-квартираОбщий отдел продажТехнические продажи встроенного программного обеспечения и AUTOSAR KoreaSupportVectorAcademy (Корея)

Vector Korea IT Inc.

9F, Yongsan Prugio Summit Office-07, 69, Hangang-daero, Yongsan-gu

Seoul 04378

Vector Korea IT Inc.

9F, Yongsan Prugio Summit Office-dong,
69, Hangang-Daero, Yongsan-Gu

Seoul 04378

Vector Korea IT Inc.

용산구 한강 대로 69 용산 푸르지오 밋 업무동

서울 04378

Vector Corea It Inc.

9F, Yongsan

Vect Офис на высшем уровне-дон,
69, Hangang-daero, Yongsan-gu

Seoul 04378

Vector Korea IT Inc.

602, Yongsan Prugio Summit Office-dong

Seoul 04378

Штаб-квартира.

Электронная почта: [email protected]

Vector North America

66 Bovet Road, Suite 300

San Mateo, CA 94402

Телефон: +1 248 449-9290, вариант 1

3 Факс: +1 248 449-9704

Электронная почта: [email protected]

Vector North America

66 Bovet Road, Suite 300

San Mateo, CA 94402

Headquarters SalesSupportVectorAcademy

Vector North America

39500 Orchard Hill Place
Suite 500

Novi, Michigan 48375

Телефон: +1 248 449-9290, вариант 1

Факс: +1 248 449-9704

Электронная почта: [email protected] 0 Vector America

4

39500 Орчард Хилл Плэйс
Люкс 500

Novi, Michigan 48375

Vector North America

39500 Orchard Hill Place
Suite 500

Novi, Michigan 48375

Телефон: +1 248 449-9290, вариант 1

Факс: +1 248 449-9704

Электронная почта: [email protected]. com 0 Vector America

4

39500 Орчард Хилл Плэйс
Suite 500

Novi, Michigan 48375

Headquarters SalesSupport

Vector North America

1351 South County Trail, Suite 310

Восточный Гринвич, RI 02818

Vector North America

1351 South County Trail, Suite 310

East Greenwich, RI 02818

Vector North America

1351 South County Trail, Suite 310

East Greenwich, RI 02818 1351 South Countic

HeadquarterVecScan AB (Linköping)SalesSupportVectorAcademy

VecScan AB

Theres Svenssons Gata 9

417 55 Gothenburg

VecScan AB

Theres Gasta Svenssons 9

417 55 Gothenburg

VecScan AB

Theres Svenssons Gata 9

417 55 Gothenburg

VecScan AB

Theres Svenssons Gata 9

417 55 Gothenburg

VecScan AB

Teknikringen 9

SE-583 30 Linköping

Телефон: +46 (0)13–560 18 14

Факс: +46 31 764 76 19

Эл. для производства вирусных векторов

Несмотря на неоспоримую способность вирусных векторов доставлять генетические полезные нагрузки и несмотря на невероятные перспективы этого подхода в лечении широкого спектра заболеваний, включая метаболические, сердечно-сосудистые, мышечные, гематологические, офтальмологические и инфекционные заболевания, а также рак, существуют препятствия. остаются, особенно в производстве.

Из-за своей сложности производство вирусных векторов все еще развивается. Эксперты сходятся во мнении, что общий выход функциональных капсидов, содержащих желаемую генетическую нагрузку, является самым большим препятствием. Чаще всего используется транзиентная трансфекция, по существу создающая однократную «клеточную фабрику», то есть клеточную линию для каждого производственного цикла. Стабильная и оптимизированная производственная клеточная линия, подобная используемой для других биологических препаратов, обеспечит более надежный процесс, и его можно будет масштабировать, если клетки выращивать в суспензии.

Прогресс налицо, но для разработки и внедрения новых технологий и подходов к стандартизации процессов требуется время, особенно если в процессах используются реагенты, отвечающие требованиям GMP. Чтобы ускорить прогресс, разработчики внедряют новые инструменты. Шесть из этих разработчиков обсуждаются в этой статье. Каждый из них может предложить способы рационализации производства.

Масштабируемые линии клеток-хозяев

Вирусные векторы сложны — значительно сложнее, чем традиционные терапевтические рекомбинантные белки. Помимо того, что вирусные векторы состоят как из белков, так и из нуклеиновых кислот, их производство сопряжено с большими трудностями. Например, процессы производства вирусных векторов обычно включают реагенты для трансфекции на основе липидов или полимеров и буферы для лизиса, компоненты производства, которые не нужны в стабильных, экспрессирующих рекомбинантный белок системах производства.

По словам Джонатана Змуда, доктора философии, директора отдела клеточной биологии Thermo Fisher Scientific, производство вирусных векторов сопряжено с трудностями как в восходящем, так и в нисходящем направлении. Типичные проблемы включают проблемы с масштабируемостью, трудности с поддержанием производительности и общую ненадежность.

В последние годы был достигнут значительный прогресс в обеспечении масштабируемости. Тем не менее, обычно используемые клетки HEK293 остаются менее хорошо охарактеризованными для крупномасштабного производства, чем их аналоги клеток CHO, экспрессирующих белок.

Напротив, клетки насекомых Sf9 ( Spodoptera frugiperda ) хорошо зарекомендовали себя в отношении экономичного производства аденоассоциированного вируса (AAV) в масштабе 1000 л или больше; однако в системах производства насекомых есть этапы рабочего процесса, с которыми многие лаборатории не знакомы. Таким образом, транзиторная трансфекция клеток HEK293 остается наиболее эффективным способом получения AAV.

«Линия клеток-продуцентов образует основу любой системы экспрессии вирусного вектора», — говорит Змуда. «Необходимо проявлять большую осторожность, чтобы гарантировать, что соответствующая линия клеток-хозяев выбрана на самых ранних стадиях развития». Недостатки HEK29Адгезивная платформа 3T включает масштабируемость и потребность в сыворотке животных, тогда как присутствие онкогенного большого антигена T влияет как на адгезивную, так и на суспензионную платформу HEK293T.

Для решения проблем с клеточными линиями, связанных с производством AAV, компания Thermo Fisher разработала клетки для производства вирусов CTS (VPC) для производства масштабируемых лентивирусов с высоким титром в суспензии клеток HEK293. Совсем недавно Viral Production Cells 2.0 (VPC 2.0) были разработаны специально для производства AAV. VPCs 2.0 — это клон HEK29.3, выбранная за ее способность поддерживать продукцию высокого титра и высококачественного AAV в биореакторах с мешалкой посредством временной трансфекции в системе производства AAV без помощников Gibco AAV-MAX, которая в настоящее время доступна в качестве прототипа.

Компания Thermo Fisher Scientific разработала несколько клеточных линий для производства вирусов. Три из этих линий — клетки FreeStyle 293-F, Viral Production Cells (VPCs) и VPCs 2. 0 — были оценены на их способность продуцировать аденоассоциированный вирус (AAV) в суспензионной культуре с использованием Gibco AAV-MAX Helper. Бесплатная производственная система AAV. VPC 2.0, клон 293, выбранная для высокой экспрессии AAV, давала титры AAV в 45 и 10 раз выше, чем титры, генерируемые клетками FreeStyle 293-F и VPC, соответственно.

Контрактные организации по разработке и производству (CDMO), такие как компания Thermo Fisher Pharma Services, являются жизнеспособным вариантом для разработчиков генной терапии, которым нужны вирусные векторы. CDMO имеют опыт работы с рабочими процессами генной терапии в промышленных масштабах и могут обеспечить надежные и эффективные производственные процессы.

Проблема урожайности

Самым большим препятствием для производства вирусных векторов является выход. Все клеточные линии имеют ингибиторные последовательности, влияющие на продукцию векторов. И многое остается неизвестным о самих вирусных капсидах. Например, вирусные капсидные белки могут подвергаться различным посттрансляционным модификациям в различных производственных процессах. Возможно, потребуется сохранить некоторые важные структурные особенности для обеспечения активности in vivo.

«Если бы урожай можно было удвоить, можно было бы сократить расходы в два раза», — говорит Томас ВанКотт, доктор философии, глобальный руководитель отдела разработки продуктов в подразделении клеточной и генной терапии Catalent. Catalent был одним из первых предприятий, производивших вектор AAV, и первым лицензированным FDA CDMO для продуктов генной терапии.

VanCott предполагает, что разработчики могут быть не в состоянии производить достаточное количество капсидов AAV на клетку или достаточное количество функциональных капсидов. Другая трудность заключается в том, что процесс трансфекции сложен и требует оптимизации. Хотя до некоторой степени этот процесс является переносимым, каждая плазмидная система немного отличается. Плазмидная ДНК, основной ингредиент, производится всего несколькими компаниями.

«Они делают это хорошо, но не могут удовлетворить спрос», — утверждает ВанКотт. «Чтобы не отставать от графика и обеспечить единообразие на протяжении всего процесса, начиная с исследовательских партий и заканчивая классом GMP, мы инвестировали в внедрение этой возможности внутри компании. Кроме того, недавно мы объявили о приобретении бельгийской компании Delphi Genetics».

При последующей обработке функциональные капсиды должны быть очищены от пустых. Ультрацентрифугирование работает хорошо, но трудоемко и медленно. Хотя различные хроматографические методы работают лучше, более эффективный подход с использованием непрерывного потока был бы полезен в дополнение к улучшенным аналитическим методам для измерения процентного соотношения пустых и полных капсидов.

«Вирусные векторы должны быть интактными и нести интересующий ген», — подчеркивает ВанКотт. «Наша платформа минимизирует параметры, которые необходимо модулировать, чтобы ускорить процесс. Ключ сводится к обеспечению поставок с видимостью времени выполнения заказа».

Материалы, такие как одноразовые пакеты для биореакторов, среды и другие реагенты для производства, может быть трудно защитить. Производство вакцин против COVID-19 использует аналогичные материалы и имеет приоритет в цепочке поставок.

Запатентованные клеточные линии

Для генной терапии рабочими лошадками доставки являются AAV, аденовирус и лентивирус. Для их эффективного производства производителям нужна подходящая клеточная линия. «В идеале следует использовать стабильную клеточную линию, чтобы свести к минимуму вариации от партии к партии», — говорит Джеффри Хунг, доктор философии, коммерческий директор Vigene Biosciences. «Но клеточные линии очень сложно производить и поддерживать из-за некоторой присущей вирусным генам токсичности, когда они интегрируются в клеточный геном».

Для получения рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV) компания Vigene Biosciences использует метод транзиторной трансфекции тройной плазмидой. Изложенный здесь метод устраняет необходимость в вспомогательном аденовирусе путем введения основного вектора экспрессии rAAV в одну плазмиду (вверху слева) и дополнительную ДНК в две другие плазмиды (внизу слева). Плазмиды трансфицировали в производственную клеточную линию (в центре), которая продуцирует зрелые капсиды rAAV, содержащие интересующий трансген. После очистки (справа) эти вирусные частицы могут инфицировать клетки пациентов, чтобы доставить их полезную ДНК, но не могут дальше реплицироваться.

Компания Vigene разработала клеточные линии млекопитающих и насекомых для производства вирусов в виде суспензии или адгезивной культуры. Компания отмечает, что характеристики выбранной клеточной линии (происхождение/производство, время удвоения и допустимость вирусной инфекции и репликации) определяют эффективность вирусной продуктивности, тогда как условия роста определяют необходимые методы последующей обработки и тесты выпуска для конечного продукта. лекарственный продукт.

Поскольку клетки насекомых меньше, в заданный объем можно упаковать большее их количество. И они предлагают более высокую урожайность для культуры AAV. Технология линии клеток насекомых Vigene использует бакуловирусную систему экспрессии для получения векторов AAV в Sf9. клеток в бессывороточных условиях. Однако это не технология plug-and-play. Как только AAV упакован, бакуловирус необходимо очистить.

Для других клеток, таких как клетки HeLa, необходимо продемонстрировать удаление любой остаточной клеточной ДНК. Каждая клеточная линия представляет проблемы.

«Существует много возможностей для улучшения клеточных линий», — отмечает Хунг. Например, клеточные линии могут обеспечить лучшую эффективность упаковки и большую стабильность. Они могли бы устранить потенциальный вред, связанный с остаточной ДНК. Они также могут способствовать повышению технологичности и масштабируемости.

Vigene Biosciences поддерживает производство AAV, аденовирусов, лентивирусов и ретровирусов. Кроме того, компания предлагает услуги по поддержке «всего, от фундаментальных исследований до запуска коммерческого продукта».

«Вирусный вектор — это просто средство для достижения цели», — добавляет Хунг. «Наши клиенты могут находиться на любом этапе цикла разработки — на стадии разработки концепции, на стадии среднего или клинического производства. Иногда клиенты производили определенные продукты доклинического уровня. Эти клиенты обнаружат, что им выгодно сохранять ту же сотовую платформу. Эта опция доступна для обеспечения непрерывности производства».

Очистка и анализ

Оптимизация процесса сложна. Ученые, расположенные выше по течению, должны иметь дело с многочисленными параметрами культивирования и трансфекции, тогда как ученые, расположенные ниже по течению, должны справляться с отсутствием стандартных платформ, которые работают для всех векторов, серотипов и систем экспрессии. Ученые сталкиваются с некоторыми очень специфическими проблемами, такими как разделение пустых и полных капсидов AAV, а также необходимость адаптации последующего биопроцесса для каждого серотипа.

Для разработки сложных аналитических методов и требований требуется время. Процессы должны быть достаточно продуктивными с точки зрения общей эффективности, выхода, чистоты и характеристик, чтобы обеспечить надежность для повышения шансов на успех в регулировании, а также снизить риски производственных кампаний GMP.

«Мы вложили значительные средства в наши высокопроизводительные платформы, такие как платформа Ambr, для культивирования клеток, в сочетании с нашим программным обеспечением для разработки экспериментов», — говорит Амели Буле Равено, руководитель отдела стратегии выхода на рынок, Viral-Based Therapeutics, Сарториус Стедим Биотех. «Это позволяет производителям системно подходить к оптимизации параметров клеточной культуры и трансфекции».

Недавнее приобретение компании BIA Separations добавило «монолиты» этой компании, монолитные хроматографические колонки, в портфолио компании Sartorius. Монолиты имеют уникальный химический состав, который позволяет проводить очистку AAV с высоким разрешением. Sartorius также получает лабораторию разработки, которая разрабатывает процессы AAV.

BIA Separations, которая сейчас является частью Sartorius Stedim Biotech, разработала линейку монолитных хроматографических колонок, названных колонками CIMmultus. Их отличают крупные проточные каналы, предназначенные для работы с крупными белками, плазмидной ДНК, вирусоподобными частицами и вирусами, в том числе аденоассоциированными вирусами. Колонны полагаются на конвекцию, чтобы обеспечить быстрый массоперенос с низким сдвигом.

«У нас есть платформа, которую можно оптимизировать для быстрой очистки всех серотипов AAV и обеспечения эффективного разделения пустых и полных капсидов», — отмечает Буле Равено. «Платформа не полагается на дорогостоящие анализы сродства AAV. Вместо этого он использует комбинацию ортогональной химии для достижения необходимого уровня чистоты и выхода».

Приобретение BIA также помогает компании Sartorius предложить ученым расширенный набор надежных технологий для измерения важнейших параметров качества и рабочих характеристик. Например, колонки для аналитической хроматографии BIA CIMac являются эффективными инструментами для количественного определения и получения полной картины образца с помощью метода снятия отпечатков пальцев. Ранее компания Sartorius приобрела бизнес FortéBio компании Danaher Life Sciences, в результате чего компания Sartorius получила платформу Octet, позволяющую проводить быструю количественную оценку титра вируса в режиме реального времени в качестве альтернативы трудоемкому анализу ELISA.

Процессы должны соответствовать требованиям GMP. Их также необходимо стандартизировать. Удовлетворению этих потребностей способствует переход к суспензионным процессам и исследования AAV-независимых линий очистки.

Новые производственные платформы

Продолжающееся использование прилипших культур, устаревших клеточных линий и неоптимизированных единичных операций означает, что разработчикам или их CDMO необходимо уделять дополнительное время решению проблем выхода и эффективности. Даже опытные разработчики склонны полагаться на CDMO для решения этих проблем и доведения процессов до коммерческого масштаба. Однако CDMO имеют ограничения по емкости, поэтому существует нехватка доступных слотов для производства. Кроме того, не каждый CDMO подходит каждому разработчику с точки зрения возможностей процесса.

«MilliporeSigma применяет комплексный подход к удовлетворению потребности в более эффективном производстве вирусных векторов», — говорит Анджела Майерс, глава компании по редактированию генов и новым методам. «Для решения технических задач мы создали платформу для производства лентивирусов VirusExpress, которая сочетает в себе высокоэффективную упаковочную клеточную линию со средой с определенным химическим составом и оптимизированный процесс суспензирования для повышения масштабируемости предшествующих операций.

«Наряду с нашей работой по разработке шаблонных процессов для производства лентивирусов и AAV и будущей платформы VirusExpress для AAV мы стремимся создать новый стандарт платформы для производства вирусных векторов. Для решения отраслевых логистических проблем мы недавно инвестировали 121 миллион долларов в расширение наших мощностей CDMO по производству вирусных векторов в Карлсбаде, Калифорния. Внедрение наших продуктовых технологий позволит нам производить векторы лучше и быстрее».

В конце 2021 года на новом объекте будут установлены одноразовые биореакторы емкостью 1000 л, что позволит добавить как масштабные, так и производственные слоты для удовлетворения растущей потребности в высококачественных вирусных векторах. Растущее признание необходимости перехода на производство суспензий свидетельствует о том, что все больше представителей отрасли не только осознают проблемы, связанные с традиционным производством векторов, но и заранее думают о том, чтобы удовлетворить коммерческие масштабы и нормативные требования.

Кроме того, разработчики технологий создают целевые инструменты для решения проблем, связанных с операциями, уникальными для вирусных переносчиков. Существует сильное желание активно использовать уроки, извлеченные из коммерциализации других биопрепаратов за последние три десятилетия.

Качественное подтверждение клональности

Стадия клонирования одной клетки необходима при производстве вирусных векторов. «Клональность относится к стадии производственного процесса, на которой регулирующим органам требуются качественные доказательства того, что процесс был сведен к одной ячейке, чтобы свести к минимуму неоднородность в банке клеток и ограничить изменчивость процесса», — говорит Дункан Бортвик, доктор философии, менеджер по глобальному маркетингу. , Солентим. «Наша технология используется для обеспечения клонирования при производстве клеточных линий, а также для повышения эффективности роста клеток».

Технология Solentim, состоящая из разработанных компанией инструментов VIPS (Verified In-Situ Plate Seed) и Cell Metric, распределяет отдельные клетки и захватывает изображения, чтобы предоставить качественные доказательства клонирования. По словам компании, эта технология является золотым стандартом для сбора доказательств клонирования для подачи в регулирующие органы. В число пользователей входят GlaxoSmithKline, Thermo Fisher и BrammerBio (приобретена Thermo Fisher в 2019 году).

Компания Solentim разработала инструмент VIPS (Verified In-Situ Plate Seed) для клонирования отдельных клеток и обеспечения клонирования на основе изображений. VIPS распределяет клетки под очень низким давлением в нанолитровых каплях в лунки планшета, а затем каждую клетку визуализируют на дне ее сухой лунки, чтобы установить, что произошел посев, необходимый шаг в производстве вирусного вектора. Дополнительные доказательства клонирования можно получить с помощью сканера Cell Metric, который интегрируется с VIPS.

VIPS распределяет клетки при очень низком давлении в нанолитровых каплях в лунки планшета. Каждая ячейка изображена на дне сухой лунки как свидетельство посева. После того, как лунка автоматически заполняется средой, устройство визуализации клеток целых лунок Cell Metric берет на себя функции и делает снимки в день 0 для обеспечения двойной гарантии. Ежедневная визуализация продолжает определять, логически соответствует ли скорость деления скорости отдельной клетки, предоставляя дополнительные доказательства.

Применение технологии Solentim является привлекательной альтернативой использованию методов ручного разбавления и статистических данных. С помощью технологии Solentim можно накапливать данные, необходимые для убедительных доводов в пользу регулирующих органов. «Правильный этап клонирования чрезвычайно важен для разработки процессов, — говорит Бортвик.