Таблица цепей и шин Stihl для бензопил, электропил, маркировка
а также электропил, маркировка, подбор нужной цепи, шины
В таблице найдите свою модель инструмента, и перейдите по ссылке на нужный товар.
(ТАБЛИЦА В РАЗРАБОТКЕ)
ТАБЛИЦА ЦЕПЕЙ, ШИН STIHL | |||||
Применяется к модели Stihl | Длина шины | Шаг цепи | Паз шины | Кол.во звеньев | Ссылка |
MS 170, MS 180, MS181, MS192(T), MS 193; MSE140, HT75, HT101, HT131, HT-KM, HTE-60, MSА 160; 200. | 30 см / 12 дюймов | 3/8” | 1,1 мм | 44 зв. | Бухта Цепь Шина |
MS 170, MS 180, MS181, MS192(T), MS 193; MSE140, HT75, HT101, HT131, HT-KM, HTE-60, MSА 160; 200. | 35 см / 14 дюймов | 3/8” | 1,1 мм | 50 зв. | Бухта Цепь Шина |
MS180, MS181, MS192(T), MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE160, MSE180 | 25 см / 10 дюймов | 1/4” | 1,3 мм | 56 шт. | |
MS180, MS181, MS192(T), MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180 | 30 см / 12 дюймов | 1/4” | 1,3 мм | 64 шт. | |
MS180, MS181, MS192(T), MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180 | 30 см / 12 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 44 шт. | |
MS240, MS260, MS261 | 32 см / 13 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 50 шт. | |
MS200, MS210, MS211, MS230, MS250 | 35 см / 14 дюймов | 1/4” | 1,3 мм | 72 шт. | |
MS180, MS181, MS192(T), MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180 | 35 см / 14 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 50 шт. | |
MS180, MS181, MS192(T), MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180 | 40 см / 16 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 55 шт. | |
MS240, MS260, MS261 | 40 см / 16 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 60 шт. | |
MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180, MS200(T), MSE140, MSE160, MSE180, MS200(T), MSE140, MSE160, MSE180 – 61 звено) | 45 см / 18 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 62 шт. | |
MS240, MS260, MS261 | 45 см / 18 дюймов | 3/8” | 1,3 мм | 66 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390 | 32 см / 13 дюймов | 0,325” | 1,5 мм | 56 шт. | |
MS210, MS211, MS230, MS250 | 35 см / 14 дюймов | 0,325” | 1,5 мм | 56 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362 | 37 см / 15 дюймов | 0,325” | 1,5 мм | 62 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390 | 32 см / 13 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 56 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362 | 32 см / 13 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 50 шт. | |
MS210, MS211, MS230, MS250 | 35 см / 14 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 56 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MSE220 MS440, MS441, MS460 – 64 звена, MSE220– 63звена) | 37 см / 15 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 62 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MSE220 MSE220 | 37 см / 15 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 56 шт. | |
MS210, MS211, MS230, MS250 | 40 см / 16 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 62 шт. | |
MS240, 026, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MSE220, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS341, MS361,MS362, MS440, MS441, MS460 68 звеньев | 40 см / 16 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 67 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MSE220 | 40 см / 16 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 60 шт. | |
MS650, MS660 | 40 см / 16 дюймов | 0,404” | 1,6 мм | 55 шт. | |
MS250 | 45 см / 18 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 68 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MSE220, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460 | 45 см / 18 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 74 шт. | |
MS240, MS260, MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MSE220 | 45 см / 18 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 66 шт. | |
MS650, MS660 | 45 см / 18 дюймов | 0,404” | 1,6 мм | 60 шт. | |
MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS290, MS390, MSE220 MS290, MS390, MSE220 | 50 см / 20 дюймов | 0,325” | 1,6 мм | 82 шт. | |
MS290, MS390, MS341, MS360, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS460R, MS650, MS660, MSE220 | 50 см / 20 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 72 шт. | |
MS650, MS660 | 50 см / 20 дюймов | 0,404” | 1,6 мм | 66 шт. | |
MS290, MS390, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MS780, MS880 | 63 см / 25 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 84 шт. | |
MS440, MS441, MS460, MS650, MS660 | 75 см / 30 дюймов | 3/8” | 1,6 мм | 98 шт. | |
MS780, MS880 | 150 см / 60 дюймов | 0,404” | 1,6 мм | 173 шт. |
Бензопила STIHL MS 260 16″ (арт. 11212000423)
Дополнительные категории:
Печатать
Артикул: 11212000423
Есть в наличии
Характеристики
Тип двигателя: 2-х тактный
Объем двигателя (куб. см.): 50.2
Мощность двигателя (л.с.): 3.5
Объем топливного бака (л.): 0.46
Объем бака смазки цепи (л.): 0.29
Легкий запуск двигателя: Декомпрессионный к. .
-
Натяжение цепи: Винтовое
Длина шины (см.): 40
Количество звеньев цепи (зв.): 67
Шаг цепи: 0,325″
Толщина цепи: 1,6 мм.
Вес (кг. ): 4.8
Все характеристики
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Бесплатная предпродажная подготовка
Доставка в пределах МКАД — БЕСПЛАТНО (при сумме заказа от 10 000 руб)
Возможен самовывоз!Наш адрес и условия доставки
34 990 руб
Предложить свою цену
-
Характеристики и описание: Бензопила STIHL MS 260 16″ (11212000423)
Бензопила STIHL MS 260 с шиной 16” — универсальная и практичная модель. пила. Рекомендована к применению в садовых и фермерских хозяйствах, для выполнения работ по пилению дров и валке деревьев, для выполнения строительных работ. Эта пила имеет массу достоинств:
- Система легкого запуска. Пусковое устройство ElastoStart, декомпрессионный клапан и ручной топливный насос способствуют плавному запуску двигателя.
- Антивибрационная система. Точно рассчитанные буферные зоны смягчают передачу вибраций от двигателя и пильной цепи на рукоятку и ручку.
- Долговечный воздушный фильтр с системой предварительной очистки. По сравнению с традиционными воздушными фильтрами достигается более длительный срок службы фильтра.
- Боковое устройство натяжения цепи STIHL. Удобный способ натяжения пильной цепи, исключающий контакт с острой поверхностью.
- Компенсатор. Обеспечивает постоянство рабочей смеси, даже при увеличивающемся загрязнении воздушного фильтра.
- Цепной тормоз QuickStop Super (Q). Дополнительная система торможения: при отпускании задней рукоятки происходит торможение цепи.
- Однорычажная система управления. Все функции управления, такие как запуск, работа и остановка осуществляются одной рукой.
- Крышки баков, открываемые без помощи инструмента. Специальные крышки баков горючего и масла для легкого открывания и закрывания.
- Пильная цепь Oilmatic. Система Oilmatic обеспечивает снижение трения и износа и, тем самым, более длительный срок службы режущей гарнитуры.
Купить бензопилу STIHL MS 260 16″ и сопутствующие товары к ней можно в нашем интернет-магазине по отличной цене.
-
Гарантия и сервис: Бензопила STIHL MS 260 16″
-
Отзывы о товаре: Бензопила STIHL MS 260 16″ (11212000423)
Рейтинг товара: (0)
Написать отзыв:
Оцените товар:
Внимание!Ваш отзыв будет опубликован после предварительной проверки администратором сайта.
Ознакомиться с правилами публикации отзывов
-
Аксессуары : Бензопила STIHL MS 260 16″
Цепь STIHL 14″, 3/8″, 1.3 мм, 44 зв (63PS) 640 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 16″, 3/8″, 1.3 мм, 55 зв (63PS) 790 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)Цепь STIHL Duro 15″, 0. 325″, 1.6 мм, 62 зв (26RD3) 2 690 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Champion 3/8″, 1,3 мм, 44 зв. PRO (VS) 360 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 12″, 3/8″, 1. 3 мм, 44 зв (63PM) 640 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL Picco Duro 14″, 3/8″, 1.3 мм, 50 зв (63PDC3) 2 190 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 14″, 3/8″, 1.3 мм, 50 зв (63PM) 550 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL Duro 18″, 3/8″, 1. 6 мм, 66 зв (36RD3) 3 590 руб
Добавить к сравнению
Цепь STIHL 36″, 3/8″, 1.6 мм, 114 зв (36RD3) 6 490 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 14″, 3/8″, 1.3 мм, 52 зв (63PS) 740 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL Picco Duro 14″, 3/8″, 1. 3 мм, 52 зв (63PDC3) 2 240 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Champion 18″, 3/8″, 1.5 мм, 68 зв PRO (LG) 810 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Husqvarna 15″, 0.325″, 1.3 мм, 64 зв (h40) 720 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 14″, 3/8″, 1. 1 мм, 52 зв (61PMMC3) 650 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 16″, 3/8″, 1.6 мм, 62 зв (36RMX) 1 350 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 18″, 3/8″, 1.5 мм, 68 зв (35RMC) 1 190 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL 30″, 0. 404″, 1.6 мм, 91 зв (46RM) 2 020 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Husqvarna 15″, 3/8″, 1.5 мм, 56 зв (h52) 950 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Champion 16″, 3/8″, 1.6 мм, 66 зв PRO (LG) 790 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Husqvarna 10″, 1/4″, 1. 3 мм, 58 зв (H00) для высотореза 327PT5s 1 350 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь STIHL Picco Duro 16″, 3/8″, 1.3 мм, 56 зв (63PDC3) 2 440 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Champion 14″, 3/8″, 1.3 мм, 52 зв (L) 390 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Husqvarna 12″, 3/8″, 1. 3 мм, 45 зв (X-Cut MINI S93G) 920 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь Champion 325″, 1,3 мм, 66 зв. PRO (BP) 590 руб
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Рекомендуем посмотреть
Рекомендуем этот товарНа основе показателей продаж и отзывов покупателей
Бесплатная предпродажная подготовкаКликните по иконке, чтобы читать подробнее
Бензопила STIHL MS 261 C-M 16″ 52 990 руб
Есть
в наличии
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Рекомендуем этот товарНа основе показателей продаж и отзывов покупателей
Бесплатная предпродажная подготовкаКликните по иконке, чтобы читать подробнее
Бензопила STIHL MS 260 15″ 39 990 руб
Есть
в наличии
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Бесплатная предпродажная подготовкаКликните по иконке, чтобы читать подробнее
Бензопила Partner P360S 18″ 9 990 руб
Есть
в наличии
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Рекомендуем этот товарНа основе показателей продаж и отзывов покупателей
Бензопила Husqvarna 435 || 15″ 23 990 руб
Есть
в наличии
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Бензопила Champion 256 18″ 10 200 руб
Есть
в наличии
Добавить к сравнению
Сравнить (0)
Цепь для бензопилы Stihl MS 260, 270, 271, 280, 290
- Главная
- О фирме
- Оплата
- Доставка
- Система скидок
- Возврат и обмен товаров
- Договор публичной оферты
- Сервисные центры
- Кредит
- Рассрочка
- Как сделать заказ
- Согласие на обработку данных
- Вакансии
Внимание
Внимание с 12. 09.2022 по 25.09.2022 изменение режима работы магазина в Минске : пн-пт с 9:00 до 17:30 ,перерыв на обед с 13:00 до 13:30. В субботу магазин работает с 9:00 до 17:00
Цепи Oregon| Цепи Stihl| Цепь Husqvarna| Цепь для бензопилы husqvarna 137, 142, 340| Цепь для бензопилы husqvarna 55, 450,40, 440e, 445II, 455| Цепь для бензопилы Husqvarna 365 и 268| Цепь для бензопилы Husqvarna 236 и Partner 340S| Цепь для бензопилы Husqvarna 240 135 140 и Partner 350S 351| Напильник для заточки цепи бензопилы| Цепь для бензопилы Stihl MS180-250| Цепь для бензопилы Stihl MS 260, 270, 271, 280, 290| Цепь для бензопилы Stihl ms 361, 362
Написать
Позвонить
Позвоните нам
- Главная
- Цепь для бензопилы
- Цепь для бензопилы Stihl MS 260, 270, 271, 280, 290
+375(29)118-80-55
- Аэраторы газона
- Подметательные машины
- Мотокосы, триммеры, кусторезы
- Бензопилы
- Воздуходувки
- Газонокосилки
- Мойки высокого давления
- Снегоуборщики
- Измельчители садовые
- Мотобуры
- Мотоножницы
- Культиваторы, мотоблоки
- Минитракторы и газонокосилки с сиденьями
- Пылесосы бытовые
- Садовый инвентарь
- Дровоколы
- Декор для дачи и сада
- Виброплиты
- Генераторы
- Двигатели
- Мотопомпы
- Тепловые пушки и обогреватели
- Бурильные машины
- Бензорезы
- Плиткорезы
- Промышленные пылесосы
- Машины для подготовки поверхности
- Сварочные аппараты
- Бетономешалки
- Генераторы ATS-автоматика
- Система удаления / сбора пыли
- Лодочные моторы
- Лодки и катера
- Аккумуляторы для электромоторов
- Прицепы
- Эхолоты
- Судовое оснащение и аксессуары для водного транспорта
- Болгарки и УШМ
- Перфораторы
- Шуруповерты
- Дальномеры
- Копрессоры
- Пароочистители
- Электрорубанки
- Промышленные фены
- Нивелиры
- Насосы
- Отбойные молотки
- Штроборезы и бороздоделы
- лобзики
- Циркулярные пилы
- Аккумуляторы и зарядные устройства
- Вентиляторы
- Гвоздезабиватели
- Детекторы металла скрытой проводки
- Угло- и уклономеры
- Клеевые пистолеты
- Краскораспылители
- Ножницы по металлу
- Радио аккумуляторное
- Степлеры ударные и скобозабиватели
- Верстаки
- Отрезные машины по металлу
- Станки сверлильные
- Торцовочные пилы
- Фрезеры
- Станки и пилы ленточные
- Станки лобзиковые
- Станки рейсмусовые
- Станки точильные
- Станки шлифовальные
- Станки распиловочные
- Cтабилизаторы
- Плазменная резка
- Пневмоинструмент
- Термометры инфракрасные
- Стеклоочиститель для окон дома
- Сушилки для ковров
- Роботы-пылесосы
- Умные часы для бега, спорта, фитнеса и дайвинга
- Инспекционная камера
- Заклепочная техника
- Гидравлический пробойник отверстий
- Обжимные инструменты и резчики кабеля
- Гидравлический инструмент для обжима труб и труборезы
- Прочистные машины с тросиком
- Паяльники аккумуляторные
- Шпилькорезы аккумуляторные
- Виброшлифмашины
- Дельташлифовальные машины
- Пилы сабельные
- Оборудование для культиваторов
- Рукава напорные
- Гребные винты
- Цепь для бензопилы
- Шина для бензопилы
- Масла для бензопил и триммеров
- Масла для лодочных моторов
- Шнур кордовый
- Голова триммерная
- Звездочка для бензопилы
- Валочный клин
- Шнур стартера
- Cтанки для заточки цепей
- Свечи
- Аксессуары для работника
- Ножи для мотокос и газонокосилок
- Алмазные и абразивные круги
- Аксессуары для газонокосилок
- Рюкзаки строительные
- Комплектующие для моек высокого давления
- Средства для чистки и ухода
- Удлинитель-шнуры сетевые
- Спасательные жилеты для рыбалки
- Масло для мотоциклов
- Масло для автомобиля
- Масло для скутеров
- Масла для картинга
- Масла для квадроциклов
- Масла трансмиссионные Motul
- Набор бит для шуруповерта
- Сверла для перфоратора
- Фонари светодиодные
- Диски пильные для циркулярки
- Зубила и пики для перфораторов и отбойных молотков
- Кейсы для оборудования и инструментов
- Оснастка для полирования
- Оснастка забивания (Скобы, штифты и гвозди для степлеров)
- Патроны и переходники для перфораторов
- Пилки и полотна
- Щетки проволочные и абразивные
- Тарелки опорные и подошвы
- Фибровые и лепестковые круги
- Фрезы и шарошки
- Чашки
- Шлифкруги и шлифленты
- Коронки алмазные и биметаллические для сверления
- Оснастка воздуходувок
- Оснастка сварщика
- Стеpжни к клеевым пистолетам
- Наборы инструментов
- Топоры
- Лопаты
- Секаторы
- Сучкорезы
- Комбисистема
- Вилы
- Пила ручная
- Ножницы садовые
- Опрыскиватели
- Перчатки садовые
- Разбрасыватели-сеялки
- Наборы для выращивания и садоводства
- Манометры
- Домкраты
- Ножи
- Отвертки
- Маркеры
- Рулетки
- Шарнирно-губцевый инструмент
- Уровни
- Грабли
- Удалители и извлекатели сорняков
- Статьи
- Производители
- Sale
- Что подарить?
Бензопила Stihl MS 260: технические характеристики, отзывы, инструкция
Линейка бензопил Штиль, предназначенных для лесного хозяйства, начинается с модели Штиль MS 260. Бензопила штиль мс 260, хорошо адаптирована для тяжелых условий работы и является практически культовой пилой не только на территории РФ, но и за рубежом.
В этой статье рассмотрим характеристики и преимущества штиль 260, а также постараемся сравнить её с основными конкурентами.
Содержание
- Технические характеристики
- Модификации
- Сравнение с пилами конкурентами
- Инструкция Штиль 260
- Обкатка Штиль МС 260
- Безопасность
- Неисправности и ремонт Штиль 260
- Отзывы реальных владельцев
- Вывод
- Сейчас читают
Технические характеристики
Пила имеет двигатель внутреннего сгорания с мощностью 2,6 кВт, что в переводе на лошадиные силы равно 3,5. Этой мощности достаточно, чтобы справляться с заготовкой дров или промышленной вырубкой древесины. Объем двигателя, составляет чуть более 50 см3. В стандартной комплектации, бензопила может поставляться с двумя различными по длине шинами: 37 и 40 см. Хочется отметить, что мощность пилы позволяет устанавливать и более длинные шины — до 50 см.
Вес бензопилы Stihl MS 260 всего 4,8 кг, что для профессиональной модели очень мало. Работать бензопилой, имеющей такой вес гораздо комфортнее, чем с более тяжелыми моделями, при этом хороший запас мощности позволяет применять бензопилу для работы в сложных условиях в течение всего рабочего дня. Именно по этой причине, штиль 260 достаточно популярна.
Бензопила stihl ms 260 15, поставляется в комплекте с пятнадцати дюймовой шиной, шаг цепи которой составляет 0,325 дюйма.
Технические характеристики с официального сайта компании Stihl:
- рабочий объем, см³ — 50,2;
- мощность, л.с. — 3,5;
- вес, кг (без горючего, без направляющей шины и пильной цепи) — 4,8;
- уровень звуковой мощности, дБ(A) – 113;
- удельный вес, кг/кВт — 1,8;
- шаг цепи — 325 «;
- объём масляного бака, см³ — 290;
- уровень вибрации слева/справа, m/s² — 3,6/4,1;
- уровень звукового давления, дБ(A) – 99.
Модификации
Пила stihl 260, имеет всего несколько вариантов поставки. Это stihl ms 260 15 дюймов и Бензопила stihl ms 260 16 дюймов. Различаются эти модели только длиной пильной гарнитуры. Еще одна модификация, обозначается как Stihl MS 260 D. Данная модель интересна тем, что на ней установлен катализатор.
Благодаря тому, что катализатор дожигает отработанное топливо в глушителе, пила производит гораздо меньшее количество вредных веществ. Для РФ это неактуально, т. к. в нашей стране нет жестких требований для бензопил, по такому параметру, как вредные выбросы в атмосферу, но для европейских стран, это уже необходимо.
Можно заметить, что по сравнению с остальными бензопилами компании штиль, линейка модификаций 260-й пилы довольно скромная, а причина в том, что уже в серийном оснащении, пила имеет гораздо больше наворотов, чем остальные пилы.
Серийная модель оснащается следующими системами, облегчающими эксплуатацию:
- клапан, снижающий компрессию при запуске Stihl. Система просто необходима, для любой бензопилы, объем цилиндра которой более 40 см3. Она позволяет снизить сопротивление двигателя при запуске, что существенно увеличивает срок службы деталей стартера. Запускать бензопилу, оснащенную декомпрессионным клапаном намного проще, т. к. сопротивления компрессии практически не чувствуется;
- подогрев карбюратора. В зимнем режиме, бензопила, оснащенная данной системой, осуществляет забор воздуха, предварительно подогретого цилиндром, что исключает обледенения деталей карбюратора. Система позволяет одним движением, переключить Stihl 260 из летнего режима работы в зимний. В комплекте с пилой поставляется также и защита на кожух стартера, которая крепится в зимний период и защищает стартер и вентилятор от попадания снега;
- тормоз QuickStop — запатентованная система, разработанная инженерами компании STIHL, предназначена для мгновенной остановки пильной цепи в момент отскока бензопилы или при достаточно сильной отдаче;
- система понижения вибрации. Благодаря усиленным, металлическим амортизаторам, на Stihl MS 260 существенно снижена вибрация, которая передается от двигателя к ручкам пилы и далее воздействует на оператора. Благодаря чему, бензопилой намного приятнее работать и руки дольше не устают, как, например, при работе с инструментом, имеющим жесткие резиновые амортизаторы;
- компенсатор. Позволяет работать даже при сильно засорившемся воздушном фильтре и при этом не чувствовать провалов или снижения мощности двигателя. Система очень полезна для тех, кто привык к ежедневной, продолжительной работе бензопилой;
- управление двигателем и дроссельной заслонкой при помощи одного рычага;
- система Ematic — комплексная система, состоящая из регулируемого масляного насоса, шины и цепи Oilomatic. Предназначена, для эффективной смазки пильной цепи и снижения количества потерь масла, за счет точной регулировки подачи;
- топливные баки, с крышками, которые надежно фиксируются и открываются без применения дополнительных инструментов;
- и последнее, это система эластичного старта, которая организована за счет установки в стартер Stihl MS 260 дополнительной пружины, которая смягчает процесс запуска.
Сравнение с пилами конкурентами
Если сравнивать бензопилы по объему двигателя, то конкурентом stihl 260, является пила Husqvarna 450e ll, так как объем у них абсолютно одинаковый.
Проведем сравнение бензопил по основным параметрам.
Хускварна имеет неплохое оснащение. На ней установлен двухтактный двигатель с новомодной системой X-Torq®. По заявлениям производителя X-Torq снижает потребление топлива и вредные выбросы, но производитель забывает упомянуть, что эта система хоть и не намного, но все же снижает максимальную мощность двигателя. Мощность Хускварны составляет 2.4 кВт, в то время как Штиль 260 с аналогичным объемом выдает 2,6 кВт.
Вторая характеристика, по которой Хускварна проигрывает, это вес. Она весит 5,1 кг, против штилевских, 4,8. Разница, невелика, но в том случае, когда необходимо работать целый день, она дает о себе знать.
И последний момент который хотелось бы отметить, это ремонтопригодность бензопил. Ремонтировать Штиль MS 260 намного проще, чем устранять неисправности в Шведской пиле. В Хускварне сделано все так, что без специального инструмента, ремонтировать бензопилу невозможно. Если появляется подозрения на неисправность в карбюраторе, то Хускварновский карбюратор, проще выкинуть и купить новый, в то время как аналогичный узел у штиля, еще можно отремонтировать.
Инструкция Штиль 260
Инструкция бензопилы Штиль MS 260, это документ, разработанный специалистами компании, которые знают, как правильно использовать и обслуживать бензопилу. В ней описано практически все о пиле, начиная с того как произвести первый запуск и заканчивая тем, как правильно спиливать деревья. Прочтение инструкции, будет полезно не только начинающим пользователям, но и тем, кто уже не один год использует эту бензопилу.
Обкатка Штиль МС 260
Один из важных вопросов раскрытый в мануале, это обкатка бензопилы. Прочтение раздела, описывающего правильный запуск и обкатку, позволит избежать ошибок при её проведении, ведь такие ошибки могут привести к печальным последствиям, вплоть до капитального ремонта двигателя.
Советуем обкатывать пилу только после прочтения инструкции, а не наоборот.
Безопасность
Еще один важный раздел, который рекомендуется почитать и принять к сведению, это раздел «Безопасность». В этом разделе собрана информация о том, как работать Stihl MS 260, с минимальным риском получения травмы. После прочтения раздела, можно узнать, какие необходимо использовать средства индивидуальной защиты во время эксплуатации пилы.
Многие пренебрежительно относятся к безопасности при работе с бензопилой, т. к. наверно забывают, что она способна в считаные секунды оставить человека без ноги или руки, не говоря уже об обычных порезах, которые могут возникнуть по неосторожности.
Неисправности и ремонт Штиль 260
Основные неисправности бензопилы Штиль 260, это:
- Затрудненный запуск;
- Пила не заводится;
- Нестабильная работа на холостом ходу;
- Потеря мощности;
- Отсутствие подачи масла для смазки пильной цепи;
- Подсос воздуха через сальники коленчатого вала;
- Неисправности системы зажигания, которые выражаются в отсутствии искры.
Устранить возникшие неполадки в работе Stihl 260, например, если пила не заводится, можно в официальном сервисном центре производителя. При необходимости проведения ремонта и отсутствии возможности обратится в сервисный центр, можно провести ремонт самостоятельно.
Снизить риск возникновения неисправностей, можно при помощи своевременного обслуживания и чистки. Также стоит придерживаться рекомендаций производителя, при постановке бензопилы на длительное хранение.
Отзывы реальных владельцев
Ниже можно будет посмотреть видео отзыв владельца бензопилы штиль 260, который он сделал после года эксплуатации.
Отзыв сделан в виде обзора, по этой причине, является довольно информативным, а пока представим к прочтению реальные отзывы покупателей бензопилы Stihl MS 260, взятые с сайта одного из интернет-магазина по продаже бензопил.
Достоинства:
Хорошая пила. Мощности достаточно даже для выполнения сложных задач, оригинальная шина и цепь обладают высокой производительностью. Вес и наличие клапана, снижающего компрессию. Заводится стабильно, хорошо. Руки практически не устают от работы пилой, поэтому можно работать по несколько часов без остановки. Шумит, как и все подобные пилы. Её удобно и легко чистить, грязь хорошо удаляется. Удобно натягивать цепь, т. к. натяжитель расположен сбоку.
Недостатки:
Цена 27000, это дороговато. Немного плавают обороты при работе в режиме холостого хода. Наверно нужно провести регулировку.
Комментарий:
Впечатления от работы, после того как раньше у меня была старенькая Хускварна, конечно, приятные. Старую приходилось больше ремонтировать, чем работать ей. Хотя и она вполне справлялась со своими задачами. Но любой инструмент, когда-нибудь израбатывает свой ресурс. Главное, что я понял, это то, что не нужно экономить на расходниках. Выбирал между двумя моделями Stihl MS 250 и MS 260. Они отличались по цене примерно на 5000 р. Штиль 260 мне понравился больше. 250-я, какая-то, как игрушечная, но многие её хвалят. Единственное, что мешает при покупке, это высокая цена, но наверно, за качество нужно платить.
Я уже хотел купить Китайскую пилу, но после того как подумал и визуально оценил аналог, бросил эту идею и купил Штиль, о чем до сих пор не пожалел. Буду писать еще отзывы, после того, как побольше поработаю пилой.
Алексей. Смоленск. 2 ноября 2016г.
Вывод
Бензопила Штиль МС 260, отличается надежностью, качеством исполнения и богатым оснащением. Она отлично подойдет для профессиональной работы. Для того чтобы быть уверенным, что пила не подведет, необходимо периодически проводить обслуживание в сервисе и чистить пилу, после каждого отработанного дня.
Сейчас читают
- Все про карбюратор мотоблока, от регулировки до ремонта
- Основные причины, почему мотоблок глохнет при нагрузке в работе, наклоне, открытии воздушной заслонке и других случаях
- 3 лучших мотоблока Нева серии МБ, их плюсы и минусы, а также история компании
- Основные отличия мотоблока от культиватора и что лучше для участка 10 соток, дома и дачи
- 7 популярных способов изготовления культиватора своими руками
Цепь на штиль 260 в Украине.
Цены на Цепь на штиль 260 на Prom.uaРаботает
Крышка цепи STIHL MS 260,270,280 на бензопилу/мотопилу Штиль/Щіль/Щиль Winzor/Винзор
Доставка по Украине
230 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Крышка цепи STIHL MS 290/310/360 на бензопилу/мотопилу Штиль/Щіль/Щиль Winzor/Винзор
Доставка по Украине
230 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Крышка цепи STIHL MS 440/660/460/650 на бензопилу/мотопилу Штиль/Щіль/Щиль Winzor/Винзор
Доставка по Украине
230 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Крышка цепи STIHL MS 361/440 на бензопилу/мотопилу Штиль/Щіль/Щиль Winzor/Винзор
Доставка по Украине
230 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Натяжитель цепи для бензопилы STIHL MS 361,440,260,270 На штиль/Щиль/Штіль/Щіль в сборе
Доставка по Украине
248 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman. com.ua
Работает
Крышка натяжителя цепи на бензопилу для Stihl (Штиль) 260-362/380/381/440/441/460/461/650/660/661 WOODMAN
Доставка по Украине
36 грн
Купить
Мото Друг
Работает
Шина 35 см для бензопилы Stihl ms 180 цепь 50 звеньев 3/8 на шину 35см Цепь шина на Штиль180 35 см
Доставка по Украине
780 грн/комплект
Купить
moto-chempion
Работает
Натяжитель цепи «Штиль» 260 (оригинал)
Доставка по Украине
312 грн
Купить
RemDom.in.ua
Работает
Шина+цепь+звёздочка для бензопилы STIHL MS 230/023 на мотопилу Штиль/Штіль/, зірочка+ланцюг+направляюча
Доставка из г. Киев
1 250 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Ланцюг 095.00202 R на Grimme SE 150-60 / SF 150-60 / SV 260
Доставка из г. Ровно
12 546 грн
Купить
АДЕНА-АГРО
Работает
Ланцюг 095.00171 R на Grimme SE-150-60 / SF 150-60 / SV-260
Доставка из г. Ровно
15 375 грн
Купить
АДЕНА-АГРО
Работает
Ланцюг 095.00203 R на Grimme SE-150-60 / SF 150-60 / SV-260
Доставка из г. Ровно
14 350 грн
Купить
АДЕНА-АГРО
Работает
Ланцюг 095.00267 R на Grimme SE 150-60 / SF 150-60 / SV 260
Доставка из г. Ровно
14 350 грн
Купить
АДЕНА-АГРО
Работает
Ланцюг 095.00262 R на Grimme SE 150-60 / SF 150-60 / SV 260
Доставка из г. Ровно
14 350 грн
Купить
АДЕНА-АГРО
Работает
Прокладка декомпрессора на бензопилу для Stihl (Штиль) 240/260/360/440/460/650/660/780/880 WOODMAN
Доставка по Украине
104 грн
Купить
Мото Друг
Смотрите также
Работает
Светильник на цепи в стиле Лофт 3059 260*260*900
Доставка из г. Киев
524 грн
Купить
ДОМ СВЕТА
Работает
Цепь для бензопилы (суперзуб) шина 45см 67 звена 1,6мм .325″ шаг
Доставка по Украине
462 грн
Купить
Сервіс-Проф
Работает
Сапун бензобака на бензопилу для Stihl (Штиль) 231/240/241/251/260-391/440-880 WOODMAN
Доставка по Украине
129 грн
Купить
Мото Друг
Работает
Курок блокировки газа на бензопилу для Stihl (Штиль) 210/230/250/260/290/310/340/360/380/440/460-880 WOODMAN
Доставка по Украине
106 грн
Купить
Мото Друг
Работает
Цепь OREGON 3/8″р, 1. 3 мм, 44зв, 30см (91P044E)
Доставка по Украине
306 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні
Работает
Цепь OREGON 3/8″р, 1,3мм, 40зв, 35см (91VXL040E)
Доставка по Украине
168 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні
Работает
Цепь OREGON 3/8″р, 1,3мм, 40зв, 30см (91VXL040E)
Доставка по Украине
168 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні
Работает
Цепь OREGON 3/8″р, 1,3мм, 30см, 49зв (91P049E)
Доставка по Украине
230 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні
Работает
Цепь OREGON 3/8″р, 1,1мм, 25см, 39зв (90PX039E)
Под заказ
Доставка по Украине
350 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні
Работает
Успокоитель-натяжитель цепи распредвала, к-т, новые оригинальные запчасти на квадроцикл skymoto FORCE-260,
Доставка по Украине
1 927.53 грн
Купить
motoRUL
Работает
Цепь STIHL 41 звено, 3/8 шаг, 1. 3мм, 20 зубов/Цепь на бензопилу/электропилу Штиль Picco Micro (Пикко Микро)
Доставка по Украине
190 грн
Купить
Офіційний дилер Oleo-Mac в Україні — Logman.com.ua
Работает
Мотозвезда JT задняя (ведомая) под цепь 520 на 38 зубьев стальная JTR260.38
Доставка по Украине
733 грн
Купить
«Мотоконтинент»
Работает
Мотозвезда JT задняя (ведомая) под цепь 520 на 40 зубьев стальная JTR260.40
Доставка по Украине
809 грн
Купить
«Мотоконтинент»
Работает
Цепь Stihl суперзуб к бензопилам (67 вед.зв.,33 зубов, 3.25 шаг)
Доставка из г. Черновцы
334 грн
Купить
RemDom.in.ua
Цепь для пилы stihl ms 260 в Комсомольске-на-Амуре: 148-товаров: бесплатная доставка, скидка-50% [перейти]
386
454
Натяжитель цепи для Stihl MS—260/270/280/340/341/360/361/362/380//381/440/441/460/461/660/661 Тип:
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
mds.yandex.net/get-mpic/5272727/img_id5610085216394009489.jpeg/300×300″>Цепь пильная для Stihl-180, PATRIOT 50 звеньев, шаг 3/8 дюйма, паз 1.3 мм 50 звен., длина шины 14″,
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь 18″ STIHL МS 260/270 Oregon 22BP/LP-74E Количество звеньев цепи: 74
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Цепь для бензопилы 67зв. 0,325 1,6мм 16″ STIHL SUPER (Stihl 260,270) Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
regmarkets.ru/listpreview/images3/d0/73/d073f1e7742989d592db478a43f2571d.jpg»>Цепь шаг 0,325», посадка 1.6mm 62 звена (RMC) 15» шина (MS 260/261/270/ 271/280/290/291) STIHL
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Шина на цепную пилу STIHL MS 260/270 (15″ 37см. 0,325″ 1,6мм. 62зв.) Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1.6mm 62 звена для бензопилы STIHL MS 260 Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1.6mm 67 звеньев (RMC) 16″ шина для бензопилы STIHL MS 260 C
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1.6mm 62 звена для бензопилы STIHL MS 260 C Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Насадка короед на бензопилу STIHL MS 260 Производитель: STIHL, Запчасти для двигателя: муфта
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1. 6mm 82 звена (RSC) 20″ для бензопилы STIHL MS 260 C Производитель:
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1.6mm 67 звеньев (RMC) 16″ шина для бензопилы STIHL MS 260 Производитель:
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325», посадка 1.6mm 67 звеньев (RMC) 16» шина (MS 260/261/270/271/280/291) STIHL
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь для пилы РЫСЬ-8-(0,325)-1. 6-67 (Stihl 260 16) Производитель: Рысь, Тип оснастки: цепь, Длина
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь для бензопилы 62зв. 0,325″ 1.6мм 15″ STIHL SUPER (Stihl 260,270) Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь Rancher P-9-1,3-55 Rezer (Stihl-180,210,230,250 16″) №744 длина шины 16″, ширина паза 1.3 мм
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь шаг 0,325″, посадка 1.6mm 82 звена (RSC) 20″ для бензопилы STIHL MS 260 Производитель: STIHL,
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила STIHL MS 260 с шиной 15″, 38 см. Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38.1см, Вес: 4.8кг
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Шина на цепную пилу STIHL MS 260/270 (16″ 40см. 0,325″ 1,6мм. 67зв.) Производитель: STIHL, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензиновая пила STIHL MS 260 шина 16″ 2600 Вт/3.5 л.с Производитель: STIHL, Тип двигателя:
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
mds.yandex.net/get-mpic/5246613/img_id90988914229228289.jpeg/300×300″>1 455
1999
Карбюратор для бензопилы Stihl MS 260 Тип: Карбюратор для бензоинструмента, Ремкомплект для
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
mds.yandex.net/get-mpic/6354718/img_id4144945791171579167.jpeg/300×300″>поршневая группа для Stihl MS—260 110020 110020 Партномер: 110020
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Поршневая группа для STIHL MS—260 110020 Производитель XML: VbParts, Состояние: новое
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
1 499
2988
Карбюратор для Stihl MS—260 Тип: Карбюратор для бензоинструмента, Размер: Длина 5.000 Ширина 3.000
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
1 130
2261
Глушитель для бензопилы STIHL MS—260 121063 Тип: Глушитель для бензоинструмента, Размер: Длина
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
2 548
2998
Коленвал для бензопилы STIHL MS 260 Тип: Ремкомплект для бензоинструмента, Размер: Длина 15. 000
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
211
218
Собачка катушки стартера бензопилы Stihl MS 180/210/230/250/260/280/290/361/440/660 «BEST» Тип:
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
311
400
Крышка бака для бензопилы Stihl (Штиль) MS 250, 260, 261, 290 Тип: Ремкомплект для
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
469
780
Воздушный фильтр для бензопил Stihl MS 240/260 Тип: Фильтр воздушный для бензоинструмента, Размер:
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
2 369
2369
Поршневая группа бензопила Stihl MS 260 Тип: Цилиндро-поршневая группа для бензоинструмента,
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Цепь Rancher P-9-1,3-55 Rezer (Stihl-180,210,230,250 16″) №744 длина шины 16″, ширина паза 1. 3 мм
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
749
1198
Глушитель для бензопилы STIHL MS 260 Тип: Фильтр воздушный для бензоинструмента, Размер: Длина
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
461
461
Декомпрессионный клапан бензопилы для Stihl MS 240/260/360/381/440/460/461/650/660, FS 300,500 Тип:
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
mds.yandex.net/get-marketpic/1864756/piccab82af4441d1df69af4c0e4ef15738c/300×300″>Цепь для бензопилы Rezer PS-9-1.3-57, 16″, 3/8″, 1.3 мм, 57 звеньев, Парма М2/М4/М5, Carver Цепь для
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
карбюратор для Stihl MS—260 100061 100061 Партномер: 100061
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
jpeg/300×300″>Цепь для бензопилы Rezer PS-9-1.3-55, 16″, 3/8″, 1.3 мм, 55 звеньев, Stihl-180/210/230/250 Цепь Reze
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
поршневая группа для Stihl MS—260 44,7 мм 110055 110055 Партномер: 110055
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила Stihl MS—260 16 11212000423 3,5 л. с. 40 см
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
2 100
4265
Цилиндро-поршневая группа для бензопилы STIHL MS 260 (d-44,7мм) Тип: Цилиндро-поршневая группа для
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
глушитель для бензопилы STIHL MS—260 121063 121063 Партномер: 121063
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
катушка зажигания для STIHL MS 290, 390, 440, 260 121069 121069 Партномер: 121069
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
299
420
Впускной коллектор (колено) для бензопилы Stihl MS 240. 260 Тип: Фильтр воздушный для
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Фильтр воздушный Stihl для бензопил MS 260
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила Stihl MS—260 15 11212000425 3,5 л.с. 37 см
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Фильтр топливный Stihl для MS 260-660, 880
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Глушитель для бензопилы STIHL MS—260 121063 Производитель XML: VbParts, Состояние: новое
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Звездочка ведущая Stihl 0. 325″ 7Z для MS 260, 270, 280 (1037)
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
Поршневая группа для STIHL MS—260 44,7 мм 110055 Производитель XML: VbParts, Состояние: новое
В МАГАЗИНЕще цены и похожие товары
69 980
Stihl Бензопила Stihl MS 260 15″ Производитель: КВТ, Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38.1см
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь «Штиль» на б/п STIHL 16″ 1,6 — 0,325 (26RSС67) (Шт.260-280) «острый зуб» Производитель: Штиль,
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
46 990
Бензопила Stihl MS—260-15″ Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38. 1см
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила Stihl MS 260 15″ Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38.1см, Мощность (л.с.): 3.5л.с.
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь «Штиль» на б/п STIHL 16″ 1,6 — 0,325 (26RМС67) (Шт.260-280) Производитель: Штиль, Тип
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
55 990
Бензопила STIHL MS 260 15″ (37см) 0.325″ 1,6 62зв
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Пружина стартера для бензопилы STIHL MS 260 Производитель: STIHL, Запчасти для стартера : пружина
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила STIHL MS 260 с шиной 15″, 38 см. Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38.1см,
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
STIHL Амортизатор ms—260 прав. зад. normal1 Производитель: STIHL, Мост установки: задний, Сторона
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Насадка дебаркер для бензопилы STIHL MS 260 Производитель: Нылгинский механический завод, Запчасти
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
Цепь «Champion» на б/п Штиль 15″ 1,6 — 0,325 (22LP62) «PRO» (Шт.260,261) B063-LP-62E Производитель:
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила Stihl MS 260 15 Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 38.1см
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
48 990
Бензопила STIHL MS 260 15″ — 37 см Тип двигателя: бензиновый, Длина шины: 15см, Вес: 4.8кг
ПОДРОБНЕЕЕще цены и похожие товары
2 страница из 6
CitraNatal Harmony — CitraNatal Rx Nutritionals
Обновлено: 1 августа 2019 г. нам посредством использования веб-сайтов или мобильных приложений Миссии (совместно именуемых «Сайты»).
В этом Положении о конфиденциальности объясняется, как мы собираем, передаем, обрабатываем, используем и раскрываем ваши данные, а также излагаются наши методы обеспечения безопасности. Предоставляя нам свою личную информацию, вы соглашаетесь с ее передачей, обработкой, использованием и раскрытием, как указано в настоящем Заявлении о конфиденциальности.
Наш сайт может содержать ссылки на сторонние веб-сайты/контент/услуги, которые не принадлежат и не контролируются Mission. Mission не несет ответственности за то, как эти ресурсы работают или обрабатывают вашу личную информацию, поэтому мы рекомендуем вам внимательно ознакомиться с политикой конфиденциальности и условиями, связанными с этими сторонними ресурсами.
Какую информацию мы собираем
Мы собираем личную информацию (совместно именуемую «Личная информация»), которую вы решаете предоставить, например, посредством регистрации, приложений и опросов, а также в связи с вашими запросами. Эта личная информация может включать ваше имя, адрес, номер телефона, адрес электронной почты, род занятий и комментарии посетителей, которые вы отправляете. Иногда мы можем получать конфиденциальную личную информацию о вас, например, если вы добровольно предоставляете информацию о своем физическом или психическом здоровье в рамках запроса на информацию. Предоставляя нам свою Конфиденциальную личную информацию, вы даете согласие на обработку нами этих данных в целях, изложенных в настоящем Заявлении о конфиденциальности или любом предоставленном вам уведомлении о сборе.
Например, вы можете предоставить свое имя, контактную информацию, медицинскую, страховую и/или финансовую информацию в связи с рекламной акцией, программой помощи или поддержки пациентов или клиническим испытанием. Поставщики медицинских услуг могут предоставить информацию, касающуюся их специальности и профессиональной принадлежности.
Кроме того, мы можем автоматически собирать информацию о вас при использовании вами Сайтов, например, ваш IP-адрес и то, как вы перемещаетесь по нашим Сайтам. Время от времени мы можем использовать или дополнять имеющуюся у нас личную информацию о вас информацией, полученной от третьих лиц. Например, мы можем использовать такую информацию третьих лиц для подтверждения контактной или финансовой информации, для проверки лицензирования медицинских работников или для лучшего понимания ваших интересов путем связывания демографической информации с предоставленной вами информацией.
Как мы используем вашу личную информацию
Предоставляя свою личную информацию, вы соглашаетесь с тем, что, если это разрешено местным законодательством или если вы согласились получать от нас эти сообщения, мы можем использовать информацию:
- для ответа на ваши запросы;
- для повышения уровня обслуживания;
- для улучшения содержания наших сообщений;
- , чтобы предоставить вам советы, полезную информацию, новости о продуктах и обновлениях;
- , чтобы уведомить вас о наших новых продуктах и услугах;
- , чтобы узнать ваше мнение о наших продуктах и услугах;
- для рассмотрения вашего заявления о приеме на работу;
- для наших собственных административных целей и целей обеспечения качества;
- для сообщений о нежелательных явлениях или продуктах в Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США или зарубежные эквиваленты; и
- для других целей, которые могут быть подробно описаны на сайте или в мобильном приложении.
Другие случаи, когда мы можем раскрыть вашу личную информацию
В дополнение к другим способам использования и возможному раскрытию вашей личной информации, изложенным в настоящем Заявлении о конфиденциальности, Mission оставляет за собой право раскрывать личную информацию о вас, включая ваш адрес электронной почты, для сообщения государственным органам, сторонам в соответствующих юридические или регулирующие разбирательства, санкционированные председательствующим судом, трибуналом или государственным органом, а также иным образом в той мере, в какой это требуется или прямо разрешено применимым законодательством. В определенных особых случаях, когда это разрешено местным законодательством, мы можем раскрыть вашу личную информацию:
- , когда у нас есть основания полагать, что раскрытие этой информации необходимо для идентификации, связи или возбуждения судебного иска против кого-либо, кто может причинить вам вред или иным образом ущемить или вмешаться в наши права, собственность или деятельность других пользователей этого веб-сайта. или мобильное приложение, или любое другое лицо, которому такие действия могут причинить вред;
- , когда мы считаем, что этого требует закон, или в ответ на любое требование правоохранительных органов в связи с уголовным расследованием, либо гражданскими или административными органами в связи с незавершенным гражданским делом или административным расследованием; и
- в связи с крупной корпоративной сделкой, такой как продажа продуктовой линейки или подразделения, слияние, консолидация, продажа активов или в маловероятном случае банкротства.
Обобщенная/обезличенная информация
Мы можем раскрывать третьим лицам обобщенные или обезличенные данные, которые не позволяют установить личность. Агрегированные данные создаются путем объединения информации об отдельных лицах и описания данных в совокупности, , например. , 20% клиентов, которые нажали на акцию X, приняли участие в акции.
Передача личной информации аффилированным лицам и третьим сторонам
Мы можем передавать вашу личную информацию внутри группы компаний Mission, включая нашу дочернюю компанию, аффилированных лиц, подрядчиков и агентов в ходе обычной деятельности для осуществления деятельности, на которую вы согласились . Кроме того, мы иногда нанимаем других поставщиков услуг и деловых партнеров для выполнения функций от нашего имени, таких как предоставление технической поддержки для систем, в которых хранится ваша Личная информация, анализ данных, обслуживание клиентов и обработка кредитных карт. Им может потребоваться доступ к вашей личной информации для выполнения своих функций, но они не могут использовать вашу личную информацию для каких-либо других целей.
Если иное не указано на веб-сайте или в мобильном приложении, мы не будем продавать или сдавать в аренду Личную информацию другим третьим лицам, за исключением того, что ваша Личная информация может быть передана третьей стороне в случае прекращения деятельности этого сайта или его части. он и связанные с ним данные клиента продаются, переуступаются или передаются.
IP-адреса и информация об использовании веб-сайтов
IP-адрес — это набор цифр, который автоматически присваивается вашему компьютеру всякий раз, когда вы входите в систему своего интернет-провайдера или через локальную или глобальную сеть вашей организации. Веб-серверы автоматически идентифицируют ваш компьютер по IP-адресу, присвоенному ему во время вашего онлайн-сеанса.
Mission или сторонние компании, действующие от нашего имени, могут собирать IP-адреса для целей системного администрирования и аудита использования наших веб-сайтов. Мы также можем использовать IP-адреса для идентификации пользователей наших веб-сайтов, когда считаем необходимым обеспечить соблюдение условий использования веб-сайтов или защитить наш сервис, веб-сайты или других пользователей.
Мы также можем собирать информацию о типе браузера вашего компьютера и операционной системе, веб-сайтах, которые вы посещали до и после посещения наших веб-сайтов, стандартной информации журнала сервера, IP-адресах, данных о местоположении GPS, поставщике услуг мобильной связи и мобильном телефоне. операционная система. Мы собираем эту информацию, чтобы понять, как наши посетители используют наши веб-сайты и мобильные приложения, чтобы мы могли улучшить их и предлагаемые нами услуги. Мы также можем делиться этой сводной информацией с другими компаниями в составе группы Mission и с прочими третьими сторонами. Эта информация включает:
- общее количество посещений наших веб-сайтов и мобильных приложений;
- количество посетителей каждой страницы наших сайтов и мобильных приложений; и
- доменные имена интернет-провайдеров наших посетителей.
Однако мы не обязаны отвечать на электронные письма, отправленные веб-мастеру этого веб-сайта, и не можем гарантировать конфиденциальность таких сообщений.
Файлы cookie
Наши веб-сайты и мобильные приложения могут использовать технологию, называемую «файлы cookie». Файл cookie — это небольшой текстовый файл, который сервер размещает на вашем жестком диске. Файлы cookie позволяют нашим веб-сайтам и мобильным приложениям реагировать на вас как на личность. Веб-сайт или мобильное приложение могут адаптировать свои операции к вашим потребностям, симпатиям и антипатиям, собирая и запоминая информацию о ваших предпочтениях. Например, наш сервер может установить файл cookie, который избавит вас от необходимости вводить пароль более одного раза во время посещения веб-сайта.
Вы можете принять или отклонить файлы cookie. Большинство веб-браузеров автоматически принимают файлы cookie, но обычно вы можете изменить настройки своего браузера, чтобы отказаться от файлов cookie или получать предупреждение перед сохранением файлов cookie, если хотите. Пожалуйста, обратитесь к инструкциям вашего интернет-браузера или экрану справки, чтобы узнать больше об этих функциях и указать свои предпочтения в отношении файлов cookie. Если вы решите отказаться от файлов cookie, вы не сможете в полной мере использовать интерактивные функции наших веб-сайтов или любых других веб-сайтов, которые вы посещаете.
Информация из внешних источников
Если это разрешено местным законодательством, мы также можем собирать законно полученную информацию от третьих лиц для добавления в наши существующие базы данных пользователей. Часть этой информации может быть личной информацией. Мы делаем это, чтобы лучше ориентироваться на информационные предложения и рекламные кампании, которые, по нашему мнению, могут вас заинтересовать. Такая личная информация будет собираться и использоваться нами только в соответствии с тем основанием, на котором она была первоначально предоставлена субъектом, или иным образом, разрешенным местным законодательством.
Как мы защищаем вашу личную информацию
В Mission действуют политики конфиденциальности и безопасности, которые предназначены для обеспечения, насколько это возможно, безопасности и целостности всей личной информации. К сожалению, передача информации через Интернет или сетевое соединение мобильного телефона не является полностью безопасным. Хотя мы сделаем все возможное, чтобы защитить вашу личную информацию, как только она окажется в нашем распоряжении, мы не можем гарантировать безопасность личной информации, которую вы передаете на наши веб-сайты или в мобильные приложения: любая передача осуществляется на ваш страх и риск.
Доступ
Мы будем хранить вашу информацию только в течение периода, необходимого для достижения целей, изложенных в этом Заявлении о конфиденциальности, если более длительный период хранения не требуется или не разрешен законом. Вы можете связаться с нами в письменной форме, чтобы запросить обновление, исправление или удаление Личной информации, которую вы нам предоставили, в любое время, используя контактную информацию, указанную в конце настоящего Заявления о конфиденциальности. Ваше местное законодательство также может дать вам право на доступ к информации, которую вы нам предоставили. В некоторых странах вам может потребоваться заплатить разумную плату, чтобы покрыть наши расходы на предоставление вам этой информации.
Ссылки на другие веб-сайты
Наши веб-сайты и мобильные приложения могут время от времени предоставлять ссылки или встраивать сторонние веб-сайты или предоставлять подключаемые модули социальных сетей. Настоящее Заявление о конфиденциальности не распространяется на эти веб-сайты или сайты социальных сетей. Если вы решите зайти на такой связанный сайт, вы соглашаетесь с тем, что мы не несем ответственности за доступность таких веб-сайтов, не просматриваем и не одобряем, а также не несем ответственности, прямо или косвенно, за:
- то, как эти веб-сайты относятся к вашей Личной Информация;
- содержание таких веб-сайтов; и
- использование этих веб-сайтов другими лицами.
Прежде чем вводить какую-либо личную информацию, обязательно ознакомьтесь с юридическими положениями и заявлениями о конфиденциальности, размещенными на каждом веб-сайте или в мобильном приложении, к которому вы обращаетесь.
Согласие на обработку в Соединенных Штатах и других странах
Этот сайт принадлежит и управляется в Соединенных Штатах, но предоставляемая вами информация может быть доступна нашим аффилированным лицам, продавцам и поставщикам в других странах, в том числе в Европейском Союзе. Кроме того, если вы посещаете этот сайт из страны, отличной от Соединенных Штатов, ваше общение с нами обязательно приведет к передаче информации через международные границы. Уровень правовой защиты личной информации не одинаков во всех странах; тем не менее, мы примем меры безопасности, описанные в этом Заявлении о конфиденциальности, чтобы обеспечить безопасность вашей информации. Собранная личная информация может передаваться, храниться и обрабатываться в вашей стране проживания или в любой другой стране, в которой у Миссии (включая ее дочернюю компанию), субподрядчиков или агентов есть объекты, включая Соединенные Штаты и страны как внутри, так и за пределами Европейского Союза. Это означает, что ваша информация может обрабатываться в странах с более низкими стандартами защиты данных, чем в вашей стране проживания. Используя наши веб-сайты и мобильные приложения, вы даете согласие на любой сбор, передачу, обработку или хранение информации как внутри, так и за пределами страны вашего проживания, в том числе, возможно, внутри и за пределами Европейского Союза.
Использование наших веб-сайтов и мобильных приложений детьми
Если прямо не указано иное, веб-сайты и мобильные приложения, на которых размещено настоящее Положение о конфиденциальности, не предназначены и не предназначены для привлечения детей в возрасте до 13 лет. Мы не собираем личную информацию от посетители этой возрастной группы через эти веб-сайты или мобильные приложения.
Отказ от ответственности по медицинским показаниям
ЕСЛИ ВАМ НЕОБХОДИМА СРОЧНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ПОМОЩЬ, НЕМЕДЛЕННО ПОЗВОНИТЕ ПО ТЕЛЕФОНУ 911.
Содержание этого веб-сайта предоставляется только в информационных целях. Веб-сайт не может заменить медицинскую консультацию, диагностику или лечение вашего поставщика медицинских услуг. Только квалифицированный поставщик медицинских услуг может правильно ответить на конкретные вопросы, касающиеся вашего здоровья или потребностей в питании. Ничто на этом веб-сайте не должно использоваться для замены рекомендаций вашего поставщика медицинских услуг. Использование любой информации, представленной на этом веб-сайте, осуществляется на ваш страх и риск.
Заявление о соответствии
Компания Mission Pharmacal и ее дочерние и аффилированные лица внедрили программы соблюдения требований, которые включают, помимо прочего, кодекс этического поведения при взаимодействии с медицинскими работниками и политики по защите конфиденциальности и безопасности медицинской информации пациентов.
Для получения дополнительной информации об этих программах соответствия свяжитесь с сотрудником по соблюдению требований компании Mission Pharmacal по бесплатному номеру телефона: (800) 531-3333.
Изменения
Время от времени мы можем обновлять это Заявление о конфиденциальности. Мы рекомендуем вам периодически просматривать это Заявление о конфиденциальности, чтобы быть в курсе того, как мы помогаем защитить собираемую личную информацию. Ваше дальнейшее использование наших веб-сайтов и мобильных приложений означает ваше согласие с Заявлением о конфиденциальности и любыми обновлениями.
Данное заявление о конфиденциальности последний раз обновлялось: 1 августа 2019 г. мозга пациентов с болезнью Альцгеймера (БА) происходит от белка-предшественника амилоида-β (АРР) путем последовательного протеолитического расщепления с помощью BACE1 и γ-секретазы 1 . Расщепление АРР с помощью γ-секретазы происходит в нескольких сайтах внутри трансмембранного домена с образованием видов Aβ с гетерогенностью на карбоксильном конце 2,3 . Две основные формы Aβ имеют разные С-концы, оканчивающиеся на 40-м и 42-м остатках (Aβ40 и Aβ42 соответственно). Aβ42 является наиболее агрегируемым и массово откладываемым видом в головном мозге пациентов с AD и синдромом Дауна 4 . Мутации, связанные с семейной болезнью Альцгеймера (FAD), были идентифицированы в генах, кодирующих АРР, а также пресенилин (PSEN, далее именуемый PS), причем последний является каталитической субъединицей γ-секретазного комплекса 5 . Предыдущие исследования показали, что несколько мутаций FAD приводят к увеличению доли Aβ42, сильно вовлекая Aβ42 в патогенез AD. Однако до сих пор остается неясным, изменяется ли продукция Aβ42 при спорадическом БА, а также при старении. Кроме того, регуляторный механизм, который определяет сайт γ-расщепления, остается неясным. γ-секретаза представляет собой мультимерный мембранный белковый комплекс, состоящий из PS, никастрина (Nct), Aph-1 и Pen-2 (ссылки 3, 6). Предполагается, что активность γ-секретазы широко распределяется между транс — Сеть Гольджи и клеточная поверхность 7,8 . Но недавние исследования, включая генетику мух в отношении процессинга Notch, выявили преобладание активности γ-secretase в поздних эндосомах/мультивезикулярных тельцах (MVB) и лизосомах 9,10 . Т.о., эндоцитарная транспортировка γ-secretase может играть важную роль в генерации Aβ, в то время как его точная субклеточная локализация, а также молекулярные детали механизма доставки эндогенной γ-secretase все еще остаются в основном неясными.
Ген PICALM был идентифицирован как один из генетических факторов риска/защиты от болезни Альцгеймера в исследованиях полногеномной ассоциации у пациентов с поздним началом болезни Альцгеймера 11 . Большой метаанализ 74 046 человек 12 показал, что у носителей минорного аллеля (A) rs10792832 вблизи гена PICALM был снижен риск БА с отношением шансов 0,85–0,89. PICALM кодирует белок под названием CALM ( C латрин A сборка L лимфоидный M йелоидный лейкоз 13 ), который имеет фосфатидилинозитол-4,5-бифосфат (PtdIns(4,5)P 2 ), связывающий ANTH-домен на своем N-конце вместе с AP-2/клатрином связывающие мотивы в С-концевой области, что указывает на то, что CALM функционирует на начальной стадии клатрин-опосредованного эндоцитоза, способствуя правильному образованию покрытых клатрином ямок 14,15 . Совсем недавно было показано, что CALM напрямую взаимодействует с некоторыми эндосомальными белками R-SNARE (то есть VAMP2, VAMP3 и VAMP8) через свой домен ANTH и регулирует их клатрин-зависимый эндоцитоз 16 , что предполагает его дополнительную роль в прямом распознавании эндоцитарных грузовых белков. Что касается взаимосвязи между CALM и этиологией БА, некоторые полногеномные ассоциативные исследования показали генетическое взаимодействие PICALM с АроЕ , что подразумевает возможное участие CALM в процессе продукции/отложения Aβ 17 . Используя генетику дрожжей и модельных мышей AD, CALM недавно был вовлечен в эндоцитоз секретируемых Aβ и APP; однако его механистические детали были в основном неизвестны 18,19 .
Здесь мы обнаруживаем, что CALM регулирует эндоцитоз и субклеточную локализацию γ-секретазы и влияет на коэффициент продукции Aβ42. Наши данные повышают вероятность того, что CALM является эндогенным модулятором γ-секретазы и что его вариант влияет на начало болезни Альцгеймера, изменяя соотношение продукции Aβ42 в противоположном направлении по сравнению с FAD-связанными мутациями в APP и PS генов.
Результаты
Уровень экспрессии CALM коррелирует с соотношением Aβ42
Чтобы проанализировать влияние CALM на метаболизм Aβ in vivo , мы измерили уровни Aβ в головном мозге мышей с мутацией Picalm 20 . Предыдущие исследования показали, что изменения в эндогенном мозге мыши Aβ за счет сверхэкспрессии/нокаута FAD мутантного PS1 (ссылки 21, 22, 23) или нокаута PS1 (ссылка 24) 24 или BACE1 (ссылки 25, 26) происходили аналогично тем, которые наблюдались у конгенных мышей, скрещенных с человеческими трансгенными мышами APP. Поскольку гомозиготные мыши с нокаутом демонстрируют значительный дефект роста и умирают вскоре после рождения, мы решили использовать гетерозиготных Picalm +/− мышей, жизнеспособных без явных дефектов. Поразительно, мы обнаружили, что соотношение Aβ42/общее количество Aβ, то есть доля Aβ42 к общему количеству Aβ (=Aβ40+Aβ42), в растворимой фракции лизата головного мозга мышей Picalm +/− было значительно снижено. примерно на 20% по сравнению с мышами дикого типа (рис. 1а, б). Примечательно, что уровни экспрессии белков компонентов γ-секретазы (Nct и C-концевой фрагмент (CTF) PS1) в мозге Picalm +/- мышей были увеличены (рис. 1c-e). Чтобы выяснить, влияет ли CALM на процесс образования Aβ42, мы измерили Aβ, секретируемый культивируемыми клетками в среде. В хорошем согласии с результатами для мозга мышей, РНКи против Picalm в клетках Neuro2a (N2a), которая вызывала почти полное истощение белка CALM, приводила к статистически значимому снижению отношения Aβ42/общего Aβ в секретируемом Aβ (рис. 2a–e) независимо от последовательностей siRNA (рис. 2d) или видов APP (рис. 2e), что позволяет предположить, что уровни экспрессии CALM влияли на коэффициент продукции Aβ42. Кроме того, мы наблюдали накопление белка АРР полной длины (fl) и CTF, хотя уровни АРР были почти сопоставимы в мозге животных дикого типа и Picalm +/- мышей (см. рис. 1). Затем мы исследовали эффекты сверхэкспрессии CALM в клетках N2a. Ранее сообщалось об альтернативном сплайсинге мРНК CALM с внутренней делецией 50 аминокислотных остатков (CALM-S) 13,14 , хотя большая изоформа CALM (CALM-L) экспрессировалась в качестве основного вида в клетках N2a. Однако сверхэкспрессия ни CALM-L, ни CALM-S в клетках N2a не влияла на продукцию Aβ, подтверждая представление о том, что образование белкового комплекса CALM совместно с AP-2 и тяжелой цепью клатрина необходимо для регуляции клатрин-опосредованного эндоцитоза. 14,15 (рис. 2е–з). Поскольку генерация Aβ представляет собой многоэтапный процесс, очень важно определить, на какой этап генерации Aβ влияет истощение CALM. Ферментативная активность BACE1 в мозге Picalm +/- была почти сравнима с таковой у мышей дикого типа (рис. 3а). Затем мы измерили секрецию Aβ из CALM-истощенных клеток HeLa, экспрессирующих APP C99, прямой субстрат γ-секретазы 27 . Также наблюдалось снижение отношения Aβ42/общего Aβ (рис. 3b–d), что позволяет предположить, что потеря CALM влияет на процессинг APP, опосредованный γ-секретазой. Эти данные свидетельствуют о том, что клеточное количество белка CALM коррелирует с соотношением продукции Aβ42 на уровне расщепления γ-секретазой.
Рисунок 1: Соотношение Aβ42 в мозге снижено в мозге мышей Picalm +/− .( a ) Относительные уровни Aβ40 и Aβ42 в трис-растворимой фракции головного мозга 5-месячных мышей Picalm +/− или мышей дикого типа определяли с помощью сэндвич-ИФА ( 6 n n =7, среднее ± стандартная ошибка среднего ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). ( b ) Относительное соотношение Aβ42/общее количество Aβ в эксперименте ( a ) ( n =7, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( c ) Вестерн-блоттинг Трис-растворимой фракции головного мозга пятимесячных мышей Picalm +/− или мышей дикого типа с антителами против Nct, APP, CALM, PS1 CTF и α- тубулин. Полноразмерные пятна можно найти на дополнительном рисунке 1. ( d , e ) Количественная оценка интенсивности полос общего Nct ( d ) и PS1 CTF ( e ) в ( c ) ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ).
Изображение в полный размер
Рис. 2: Нокдаун CALM снижает соотношение Aβ42 в секретируемом Aβ.( a ) Уровни Aβ40 и Aβ42, секретируемых клетками N2a, обработанными нецелевым дуплексом APP или CALM siRNA ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по Стьюденту 4 t -тест). ( b ) Отношение Aβ42/общее количество Aβ в эксперименте ( a ) ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). ( c ) Клетки N2a, обработанные дуплексами siRNA, анализировали вестерн-блоттингом с антителами против CALM, APP и α-тубулина. ( d ) Отношение Aβ42/общее количество Aβ в секретируемом Aβ в кондиционированной среде из клеток N2a, трансфицированных siРНК против CALM с различными последовательностями-мишенями. ( e ) Вестерн-блот-анализ кондиционированных сред и лизатов клеток N2a, стабильно экспрессирующих человеческий АРР, с помощью антител против Aβ человека и антител против α-тубулина соответственно (верхняя панель). Соотношение Aβ42/общее количество Aβ рассчитывали на нижней панели ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( f ) Уровни Aβ40 и Aβ42, секретируемых клетками N2a, временно экспрессированными с помощью CALM-L или S ( n = 6, среднее ± стандартная ошибка среднего). ( г ) Отношение Aβ42/общего Aβ в эксперименте ( f ) ( n = 6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). ( h ) Лизаты клеток N2a в эксперименте ( f ) анализировали вестерн-блоттингом с антителами против CALM, Nct, APP и α-тубулина (mNct, зрелый Nct; imNct, незрелый Nct). Полноразмерные пятна для ( c ), ( e ) и ( h ) можно найти на дополнительном рисунке 1.
Полноразмерное изображение
Рисунок 3: CALM модулирует расщепление γ-секретазы.( a ) Относительная активность BACE1 во фракциях мембран мозга мышей дикого типа или Picalm +/− . Синтетический субстрат BACE1 на основе FRET инкубировали с мембранной фракцией в течение 6 часов, а затем измеряли флуоресценцию ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего). ( b ) Уровни Aβ40 и Aβ42, секретируемых клетками HeLa, экспрессирующими APP C99, обработанными нецелевыми дуплексами Nct или CALM siРНК ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по Стьюденту t — тест). ( c ) Отношение Aβ42/общее количество Aβ в эксперименте ( b ) ( n = 6, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( d ) Клетки HeLa, обработанные дуплексами миРНК, не являющимися мишенями, Nct или CALM, анализировали с помощью вестерн-блоттинга с антителами против CALM и α-тубулина. Полноразмерные пятна можно найти на дополнительном рис. 1. 9.0005
Изображение полного размера
CALM регулирует эндоцитоз комплекса γ-секретазы
Результат повышения уровня компонентов γ-секретазы в мозге мышей Picalm +/− побудил нас предположить, что CALM может повлиять на эндоцитоз и метаболизм γ-секретазы. Фактически мы обнаружили накопление зрелых НЗТ в лизате клеток CALM RNAi. Эксперимент по биотинилированию клеточной поверхности показал, что нокдаун CALM значительно увеличивает уровни зрелых Nct на клеточной поверхности (рис. 4). Однако внутриклеточная локализация и перенос γ-секретазы обсуждались в течение многих лет; более ранние сообщения предполагают, что γ-секретаза локализуется в TGN, плазматической мембране, эндосомах и лизосомах 9,28,29,30 . Важно отметить, что детальное клеточное биологическое исследование переноса γ-secretase затруднено из-за отсутствия подходящего зонда, который может специфически распознавать активную, полностью собранную γ-secretase. Недавно мы разработали мышиное моноклональное антитело A5226A против зрелого человеческого Nct, которое специфически включено в активную γ-секретазу 31 . Иммунофлуоресцентный анализ с использованием этого антитела с клетками HeLa показал, что γ-секретаза в основном колокализована с поздним эндосомальным/лизосомальным маркером LAMP1, что подтверждает некоторые результаты предыдущих отчетов (рис. 5а) 7,9 . Интересно, что истощение CALM вызывает накопление клеточной поверхности и менее заметную локализацию γ-secretase в поздних эндосомах. Кроме того, анти-LAMP 1 окрашивание стало рассеянным, указывая на то, что потеря CALM вызвала дезорганизацию поздних эндосом (Fig. 5a) за счет нарушения эндоцитоза VAMP8, что важно для слияния поздних эндосом, как сообщалось недавно 16 . Чтобы исследовать это дальше, мы настроили анализ поглощения A5226A для мониторинга эндоцитоза γ-секретазы. В контрольных клетках γ-секретаза интернализуется медленно и начинает накапливаться в EEA1-позитивных ранних эндосомах после 20 мин периода чейза и остается там через 60 мин чейза (звездочки, рис. 5б). Далее Чейз визуализировал γ-секретазу в EEA1-отрицательных поздних эндосомах на 480 мин (рис. 5с). Поразительно, что поглощение A5226A было заметно снижено в CALM-истощенных клетках (рис. 5b). Большая часть γ-секретазы, меченной A5226A, оставалась на клеточной поверхности даже после 60 мин периода преследования (стрелки, рис. 5b), и только незначительная часть достигала EEA1-позитивных ранних эндосом. Эндоцитоз γ-секретазы также блокировался обработкой Pitstop 2 (стрелки, рис. 5d), соединением, которое связывается с концевым доменом тяжелой цепи клатрина и нарушает динамику покрытых клатрином ямок, не влияя ни на сборку ямок, ни на секвестрацию грузы 32 . В соответствии с этими результатами, существенная совместная локализация A5226A и CALM была обнаружена на клеточной поверхности клеток HeLa, обработанных Pitstop 2, что свидетельствует о накоплении γ-секретазы в ямках, покрытых клатрином, в клетках HeLa, обработанных Pitstop 2 (фиг. 5e), предполагая, что γ-секретаза интернализуется клатрин-опосредованным эндоцитозом CALM-зависимым образом.
Рис. 4. Нокдаун CALM повышает уровень экспрессии зрелого Nct.( a ) Клетки фибросаркомы человека HT1080, обработанные нецелевым или CALM, анализировали с помощью вестерн-блоттинга. ( b ) Клеточная поверхность клеток HT1080 была биотинилирована с помощью NHS-SS-биотина, и меченые белки были селективно удалены с помощью шариков стрептавидина (mNct, зрелый Nct; imNct, незрелый Nct). ( c , d ) Количественное определение интенсивностей полос общего mNct ( c ) и mNct клеточной поверхности ( d ) в ( b ) ( n =3, среднее ± s.e.m.3 <0,05, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). Полноразмерные пятна для ( a ) и ( b ) можно найти на дополнительном рисунке 1.
Изображение в полный размер
Рисунок 5: CALM регулирует клатрин-опосредованный эндоцитоз γ-секретазы.( a ) Клетки HT1080, обработанные нецелевыми дуплексами миРНК или CALM, фиксировали и окрашивали поздним эндосомальным маркером анти-LAMP1 (пурпурный) и анти-Nct mAb A5226A для обнаружения эндогенной γ-секретазы (зеленый). Бар, 10 мкм. ( b ) Анализ поглощения с использованием анти-Nct mAb A5226A и трансферрина, конъюгированного с Alexa647 (голубой), в клетках HT1080, обработанных нецелевыми дуплексами или дуплексами миРНК CALM. В моменты времени, указанные слева, клетки фиксировали и окрашивали анти-EEA1 (пурпурный). A5226A, связанный с эндогенной γ-секретазой (зеленый), визуализировали вторичным антителом против IgG мыши, конъюгированным с Alexa488. Колокализация γ-секретазы в EEA1-положительном компартменте, а также накопление γ-секретазы на клеточной поверхности обозначены звездочками и стрелками соответственно. Бар, 10 мкм. ( c ) После 480 мин инкубации в анализе поглощения клетки HT1080 фиксировали и окрашивали анти-Nct mAb A5226A (зеленый) и анти-EEA1 (пурпурный). Большая часть γ-секретазы была локализована в не-EEA1-положительном лизосомальном компартменте. Бар, 10 мкм. ( d ) Анализ поглощения с использованием анти-Nct mAb A5226A (зеленый) в клетках HeLa, обработанных ДМСО или Pitstop 2 (30 мкМ). В моменты времени, указанные слева, клетки фиксировали и окрашивали анти-EEA1 (пурпурный). Колокализация γ-секретазы в EEA1-положительном компартменте, а также накопление γ-секретазы на клеточной поверхности обозначены звездочками и стрелками соответственно. Бар, 10 мкм. ( e ) Клетки HeLa, обработанные Pitstop 2 (30 мкМ) в течение 3 часов, фиксировали и окрашивали анти-Nct mAb A5226A (зеленый) и анти-CALM (пурпурный). Конфокальное изображение накопления γ-секретазы на клеточной поверхности было получено с помощью конфокального микроскопа Leica SP5. Бар, 10 мкм.
Изображение в натуральную величину
Этот вывод согласуется с биохимическими данными, полученными с помощью анализа эндоцитоза на основе поверхностного биотинилирования с использованием расщепляемого биотинового реагента, NHS-SS-biotin. Обработка 2-меркаптоэтансульфонатом натрия (MeSNa) вызывает отделение NHS-SS-биотина от белков на поверхности клетки, но не от интернализованных белков (рис. 6а). С помощью этого реагента количество биотинилированных белков, которые защищены интернализацией, может быть определено количественно с помощью стрептавидиновых гранул в качестве «эндоцитированных белков» после соответствующих периодов поиска 33 . Количество интернализированного пула меченых MeSNa Nct в контрольных клетках было значительно выше, чем в клетках, обработанных миРНК CALM (рис. 6b-e). Мы также обнаружили, что уровни Nct в мозге мышей Picalm +/- и CALM-истощенных клетках были значительно выше, чем в контроле (рис. 1 и 4), что указывает на то, что Nct накапливается, возможно, в виде следствие отсроченного CALM-зависимого эндоцитоза и последующей деградации. В предыдущем отчете предполагалось, что нокдаун CALM 9 повлиял на эндоцитоз продукции APP и Aβ в клетках N2a, сверхэкспрессирующих человеческий APP. 0155 19 . Важно отметить, что уровни АРР на клеточной поверхности регулируются не только эндоцитозом, но и внеклеточным выделением с помощью α-секретазы. Однако нокдаун CALM вызывал очень ограниченное влияние на количество эндоцитированного MeSNa-меченого APP с клеточной поверхности клеток HT1080 и N2a даже при обработке GM6001, которая ингибирует шеддинг на клеточной поверхности (рис. 6c, e). Эти данные указывают на то, что эндоцитоз эндогенного АРР не регулируется CALM и что избыточная экспрессия может вызывать избыток экзогенного АРР в регулируемые CALM покрытые клатрином ямки. Поддерживая эту точку зрения, снижение общей секреции Aβ на Picalm РНКи из сверхэкспрессированного АРР человека (34,4% от стабильной экспрессии, 74,4% от временной экспрессии нецелевой РНКи) была выше, чем из эндогенного мышиного АРР в клетках N2a (26,4% нецелевой РНКи) (рис. 6f). ). Недавно сообщалось, что AP-2 и CALM связываются с LC3, чтобы облегчить клиренс APP CTF путем аутофагии 34 . Мы исследовали, участвует ли АРР в эндоцитозе γ-секретазы путем нокдауна эндогенного АРР. Мы провели анализ включения A5226A в клетках с нокдауном APP, CALM и APP/CALM (рис. 7). Истощение экспрессии АРР не влияло на эндоцитарный транспорт γ-секретазы. Эти данные свидетельствуют о том, что АРР и его связывающие белки не участвуют в эндоцитозе γ-секретазы с помощью CALM.
Рисунок 6: Интернализация γ-секретазы снижается при нокдауне CALM.( a ) Схематическая диаграмма анализа поверхностного биотинилирования-десорбции для оценки скорости эндоцитоза с использованием NHS-SS-Biotin. NHS-SS-биотин расщепляли восстанавливающим реагентом MeSNa, чтобы различать интернализованные и локализованные на поверхности белки. ( b ) Влияние CALM RNAi на интернализацию γ-секретазы и АРР в клетках HT1080. Суммарные биотинилированные белки (MeSNa (-)) и интернализованные белки (MeSNa (+)) в лизате анализировали и визуализировали с помощью вестерн-блоттинга. ( c ) Соотношение интернализованных белков через 60 мин в ( b ) ( n =3, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( d ) Влияние CALM RNAi на интернализацию γ-секретазы и АРР в наивных клетках N2a при 30-минутном поиске. ( e ) Соотношение интернализованных белков через 60 минут в ( d ) ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( f ) Влияние CALM RNAi на уровни общего секретируемого Aβ из наивных клеток N2a, стабильно или временно экспрессирующих человеческий АРР, измеренное с помощью ELISA ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по сравнению с каждой нецелевой РНКи по критерию Стьюдента t ). Специфическую систему ELISA для Aβ человека использовали для обнаружения Aβ в трансфицированном АРР человека. Полноразмерные пятна ( b ) и ( d ) можно найти на дополнительном рисунке 1.
Полноразмерное изображение
Рисунок 7: Нокдаун АРР не повлиял на эндоцитоз γ-секретазы.Анализ поглощения с использованием анти-Nct mAb A5226A в клетках HT1080, обработанных нецелевой миРНК CALM или APP. В моменты времени, указанные слева, клетки фиксировали и окрашивали анти-EEA1 (пурпурный цвет), как на фиг. 5. Колокализация γ-секретазы в EEA1-положительном компартменте обозначена звездочками. Бар, 10 мкм.
Изображение с полным размером
Было показано, что CALM регулирует эндоцитоз подмножества мембранных белков в качестве груза 14,20,35,36,37 . Что касается распознавания груза, недавно было показано, что VAMP8, один из белков R-SNARE, соединяется непосредственно с С-концевым краем домена ANTH и интернализуется CALM-зависимым образом -16. Чтобы проверить возможность того, что CALM также напрямую распознает γ-секретазу в качестве эндоцитарного груза, мы провели 9 экспериментов.0163 Эксперимент по связыванию in vitro с использованием слитых с GST рекомбинантных белков CALM, кодирующих N-концевой домен PtdIns(4,5)P 2 , связывающий ANTH, или С-концевую область, которая содержит множественные мотивы связывания клатрина и AP-2 (ΔN ) (рис. 8а). Мы подтвердили, что VAMP8, а также AP-2 специфически взаимодействуют с рекомбинантным доменом ANTH и белком ΔN CALM соответственно (рис. 8b). Неожиданно AP-2 также взаимодействует с доменом ANTH, что повышает вероятность того, что эта область содержит новый связывающий домен AP-2. В этом состоянии мы обнаружили, что эндогенный Nct также связывается с доменом ANTH, но не с белком ΔN (рис. 8б). Большая часть Nct, связанного с GST-ANTH, находилась в незрелой форме, которая представляет виды Nct, обитающие в ER. Однако в лизатах фибробластов 9 эта полоса отсутствовала.0163 Ncstn нокаутных мышей, обнаруженных при трансфекции человеческого Nct-V5, что указывает на то, что этот полипептид представляет собой Nct (фиг. 8c). Кроме того, мы наблюдали связывание зрелых Nct, которые находятся на поверхности клетки (см. рис. 8c-e и обсуждаются ниже). Поскольку Nct первоначально образует субкомплекс с Aph-1, а затем связывается с C-концом PS в процессе сборки γ-secretase 6,7 , возможно, что Nct косвенно взаимодействует с доменом ANTH через другие субъединицы. Однако взаимодействие Nct с рекомбинантным доменом ANTH также наблюдалось в лизатах фибробластов, лишенных PS или Aph-1, что указывает на то, что CALM напрямую распознает Nct как эндоцитарную нагрузку в комплексе γ-secretase (Fig. 8d). Примечательно, что нокдаун VAMP8 не вызывал различий, скорее, небольшое увеличение количества Nct, связанного с доменом ANTH, что указывает на возможную конкуренцию между Nct и VAMP8 за их связывание с доменом ANTH (рис. 8e). Взятые вместе, мы впервые показали, что γ-секретаза конститутивно интернализуется через клатрин-зависимый путь в качестве эндоцитарного груза CALM (Fig. 8f).
Рисунок 8: CALM напрямую распознает γ-секретазу.( a ) Схематическое изображение рекомбинантных белков, использованных в этом исследовании. ( b ) Анализ GST pull-down с использованием лизатов клеток HeLa или N2a. Связанные белки анализировали вестерн-блоттингом с использованием антител против AP-2, VAMP8 и Nct (mNct, зрелый Nct; imNct, незрелый Nct). ( c ) Анализ GST pull-down с использованием лизатов из Ncstn нокаутных фибробластных клеток, экспрессирующих имитацию или человеческий Nct с С-концевой меткой V5. ( d ) Анализ GST pull-down с использованием лизатов клеток фибробластов Aph2a/b DKO и Psen1/2 DKO. ( e ) Влияние нокдауна VAMP8 на взаимодействие между CALM и Nct. Две разные siRNA обрабатывали клетками HeLa и проводили анализ GST pull-down, как в ( a ). ( f ) Схематическое изображение связывания CALM и Nct в комплексе γ-секретазы. Полноразмерные пятна ( b – e ) можно найти на дополнительном рис. 1.
Изображение в натуральную величину
Коэффициент продукции Aβ42 увеличивается при кислом рН
Чтобы проверить, влияет ли потеря CALM непосредственно на ферментативную функцию γ-секретазы, мы выполнили анализ γ-секретазы in vitro с использованием мембранных фракций, растворенных в детергенте. из CALM-истощенных клеток (рис. 9). Мы не наблюдали снижения соотношения Aβ42/общее количество Aβ у de novo , сгенерированного Aβ, что свидетельствует о том, что нокдаун CALM не влиял на внутреннюю ферментативную активность γ-секретазы. Затем мы обратили внимание на обнаружение изменения локализации γ-секретазы при истощении CALM. Это привело нас к предположению, что на активность γ-секретазы повлияла ее измененная субклеточная локализация. Чтобы изучить эту возможность, мы использовали фармакологический подход с использованием YM201636, который ингибирует фосфатидилинозитол-3-фосфат-5-киназу Pikfyve. Pikfyve фосфорилирует PtdIns3P с образованием PtdIns(3,5)P 2 и отвечает за созревание ранних эндосом/мультивезикулярных телец в деградирующие поздние эндосомы/лизосомы 38 . Обработка YM201636 вызывала повышенную вакуолизацию и перераспределение EEA1 и LAMP1, как сообщалось ранее 38 (рис. 10а). Интересно, что YM201636 вызывал снижение соотношения Aβ42/общее количество Aβ в секретируемом Aβ, а также накопление зрелых Nct, APP полной длины и CTF, аналогично таковым в CALM-истощенных клетках (Fig. 10b-d). В соответствии с этим нокдаун YM201636-мишеневой киназы Pikfyve также снижал соотношение Aβ42/общее количество Aβ наряду с накоплением APP и CTF (рис. 10e–g), что позволяет предположить, что опосредованное Pikfyve позднее созревание эндосом тесно связано с продукцией Aβ42. . Однако инкубация мембранной фракции клеток, обработанных YM201636, не показала различий в отношении Aβ42/общего Aβ в de novo -генерированный Aβ (рис. 10h), предполагая, что снижение соотношения Aβ42/общее количество Aβ в YM201636 не было вызвано измененным липидным составом мембраны (то есть снижением уровней PtdIns(3,5)P 2 ). Во время эндосомального созревания просвет органеллы постепенно закисляется по мере продвижения к лизосомам. Чтобы проверить, является ли подкисление эндосомы критичным для продукции Aβ42, мы протестировали несколько различных pH при инкубации мембраны. Примечательно, что отношение Aβ42/общее количество Aβ увеличивалось вместе со снижением pH (рис. 10i). Эти данные свидетельствуют о том, что степень закисления в эндосомальном компартменте, где находится γ-секретаза, ответственна за увеличение отношения Aβ42/общего Aβ при γ-расщеплении.
Рисунок 9: Внутренняя ферментативная активность γ-секретазы в клеточных мембранах, истощенных CALM.Уровни образования de novo Aβ ( a ) и соотношение Aβ42/общее количество Aβ ( b ) в анализе γ-секретазы in vitro с использованием клеточной мембраны, обработанной нецелевыми или CALM дуплексами миРНК ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего).
Изображение в натуральную величину
Рисунок 10: Закисление в результате эндосомального созревания является критическим фактором, определяющим соотношение Aβ42.( a ) Влияние YM201636 на локализацию LAMP1-позитивного компартмента и эндогенной γ-секретазы в клетках HeLa. Бар, 10 мкм. ( b , c ) Уровни секретируемого Aβ из клеток N2a ( n =3, среднее ± стандартная ошибка среднего) ( b ) и отношение Aβ42/общее количество Aβ ( c ), обработанных ДМСО или YM20 ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего, * P <0,05 по критерию Стьюдента t ). ( d ) Клетки N2a, обработанные ДМСО или YM201636, анализировали с помощью вестерн-блоттинга с антителами к АРР, Nct и α-тубулину (mNct, зрелый Nct; imNct, незрелый Nct). ( e , f ) Эффект нокдауна Pikfyve на уровни секретируемого Aβ клетками N2a ( n =6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по тесту Стьюдента t ) ( e ), соотношение Aβ42/общее количество Aβ ( f ) ( n = 6, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). ( g ) Клетки N2a, обработанные дуплексами APP или Pikfyve siRNA, анализировали вестерн-блоттингом с антителами к APP, Nct и α-тубулину. ( ч ) Уровни ( слева ) и соотношение Aβ42/общее количество Aβ ( справа ) в de novo Aβ, полученном в бесклеточном анализе с использованием мембран, полученных из клеток APP 695 , экспрессирующих HEK293, предварительно обработанных ДМСО или YM201636 ( n = 3, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). ( i ) Уровни ( слева ) и соотношение Aβ42/общее количество Aβ ( справа ) в de novo Aβ, полученном в бесклеточном анализе с использованием APP 695 -экспрессирующие HEK293 клеточные мембраны при различных условиях pH (7,0 или 6,0) ( n =3, среднее ± стандартная ошибка среднего, ** P <0,005 по критерию Стьюдента t ). Полноразмерные пятна для ( d ) и ( g ) можно найти на дополнительном рис. 1.
Полноразмерное изображение
Обсуждение
интернализуется посредством клатрин-опосредованного эндоцитоза, который регулируется CALM. Точная субклеточная локализация активной γ-секретазы долгое время оставалась загадкой 8 . Недавние исследования, включая генетику мух, выявили преобладание процессинга Notch в эндолизосомной системе 10 . Однако маршрут доставки γ-секретазы, а также механизм ее регуляции редко описывались. Наши результаты, представленные здесь, ясно показывают, что γ-секретаза эндоцитозируется с клеточной поверхности и транспортируется в лизосомы, и что этот путь регулируется CALM. Более того, интересно, что анализ связывания показал, что CALM напрямую распознает Nct как эндоцитарную нагрузку в комплексе γ-secretase. Неожиданно значительное количество незрелых Nct было обнаружено во фракции, связанной с доменом ANTH, тогда как зрелые Nct были единственным видом, который располагался на поверхности клетки. Принимая во внимание предыдущий отчет о том, что Nct, слитый на С-конце с сигналом удержания ER, все еще был способен образовывать активную γ-секретазу и созревал 39 , стерические затруднения С-конца Nct должны возникать при сборке комплекса. Это повышает вероятность того, что пока еще неизвестные сигнальные или посттрансляционные модификации вызывают структурные изменения в цитоплазматическом домене Nct и делают возможным связывание с CALM, что приводит к усилению эндоцитоза. Мы также показали, что степень снижения общей секреции Aβ из эндогенного, стабильно экспрессируемого и транзиторно экспрессируемого АРР была различной (рис. 6f). Общая продукция Aβ коррелирует с β-расщеплением, которое требует эндоцитоза APP 9. 0155 40 . Таким образом, сверхэкспрессированный APP может перетекать в покрытые клатрином ямки, регулируемые CALM. Это может быть причиной того, что в экспериментах по нокдауну Xiao et al наблюдалось значительное снижение секреции Aβ. 19 , а также временную экспрессию APP (рис. 6f). Однако соотношение Aβ42 было изменено в мозге гетерозиготных мышей с нокаутом, в то время как общий уровень Aβ не изменился, что позволяет предположить, что изменение активности γ-секретазы более чувствительно, чем изменение АРР. Что касается физиологического значения этого CALM-зависимого эндоцитоза γ-секретазы, было показано, что процессинг Notch S3 γ-секретазой на клеточной поверхности производит стабильный NICD, начиная с остатка Val, тогда как его эндосомальный процессинг производит более короткий, нестабильный NICD, приводящий к ослабленная сигнализация 41 . Это подразумевает, что величина передачи сигналов Notch контролируется не только транспортом самого Notch, но также и транспортом γ-secretase. Регулируется ли активность γ-secretase с помощью мембранного транспорта в ответ на специфические сигнальные пути, будет важной областью для дальнейших исследований.
Также интригующим является обнаружение того факта, что потеря CALM изменяет протеолитическую активность γ-секретазы, снижая коэффициент продукции Aβ42, постоянно наблюдаемый как in vitro и in vivo . На сегодняшний день в ходе полногеномных ассоциативных исследований и полногеномного секвенирования сообщалось о нескольких защитных мутациях/вариантах против AD. Среди этих вариантов редкий вариант, вызывающий замену A673T в гене APP , снижает продукцию Aβ, влияя на β-расщепление 42 , и минорный аллель (A) rs3865444 в гене CD33 регулирует фагоцитоз Aβ микроглией 43, 44 . Учитывая тот факт, что почти все мутации, связанные с FAD, увеличивают продукцию/агрегацию Aβ in vitro , а также in vivo , модуляция уровней Aβ в головном мозге имеет решающее значение для молекулярной этиологии AD. Однако ни о каком генетическом варианте, изменяющем активность γ-secretase, не сообщалось, хотя модулятор γ-secretase рассматривался как многообещающее лечение 1 . Наш настоящий результат предполагает, что минорный аллель (A) rs10792832 около гена PICALM будет влиять на экспрессию CALM таким образом, чтобы уменьшить коэффициент продукции Aβ42, тем самым приводя к защитному эффекту против AD 9.0155 12 . Важно отметить, что сниженное соотношение Aβ42/общее количество Aβ было воспроизведено при обработке YM201636, который блокирует созревание эндосом и перераспределяет γ-секретазу в более ранний эндоцитарный компартмент. Эти результаты позволяют предположить, что изменение стационарной локализации γ-секретазы, которое определяется балансом между эндолизосомным переносом и рециклированием на клеточную поверхность, коррелирует со сниженным соотношением Aβ42/общее количество Aβ. Примечательно, что в клетках, обработанных YM201636, мы не наблюдали изменения общего уровня секреции Aβ, в то время как инкубация мембранных фракций, полученных из клеток, обработанных YM201636, увеличивала продукцию Aβ. Заманчиво предположить, что эндолизосомное созревание необходимо не только для продукции, но и для секреции Aβ. Тем не менее, истощение CALM, по-видимому, смещает баланс в сторону рециркуляции, так что γ-secretase накапливается в более раннем эндоцитарном компартменте, где она предпочтительно расщепляет APP CTF в положении Aβ40. Почему это изменение в локализации имеет значение? Биохимически было показано, что субклеточная локализация влияет на протеолитическую активность γ-секретазы, и это может быть связано с разницей в липидном составе мембраны или pH 9.0155 41,45,46 . Как показано в этом исследовании, низкий pH вызвал значительное увеличение соотношения Aβ42/общего Aβ в анализе in vitro , что указывает на то, что изменение pH наряду с созреванием эндосом влияет на активность γ-секретазы для коэффициента продукции Aβ42. Наши результаты также повышают вероятность того, что ингибирование функции CALM, а также эндосомального созревания γ-секретазы считается многообещающей терапевтической мишенью AD.
В то время как полная системная потеря CALM у мышей приводит к неонатальной смерти, возможно, из-за нарушения усвоения железа и другого важного эндоцитоза, у гетерозиготных мышей не было выявлено явных аномалий 20 . Сниженное соотношение Aβ42/общее количество Aβ в головном мозге гетерозиготных мышей предполагает, что частичного ингибирования функции CALM может быть достаточно для предотвращения развития AD с минимальными побочными эффектами. В связи с этим следует отметить, что Ca 2+ -зависимый экзоцитоз синаптических пузырьков, как было показано, модулирует конформацию PS1 и коэффициент продукции Aβ42 47 . Поскольку CALM необходим для эндоцитарного пути синаптических везикул 48 , CALM может быть критическим регулятором соотношения продукции Aβ42, зависящего от активности нейронов. Примечательно, что величина снижения отношения Aβ42 при нокдауне CALM различалась для разных конструкций APP (сравните рис. 2b, e и 3c). Одна из возможностей заключается в том, что субклеточное расположение β-расщепления АРР, которое должно предшествовать γ-расщеплению, коррелирует с этой разницей в снижении отношения Aβ42. Фактически, недавние исследования показывают, что β-расщепление АРР динамически регулируется переносом через мембрану 49,50,51 а также активность нейронов 40,52 .
SNP, обнаруженные у пациентов с поздним началом AD, связаны с заболеванием с пониженным риском, поэтому было бы интересно посмотреть, снижается ли уровень экспрессии или функция CALM в мозге пациентов, несущих эти SNP. Нокдаун CALM замедлял, но не отменял эндоцитоз γ-секретазы, предполагая, что другие факторы или молекулярные системы, включая AP180, будут дополнять перенос γ-секретазы при истощении функции CALM внутри клеток. Таким образом, мы идентифицировали CALM как регулятор эндоцитоза γ-секретазы и коэффициента продукции Aβ42. Это исследование является важным шагом вперед в понимании клеточной биологии γ-секретазы, а также в определении новой мишени для антиамилоидного лечения БА.
Методы
Молекулярная биология
CALM человека (длинная (CALM-L) и короткая (CALM-S) изоформы, регистрационный номер нуклеотида NCBI BC048259 и BC064357 соответственно) и ORF человека BACE1 (BC065492) амплифицировали из клонов IMAGE ( Open Biosystems) с использованием KOD плюс нео ДНК-полимераза (TOYOBO). Экспрессионные конструкции, кодирующие полноразмерный APP 695 человека дикого типа и C99, были описаны ранее 27 . Конструкции экспрессии млекопитающих получали с использованием вектора pEF6-V5 His TOPO TA или pcDNA3.1-hygro (Invitrogen). Бактериальные экспрессионные конструкции для рекомбинантных слитых белков GST получали с использованием вектора pFAT2, кодирующего Hisx6-Gultathion S-трансферазу (GST). Следующие малые интерферирующие РНК ON-TARGETplus SMARTpool (Thermo Scientific) использовали против человеческого Nct (#L-008043-00), человеческого APP (#L-003731-00), мышиного APP (#L-043246-00), человеческого СПОКОЙСТВИЕ (#L-004004-00), мышь СПОКОЙСТВИЕ (#L-041440-01). Люцифераза GL2 (#D-001100-20) и нецелевой пул (#D-001810-10) использовали в качестве контрольных siРНК. SiРНК, нацеленные на VAMP8 человека (SI 02652993 и SI04437804) были приобретены у Qiagen.
Антитела и химические вещества
Следующие антитела были приобретены у коммерческих поставщиков: анти-CALM (sc-6433, Santa Cruz, разведение 1:1000 для вестерн-блоттинга, разведение 1:400 для иммуноцитохимического анализа), анти-APPc (# 18961, Immuno-Biological Laboratories, 1:1000), антитело 82E1, специфичное к Aβ человека (#10323, Immuno-Biological Laboratories, разведение 1:1000), анти-α-тубулин DM1A (T6199, Sigma, разведение 1:2000) , N-конец анти-Nct (sc-14369, Н-19; Santa Cruz, разведение 1:1000), антитело к С-концу Nct (N1660, Sigma, разведение 1:1000), антитело к LAMP1 (#328611, меченое антитело Alexa-647, Bio Legend, разведение 1:500), антитело к EEA1 (#2411S, Cell Signaling Technology, разведение 1:200), анти-AP-2µ1 (#2386-1, Epitomics, разведение 1:1000), анти-VAMP8 (ab76021, Abcam, разведение 1:5000). Кроличье поликлональное анти-PS1 CTF-антитело G1L3 и мышиное моноклональное анти-Nct A5226A были описаны ранее 31,53 . Pitstop 2 и YM201636 были приобретены у компаний Abcam и Cayman Chemicals соответственно.
Культура клеток и РНК-интерференция
HeLa S3 (#CCL-2.2, ATCC), Neuro2a (N2a) (#CCL-131, ATCC), HT1080 (предоставлено доктором Масатоши Маки (Университет Нагоя)), HEK293 (# CCL-1573, ATCC), embryonic fibroblast cells obtained from Ncstn −/− , Psen1 −/− ;Psen2 −/− and Aph2a −/− ;Aph2b −/− мышей ( Ncstn KO, Psen1/2 DKO и Aph2a/b DKO MEF соответственно) 54,55,56 культивировали в среде DMEM с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. Клетки N2a, стабильно экспрессирующие APP 695 дикого типа человека, отбирали с использованием 50 мкг мл -1 бластицидина S (Calbiochem). Клеточные линии Flp-In T-REx-293, стабильно экспрессирующие Tet-индуцируемый человеческий APP 695 дикого типа, отбирали с использованием 200 мкг мл -1 гигромицина в соответствии с протоколом производителя (Invitrogen). 9Клетки 0163 Ncstn KO MEF, стабильно экспрессирующие V5/His-меченый Nct, отбирали с использованием 10 мкг мл -1 бластицидина (Calbiochem) 57 . siРНК трансфицировали в 20~30% конфлюэнтных клеток с использованием LipofectAMINE RNAiMAX (Invitrogen) в концентрации 20 нМ, а клетки и культуральную среду анализировали через 48–72 ч после трансфекции. В экспериментах, в которых была необходима комбинация доставки siRNA и плазмиды, плазмиды трансфицировали TransIT-2020 (Mirus) или Fugene 6 (Roche Applied Science) через 24 часа после доставки siRNA.
Для иммуноцитохимического анализа клетки, культивированные на покровных стеклах, фиксировали в течение 15 минут в 4% параформальдегиде, а затем пермеабилизировали 0,2% Тх-100 в течение 10 минут. Все растворы были приготовлены в PBS. Затем покровные стекла инкубировали с первичными антителами, как указано, в течение 1 часа. После промывания PBS покровные стекла инкубировали со вторичными антителами в течение 1 ч, промывали PBS, помещали на предметное стекло с использованием PermaFluor Aqueous Mounting Medium (Thermo Scientific), смешанного с 1 мкг мл -1 DAPI для окрашивания ядер. Изображения были получены либо с помощью флуоресцентного микроскопа (AxioObserver Z1, Zeiss) с масляным иммерсионным объективом Plan Apochromat × 40 с числовой апертурой 1.3, программным обеспечением AxioVision, либо с помощью конфокального микроскопа (SP5, Leica) с масляным иммерсионным объективом × 63 PL APO CS с числовой апертурой 1.3. 1.4, программное обеспечение Leica LAS AF. Изображения были обрезаны и обработаны с использованием программного обеспечения ImageJ (NIH). Для обнаружения совместной локализации CALM и Nct субконфлюэнтные клетки обрабатывали 30 мкМ Pitstop 2 в среде DMEM без FBS в течение 3 ч перед фиксацией.
Для вестерн-блоттинга клетки лизировали буфером для образцов Laemlli и обрабатывали ультразвуком. Концентрацию белка измеряли с использованием анализа белка BCA (Pierce). Для обнаружения APP CTF клеточные лизаты (40 мг белка) дефосфорилировали рекомбинантной протеинфосфатазой Lambda (400 единиц; New England Biolabs) в течение 4 часов при 30 °C (ссылка 58). Секретируемый Aβ человека отделяли в геле Urea-SDS PAGE 59 и определяли вестерн-блоттингом с использованием специфичного антитела 82E1 к Aβ человека.
Извлечение мозга
Все эксперименты с использованием животных в этом исследовании проводились в соответствии с рекомендациями, предоставленными Институциональным комитетом по уходу за животными Высшей школы фармацевтических наук Токийского университета. Все животные (5-месячные мыши, самки) содержались на пище и воде с 12-часовым циклом свет/темнота. Мозг, вырезанный у 5-месячных мышей Picalm +/- или мышей дикого типа, гомогенизировали в буфере RIPA (Thermo Scientific), содержащем полный коктейль ингибиторов протеазы (Roche Applied Science). Гомогенаты очищали центрифугированием при 200000× г в течение 20 мин при 4°С, и полученный супернатант собирали в виде экстракта мозга RIPA. Экстракт RIPA использовали для количественного определения Aβ с помощью ELISA (набор ELISA для бета-амилоида человека/крысы (40) (№ 294-62501, WAKO Pure Chemical Industries) и набора ELISA для человека/крысы (42) для β-амилоида (42), высокая чувствительность ( № 292-64501, WAKO Pure Chemical Industries), а также анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Для анализа in vitro BACE1 экстракт RIPA подкисляли 25 мМ CH 3 COONa, pH 4,5, и инкубировали с β- секретазо-специфический рекомбинантный пептидный субстрат JMV2236 (Bachem) при 37 °C в указанные моменты времени.Флуоресценцию фракций измеряли при 320 и 420/430 нм в качестве длины волны возбуждения и испускания соответственно0155 60 .
Анализы поглощения лиганда
Субконфлюэнтные клетки HeLa или HT1080 инкубировали в среде, содержащей 50 мкг мл -1 трансферрина Alexa-647 и 10 мкг мл -1 анти-Nct MAb при 7,7°С мин для A5226. После промывки средой добавляли свежую подогретую среду и далее инкубировали в течение различного времени при 37 °C. Затем клетки немедленно промывали PBS, фиксировали в PFA и обрабатывали для иммуноцитохимического анализа.
Анализ эндоцитоза на основе биотинилирования клеточной поверхности
Анализ эндоцитоза на основе биотинилирования клеточной поверхности проводили в соответствии с методом, установленным Bretscher и Lutter 61 с некоторыми изменениями. Вкратце, почти конфлюэнтные клетки промывали ледяным PBS, а затем инкубировали на льду с непроницаемым для мембран расщепляемым производным биотина Sulfo-NHS-SS-Biotin (Thermo Scientific, 1 мг мл –1 в PBS) для 30 мин для маркировки поверхностных белков. Избыток биотинового реагента гасили трехкратной промывкой клеток 0,1 М глицином в PBS. Клетки промывали ледяным PBS и повторно кормили предварительно подогретым и CO 2 уравновешенная питательная среда, включающая 20 мкМ GM6001 (Calbiochem) (за исключением образца «t0»). Затем клетки инкубировали в течение разного времени при 37 °C для интернализации. В каждый момент времени клетки переносили на лед для прекращения интернализации, дважды промывали охлажденным льдом PBS, а затем очищали от оставшегося поверхностного биотина путем трехкратной промывки в течение 20 минут на льду в буфере для удаления биотина (50 мМ Трис, pH 8,6, 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА и 0,2% очищенного БСА, 100 мМ 2-меркаптоэтансульфоната натрия (MeSNa)). После гашения MeSNa путем инкубации в течение 10 мин на льду в PBS, содержащем 120 мМ йодоуксусной кислоты, с последующим двукратным промыванием охлажденным льдом PBS клетки лизировали в PBS, содержащем 1% SDS. Затем лизаты обрабатывали ультразвуком, а биотинилированные белки улавливали стрептавидин-сефарозой (GE Healthcare) в течение 12 часов на роторном смесителе, элюировали буфером для образцов SDS при кипячении в течение 1 минуты и анализировали вестерн-блоттингом.
Экспрессия и очистка белков
Домен CALM ANTH (1–289) и белок ΔN (151–652) были экспрессированы в виде гибридных белков His-GST в Escherichia coli BL21(DE3) (WAKO). Клетки выращивали до среднего логарифма, индуцировали 0,2 мМ IPTG в течение 2,5 часов при 37 °C. Бактериальные лизаты были приготовлены из гранул путем обработки ультразвуком в буфере для лизиса E coli (20 мМ Трис-HCl pH 8,0, 300 мМ NaCl, 20 мМ имидазола, 0,1% Triton X-100), очищены центрифугированием и слиянием His-GST. белки очищали на Ni-NTA агарозе (Qiagen) в 20 мМ трис-HCl, pH 8,0, 300 мМ NaCl, 20 мМ имидазола и элюировали тем же буфером, но теперь содержащим 200 мМ имидазола. Белки подвергали диализу против трис-буферного солевого раствора (50 мМ Трис-HCl, pH 8,0, 150 мМ NaCl), а затем аликвоты замораживали в жидком азоте для хранения при -80°С. HeLa, N2a и 9Лизаты клеток 0163 Ncstn KO MEF готовили с использованием буфера для лизиса клеток млекопитающих (20 мМ Tris-HCl, pH 7,6, 150 мМ NaCl, 0,5% Triton X-100), содержащего полный коктейль ингибиторов протеазы, и предварительно очищали путем инкубации с глутатион-сефарозой (GE Здравоохранение) в течение 1 ч. В экспериментах по вытягиванию 1 мг очищенного тотального клеточного лизата и 200 мкг белков GST-CALM смешивали в лизирующем буфере. После добавления 50 мкл гранул глутатион сефарозы смесь инкубировали в течение 90 мин при 4°С на ротаторе. Гранулы глутатион-сефарозы трижды промывали лизисным буфером. После промывки к гранулам добавляли 100 мкл 2 × буфера для образцов для элюирования и кипятили в течение 1 мин. Связанные белки анализировали с помощью SDS-PAGE и вестерн-блоттинга. Только GST служил в качестве отрицательного контроля.
In vitro Анализы γ-секретазыДля уровней секретируемого Aβ, кондиционированные среды из клеток N2a, клетки HEK293, стабильно экспрессирующие человеческий APP дикого типа 695 , или клетки HeLa, совместно экспрессирующие человеческий APP дикого типа 695 и BACE1 анализировали с помощью двухсайтового иммуноферментного анализа (ELISA) 62 . Для бесклеточного анализа γ-секретазы мембраны клеток HEK293, стабильно экспрессирующих APP, собирали и анализировали, как описано ранее 63 . Всего 2,5 мг мл -1 микросом в гомогенизирующем буфере (20 мМ HEPES pH 7,0, 140 мМ KCl, 250 мМ сахарозы, 5 мМ EGTA), содержащем 0,5 мМ DIFP, 0,5 мМ PMSF, 1 мкг мл -1 TL, 9015 1 антипаин, 1 мкг мл –1 лейпептин, 10 мкг мл –1 фосфорамидон, 1 мМ ЭГТА, 5 мМ ЭДТА, 5 мМ . Микросомы инкубировали при 37°С в течение 6 ч, а затем центрифугировали при 15000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант анализировали с помощью ELISA. В экспериментах, в которых анализы бесклеточной γ-секретазы проводились при различных условиях pH, лимонная кислота-Na 2 HPO 4 вместо буфера HEPES использовали буфер. Для анализа in vitro γ-секретазы мембраны клеток HeLa, солюбилизированные 1% CHAPSO, инкубировали с рекомбинантным субстратом на основе APP C100-Flag/Myc/His, очищенным из Escherichia coli в условиях 0,25% CHAPSO 6,64 и затем проанализированы с помощью ELISA.
Статистический анализ
Данные представлены в виде средних значений, а планки погрешностей указывают на стандартную ошибку. Группы лечения сравнивали по двусторонней шкале Стьюдента 9.0163 т -тест. Значимость была установлена как * P <0,05 и ** P <0,005.
Дополнительная информация
Как цитировать эту статью: Kanatsu, K. et al. Снижение экспрессии CALM снижает отношение Aβ42 к общему количеству Aβ посредством клатрин-опосредованного эндоцитоза γ-секретазы. Нац. коммун. 5:3386 doi: 10.1038/ncomms4386 (2014).
Ссылки
Holtzman, D.M., Morris, J.C. & Goate, A.M. Болезнь Альцгеймера: вызов второго века. Науч. Перевод Мед. 3 , 77ср71 (2011).
Google ученый
Томита, Т. Ингибиторы и модуляторы секретазы для лечения болезни Альцгеймера. Эксперт преподобный Нейротер. 9 , 661–679 (2009).
КАС пабмед Google ученый
Томита Т. и Ивацубо Т. Структурная биология пресенилинов и сигнальных пептидаз. Дж. Биол. хим. 288 , 14673–14680 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Ивацубо, Т. и др. Визуализация A beta 42(43) и A beta 40 в сенильных бляшках с моноклональными A beta, специфичными к концам: доказательство того, что первоначально депонированным видом является A beta 42(43). Нейрон 13 , 45–53 (1994).
КАС пабмед Google ученый
Li, Y.M. et al. Фотоактивируемые ингибиторы гамма-секретазы, направленные на активный центр, ковалентно метят пресенилин 1. Nature 405 , 689–694 (2000).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый
Такасуги, Н. и др. Роль пресенилиновых кофакторов в гамма-секретазном комплексе. Природа 422 , 438–441 (2003).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый
Де Струпер, Б. и Аннаерт, В. Новые горизонты исследований пресенилинов и гамма-секретаз в клеточной биологии и заболеваниях. Энн. Преподобный Cell Dev. биол. 26 , 235–260 (2010).
КАС Google ученый
Morohashi, Y. & Tomita, T. Транспортировка и созревание белков регулируют внутримембранный протеолиз. Биохим. Биофиз. Acta 1828 , 2855–2861 2013.
Пастернак С.Х. и др. Пресенилин-1, никастрин, белок-предшественник амилоида и активность гамма-секретазы совместно локализованы в лизосомальной мембране. Дж. Биол. хим. 278 , 26687–26694 (2003 г.).
КАС пабмед Google ученый
Vaccari, T., Lu, H., Kanwar, R., Fortini, M.E. & Bilder, D. Вход в эндосомы регулирует активацию рецептора Notch у Drosophila melanogaster. J. Cell Biol. 180 , 755–762 (2008).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Гарольд Д. и др. Полногеномное ассоциативное исследование выявляет варианты CLU и PICALM, связанные с болезнью Альцгеймера. Нац. Жене. 41 , 1088–1093 (2009).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Lambert, J.C. et al. Метаанализ 74 046 человек выявил 11 новых локусов предрасположенности к болезни Альцгеймера. Нац. Жене. 45 , 1452–1458 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Dreyling, M.H. et al. t(10;11)(p13;q14) в клеточной линии U937 приводит к слиянию гена AF10 и CALM, кодирующего нового члена семейства белков сборки клатрина AP-3. Проц. Натл акад. Sci.USA 93 , 4804–4809 (1996).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Тебар, Ф. , Боландер, С. К. и Соркин, А. Белок лимфоидной миелоидной лейкемии (CALM) сборки клатрина: локализация в ямках, покрытых эндоцитами, взаимодействие с клатрином и влияние сверхэкспрессии на клатрин-опосредованный трафик. Мол. биол. Сотовый 10 , 2687–2702 (1999).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Meyerholz, A. et al. Влияние истощения белка лимфоидного миелоидного лейкоза сборки клатрина на образование клатриновой оболочки. Traffic 6 , 1225–1234 (2005 г.).
КАС пабмед Google ученый
Миллер, С. Э. и др. Молекулярная основа эндоцитоза малых R-SNARE с помощью клатринового адаптера CALM. Cell 147 , 1118–1131 (2011).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Джун Г. и др. Мета-анализ подтверждает, что CR1, CLU и PICALM являются локусами риска болезни Альцгеймера и выявляет взаимодействие с генотипами АРОЕ. Арх. Нейрол. 67 , 1473–1484 (2010).
ПабМед ПабМед Центральный Google ученый
Treusch, S. et al. Функциональные связи между токсичностью Abeta, переносом эндоцитов и факторами риска болезни Альцгеймера у дрожжей. Наука 334 , 1241–1245 (2011).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Xiao, Q. et al. Роль сборки фосфатидилинозитол-клатрина лимфоидно-миелоидного лейкоза (PICALM) в процессинге внутриклеточного белка-предшественника амилоида (APP) и патогенезе амилоидных бляшек. Дж. Биол. хим. 287 , 21279–21289 (2012).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Suzuki, M. et al. Белок сборки клатрина PICALM необходим для созревания эритроидов и интернализации трансферрина у мышей. PLoS One 7 , e31854 (2012 г.).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Дафф, К. и др. Повышенный амилоид-бета42(43) в мозгу мышей, экспрессирующих мутантный пресенилин 1. Nature 383 , 710–713 (1996).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый
Накано Ю. и др. Накопление мышиного амилоида бета42 в зависимости от дозы гена у мышей с «нокаутом» PS1. евро. Дж. Нейроски. 11 , 2577–2581 (1999).
КАС пабмед Google ученый
Сайто, Т. и др. Сильная амилоидогенность и патогенность Abeta43. Нац. Неврологи. 14 , 1023–1032 (2011).
КАС пабмед Google ученый
Ю. Х. и др. Процессинг АРР и синаптическую пластичность у мышей с условным нокаутом по пресенилину-1. Нейрон 31 , 713–726 (2001).
КАС пабмед Google ученый
Cai, H. et al. BACE1 является основной бета-секретазой для генерации пептидов Abeta нейронами. Нац. Неврологи. 4 , 233–234 (2001).
КАС пабмед Google ученый
Roberds, S.L. et al. Мыши с нокаутом BACE здоровы, несмотря на отсутствие первичной активности бета-секретазы в головном мозге: последствия для терапии болезни Альцгеймера. Гул. Мол. Жене. 10 , 1317–1324 (2001).
КАС пабмед Google ученый
Iwata, H., Tomita, T., Maruyama, K. & Iwatsubo, T. Субклеточный компартмент и молекулярный субдомен белка-предшественника бета-амилоида, имеющие отношение к Abeta 42-стимулирующим эффектам мутантного пресенилина 2 болезни Альцгеймера. J биол. хим. 276 , 21678–21685 (2001).
КАС пабмед Google ученый
Chyung, J. H., Raper, D. M. & Selkoe, D. J. Гамма-секретаза существует на плазматической мембране в виде интактного комплекса, который принимает субстраты и вызывает внутримембранное расщепление. Дж. Биол. хим. 280 , 4383–4392 (2005).
КАС пабмед Google ученый
Kaether, C., Schmitt, S., Willem, M. & Haass, C. Белок-предшественник амилоида и внутриклеточные домены Notch образуются после переноса их предшественников на клеточную поверхность. Traffic 7 , 408–415 (2006).
КАС пабмед Google ученый
Burgos, P.V. et al. Сортировка белка-предшественника амилоида болезни Альцгеймера, опосредованная комплексом АР-4. Дев. Cell 18 , 425–436 (2010).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Хаяши И. и др. Нейтрализация активности гамма-секретазы моноклональными антителами против внеклеточного домена никастрина. Онкоген 31 , 787–798 (2012).
КАС пабмед Google ученый
фон Кляйст, Л. и др. Роль терминального домена клатрина в регуляции динамики покрытых ямок выявляется с помощью ингибирования малых молекул. Cell 146 , 471–484 (2011).
КАС пабмед Google ученый
Carter, L.L., Redelmeier, T.E., Woollenweber, L.A. & Schmid, S.L. Множественные GTP-связывающие белки участвуют в эндоцитозе, опосредованном покрытыми клатрином везикулами. J. Cell Biol. 120 , 37–45 (1993).
КАС пабмед Google ученый
Tian, Y., Chang, J.C., Fan, E.Y., Flajolet, M. & Greengard, P. Адаптерный комплекс AP2/PICALM посредством взаимодействия с LC3 нацелен на APP-CTF болезни Альцгеймера для терминальной деградации посредством аутофагии. Проц. Натл акад. науч. США 110 , 17071–17076 (2013 г.).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Хуанг Ф., Хворова А., Маршалл В. и Соркин А. Анализ клатрин-опосредованного эндоцитоза рецептора эпидермального фактора роста с помощью РНК-интерференции. Дж. Биол. хим. 279 , 16657–16661 (2004).
КАС пабмед Google ученый
Harel, A., Mattson, M.P. & Yao, P.J. CALM, белок сборки клатрина, влияет на содержание GluR2 на клеточной поверхности. Нейромол. Мед. 13 , 88–90 (2011).
КАС Google ученый
Harel, A., Wu, F., Mattson, M.P., Morris, C.M. & Yao, P.J. Доказательства CALM в управлении торговлей VAMP2. Traffic 9 , 417–429 (2008).
КАС пабмед Google ученый
Jefferies, H.B. et al. Селективный ингибитор PIKfyve блокирует продукцию PtdIns(3,5)P(2) и нарушает эндомембранный транспорт и почкование ретровирусов. EMBO Rep. 9 , 164–170 (2008).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Capell, A. et al. Сборка комплекса гамма-секретазы на раннем секреторном пути. Дж. Биол. хим. 280 , 6471–6478 (2005).
КАС пабмед Google ученый
Дас, У. и др. Индуцированная активностью конвергенция APP и BACE-1 в кислых микродоменах через эндоцитоз-зависимый путь. Нейрон 79 , 447–460 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Тагами, С. и др. Регуляция передачи сигналов Notch посредством динамических изменений точности расщепления S3 Notch-1. Мол. Клетка. биол. 28 , 165–176 (2008).
КАС пабмед Google ученый
Jonsson, T. et al. Мутация в APP защищает от болезни Альцгеймера и возрастного снижения когнитивных функций. Природа 488 , 96–99 (2012).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Google ученый
Bradshaw, E.M. et al. CD33 Локус болезни Альцгеймера: измененная функция моноцитов и биология амилоида. Нац. Неврологи. 16 , 848–850 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Гричук А. и др. Ген риска болезни Альцгеймера CD33 ингибирует микроглиальное поглощение бета-амилоида. Нейрон 78 , 631–643 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Фукумори, А. и др. Пресенилин-зависимая гамма-секретаза на плазматической мембране и эндосомах функционально различна. Биохимия 45 , 4907–4914 (2006).
КАС пабмед Google ученый
Холмс О., Патури С., Е. В., Вулф М. С. и Селко Д. Дж. Влияние мембранных липидов на активность и процессивность очищенной гамма-секретазы. Биохимия 51 , 3565–3575 (2012).
КАС пабмед Google ученый
Долев И. и др. Всплески спайков увеличивают соотношение амилоид-бета 40/42, индуцируя конформационные изменения пресенилина-1. Нац. Неврологи. 16 , 587–595 (2013).
КАС пабмед Google ученый
Марицен, Т., Ку, С. Дж. и Хауке, В. Превращение СПОКОЙСТВИЯ в возбуждение: АР180 и СПОКОЙСТВИЕ при эндоцитозе и заболеваниях. биол. Cell 104 , 588–602 (2012).
КАС пабмед Google ученый
Buggia-Prevot, V. et al. Функция белков семейства EHD в однонаправленном ретроградном дендритном транспорте BACE1 и продукции абета при болезни Альцгеймера. Cell Rep. 5 , 1552–1563 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Удаяр, В. и др. Парный скрининг сверхэкспрессии РНКи и RabGAP идентифицирует Rab11 как регулятор продукции бета-амилоида. Cell Rep. 5 , 1536–1551 (2013).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Yamakawa, H., Yagishita, S., Futai, E. & Ishiura, S. Эффективность ингибитора бета-секретазы снижается из-за аберрантного бета-расщепления белка-предшественника «шведского мутанта». Дж. Биол. хим. 285 , 1634–1642 (2010).
КАС пабмед Google ученый
Каменец Ф. и др. Обработка APP и синаптическая функция. Нейрон 37 , 925–937 (2003).
КАС пабмед Google ученый
Томита, Т. и др. С-конец пресенилина необходим для сверхпродукции амилоидогенного Abeta42 посредством стабилизации и эндопротеолиза пресенилина. Дж. Неврологи. 19 , 10627–10634 (1999).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Li, T. , Ma, G., Cai, H., Price, D.L. & Wong, P.C. белок-предшественник амилоида у млекопитающих. J. Neurosci. 23 , 3272–3277 (2003).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Чианг, П. М., Фортна, Р. Р., Прайс, Д. Л., Ли, Т. и Вонг, П. С. Специфические домены в передней части глотки с дефектом 1 определяют его внутримембранные взаимодействия с никастрином и пресенилином. Нейробиол. Старение 33 , 277–285 (2012).
КАС пабмед Google ученый
Herreman, A. et al. Полная инактивация активности гамма-секретазы в пресенилин-дефицитных эмбриональных стволовых клетках. Нац. Клеточная биол. 2 , 461–462 (2000).
КАС пабмед Google ученый
Хаяши И. и др. Одноцепочечный вариабельный фрагмент против никастрина ингибирует активность гамма-секретазы. Дж. Биол. хим. 284 , 27838–27847 (2009).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Андо, К. и др. Роль фосфорилирования белка-предшественника амилоида болезни Альцгеймера во время дифференцировки нейронов. Дж. Неврологи. 19 , 4421–4427 (1999).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Qi-Takahara, Y. et al. Более длинные формы бета-амилоидного белка: последствия для механизма внутримембранного расщепления гамма-секретазой. J. Neurosci. 25 , 436–445 (2005).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Такасуги, Н. и др. Активность BACE1 модулируется ассоциированным с клеткой сфингозин-1-фосфатом. J. Neurosci. 31 , 6850–6857 (2011).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Bretscher, M.S. & Lutter, R. Новый метод обнаружения эндоцитированных белков. EMBO J. 7 , 4087–4092 (1988).
КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Томита, Т. и др. Мутация пресенилина 2 (N141I), связанная с семейной болезнью Альцгеймера (семьи поволжских немцев), увеличивает секрецию бета-амилоидного белка, оканчивающегося на 42-м (или 43-м) остатке. Проц. Натл акад. науч. США 94 , 2025–2030 (1997).
ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый
Какуда, Н. и др. Эквимолярная продукция внутриклеточного домена бета-амилоидного белка и белка-предшественника амилоида из бета-карбоксиконцевого фрагмента с помощью гамма-секретазы. Дж. Биол. хим. 281 , 14776–14786 (2006 г.).
КАС пабмед Google ученый
Takahashi, Y. et al. Сулиндак сульфид является неконкурентным ингибитором гамма-секретазы, который предпочтительно снижает образование Abeta 42. Дж. Биол. хим. 278 , 18664–18670 (2003 г.).
КАС пабмед Google ученый
Скачать ссылки
Артикул № 260 STD, Конвейерные цепи для ящиков на Allied-Locke Industries
Характеристики | Обслуживаемые приложения
Технические характеристики
Шаг (P) | Н/Д 10. 24 |
Ср. Абсолютная сила | Н/Д 68 180 кг150 000 фунтов |
Рабочая нагрузка | Н/Д 27 270 фунтов |
Ср. Вес | Н/Д 6,40 кг14,0 фунта |
Чертеж | Н/Д
Чертеж конвейера ящиков |
Размер (А) | Н/Д 2,95 дюймов75,0 мм |
Размер (В) | Н/Д 2,76 дюйма70 мм |
Размер (С) | Н/Д 1,18 дюйма30 мм |
Размер (D) | Н/Д 0,790 дюйма |
Размер (E) | Н/Д 1,260 дюйма32 мм |
Обслуженные приложения
Н/Д конвейеры переработка молочных продуктов скребковые конвейеры пищевая промышленность перевалка зерна конвейеры повышенной грузоподъемности муниципалитеты перерабатывающие предприятия перерабатывающие заводы коммунальные услуги |
Затишье перед бурей – iRunFar
Рассуждение о «затишье перед бурей», о том периоде затишья, который наступает перед «бурей» целевого забега.
Энди Джонс-Уилкинс, 13 июня 2014 г. | 1 Комментарий
Поддержите нас! iRunFar может получать небольшую комиссию за партнерские ссылки в этой статье. Учить больше.
Неделя между 23 и 16 днями из Western States всегда немного сложна для меня. Хотя, безусловно, пора начинать сокращать километры и запасаться энергией, я всегда чувствовал, что сейчас самое подходящее время для последних приготовлений в плане физической подготовки и выполнения, которые могут иметь значение между успехом и поражением в день гонки.
Таким образом, большую часть прошлой недели я потратил на калибровку своих тренировок, чтобы решить проблемы, которые не дают покоя моему разуму и телу. Во многих отношениях график тренировок на этой неделе отразил потребность моего разума в уверенности и тем самым дал последний заряд уверенности:
Суббота, 7 июня – 28 миль. Национальный парк Шенандоа с Марк Гриффин .
Предпоследняя длинная серия этого цикла. Цель сегодняшней пробежки была проста: подняться вверх, пробежаться по ровной поверхности, забить на спуске. Я выбрал курс с учетом переходов через каньоны, чтобы напомнить своему телу, как важно быстро и плавно переходить от спуска к подъему и наоборот в Western States. В целом, я был доволен результатом этого пробега и выздоровел с очень небольшим беспокойством.
Воскресенье, 8 июня – 12 миль. Я знал, что эта пробежка будет отстойной с первых нескольких шагов с парковки. Ко мне присоединились Джон Андерсен и Джейсон Фарр , и идея этого пробега заключалась в том, чтобы дождаться начала, пока не наступит жара, а затем попытаться пробежать в темповом темпе по холмистым грунтовым дорогам Альбемарля. Граф в темпе примерно на минуту или около того быстрее, чем мой обычный дневной темп на 100 миль. К сожалению, у богов погоды были другие планы на этот день, так как влажность оказалась угнетающей. 12-мильный темп превратился в 12-мильный слог смерти, оставив меня истощенным и голодным. Другими словами, это была отличная тренировка на 100 миль!
Понедельник, 9 июня – 3 мили. Одна из вещей, которую я добавил к своим тренировкам за последние три года, — это «Темповая прогулка» по понедельникам в течение последних трех недель. Эти прогулки обычно длятся около 40 минут, запланированы на самое жаркое время дня и завершаются в полном костюме грабителя банка. Если вы не уверены, что это такое, представьте себе, что вы надеваете черные колготки, облегающую шерстяную рубашку с длинным бельем, хлопковую толстовку с капюшоном, перчатки и шапку и выходите на 40-минутную прогулку в 9 часов.5-градусная жара. Это было сегодняшнее упражнение. И, хотите верьте, хотите нет, но на самом деле это было лучше, чем вчера!
Вторник, 10 июня – 7 миль. Я проснулся рано и вернулся к обычному июньскому распорядку. План состоял в том, чтобы пробежать спокойную дорогу в 7 милях от дома с целью удержать частоту сердечных сокращений ниже 65% и пробежать мили менее 8 минут. Это был один из тех забегов, который заставил меня по-настоящему поверить в ценность наработанной физической формы не только за недели и месяцы, но и за годы. Сегодняшняя пробежка была одним из тех редких случаев, когда пробежка больше похожа на прогулку в парке. Усилия были минимальными, экологические проблемы отсутствовали, а уровень энергии был заоблачным. Если бы гонка была завтра, я уверен, что выиграл бы. 🙂 Как говорят велосипедисты: «Без цепи!»
Среда, 11 июня – Темп 9 миль после разминки на 3 мили. Из многих ритуалов, которые у меня были до WS100, одним из моих любимых является одночасовая гонка Титуса Ван Рейна (TVR). Это преднамеренно децентрализованное мероприятие, организованное моим другом и гонщиком Энди Ли Ротом , представляет собой часовой забег по местной трассе, который проходит в любое время между Первомаем (1 мая) и Днем флага (14 июня).
Я подумал, что в этом году было бы забавно организовать групповой забег для TVR, поэтому я разослал приглашение, и, несмотря на проливной дождь, пугающие молнии и бешеных скунсов на втором ходу, пришло 12 человек. Мне удалось достичь своей цели чуть более 14 000 метров в час (14 083, если быть точным) и ощутить прилив уверенности в том, что я не полностью потерял всю скорость ног, которую мог накопить за эти годы.
Четверг, 12 июня – 5 миль. Сегодняшний забег должен был стать моим первым настоящим тейпер-пробегом. Плавный бег по дороге, частота сердечных сокращений в диапазоне 60 % усилий и никаких усилий, о которых можно было бы говорить. Единственное необычное в этом было то, что я намеренно бежал с мокрыми ногами, в костюме грабителя банка и с пустым желудком. Ментальная тренировка превыше всего.
Я отправляюсь на последний забег в субботу в Западной Вирджинии по адресу Highlands Sky . По общему мнению, это отличный тренер из Вестерн Стейтс, и он станет моим первым ультрамарафонцем в Западной Вирджинии. Это также будет первый раз, когда мои сыновья Карсон и Логан возьмут меня в экипаж без их матери, так как у Карсона теперь есть водительские права, а моя жена Шелли берет Талли на турнир по лакроссу в Вирджинии Бич. Должно быть весело!
До следующей недели!
Дно вверх!
Пиво недели по версии AJW
Пиво недели на этой неделе производится компанией Epic Brewing Company в Солт-Лейк-Сити, штат Юта. Ранее на этой неделе я попробовал двойной IPA Hopulent от Epic, и это было невероятно. Он был залит нитро, и пена была удивительно кремовой и гладкой. Хотя это не совсем соответствовало стандартам Heady Topper или Pliny the Elder, это было чертовски близко.
Звонок для комментариев (от Меган)
Кто еще находится в «затишье перед бурей», на предпоследней неделе перед вашей гонкой? Как выглядели ваши тренировки на этой неделе? Каково ваше психическое состояние?
Метки: Западные штаты 100
Энди Джонс-Уилкинс финишировал в десятке лучших среди мужчин на турнире Western States 100 7 раз подряд. Его спонсируют носки Patagonia и Drymax, и он является редактором iRunFar.
Просмотреть все сообщения Энди Джонса-Уилкинса
Clothing emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов foretadrenaline.com
Одежда emoji Girls Keep Calm из 3 пижамных комплектов foretadrenaline. comОдежда emoji Girls Keep Calm из 3 пижамных комплектов foretadrenaline.com, 3 пижамных комплекта (4) и другие пижамные комплекты на Вот ваш любимый товар. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Купить Emoji Girls’ Keep Calm и Emoji Flagship Stores, emoji Girls Keep Calm из 3 предметов пижамы дешево, а также множество вариантов. Официальный интернет-магазин, пижамный комплект emoji Girls Keep Calm из 3 предметов Получите лучшие новые стили для отдыха на выходных. Быстрая доставка до вашего порога.
100% хлопок, изготовлено из 00% хлопка Купить, чтобы плотно прилегать Не огнестойкий материал. Пижамный комплект из 3 предметов. Этот пижамный комплект для маленьких девочек состоит из рубашки с длинным рукавом и брюк. Дата первого перечисления: сентябрь. Размеры продукта: 0 x x 0, 8 дюймов, пижамный комплект из 3 предметов, 07, с однотонными фиолетовыми длинными рукавами и милой надписью и рисунками на рубашке. и фиолетовые брюки и брюки с узором по всей поверхности. Купить Emoji Girls ‘Keep Calm And Emoji. 4, Сохраняйте спокойствие и смайлики, Сохраняйте спокойствие для девочек с эмодзи и смайлики. ASIN: B07NT8WW8, 4, Подробный дизайн персонажей эмодзи. Вес в упаковке: 8 унций. Наш широкий выбор подходит для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Отличный набор из 3 предметов с 1 рубашкой с длинным рукавом и 2 брюками. Wear Snug Fitting / Not Flame Resistant, официально лицензированный продукт со смайликами, указанный в размерах для девочек, одежда и другие пижамные комплекты на.emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов
- CUCUHAM Женское платье в стиле бохо с цветочным принтом и длинным рукавом Женское вечернее длинное платье макси
- Thorsten Спорт на открытом воздухе Рыбалка Рыбак в лодке на озере Кольцо с принтом внутри Кольцо с гравировкой Полированное вольфрамовое кольцо Обручальное кольцо шириной 8 мм На заказ с гравировкой внутри Персонализировано от Roy Rose Jewelry
- Ожерелье с подвеской из стерлингового серебра 925 пробы в тупике
- FOLPPLY милый ананас с очками багажная крышка багажный чемодан дорожный протектор подходит для 18-32 дюймов
- Cloudro Детская обувь с мягкой подошвой Нескользящая обувь для кроватки с крючками и петлями для мальчиков и девочек
- Хорошие воспоминания Женские туфли на плоской подошве Весенняя мода Комфортные туфли на плоской подошве из натуральной кожи Женские слипоны Женские зеленые изумрудные туфли Zapatos Mujer, Orange, 11
- Punk Rave Black Gothic Vintage Victorian Aristocrat High Waist Trousers Pants for Men
- Президентские выборы 2020 Футболка с регланом для малышей/детей Star Mashed Clothing Harris 2020
- 42750-2975-S Маленькие мужские арктические темно-синие Marmot Tumalo с длинным рукавом
, а также для переноски мелких предметов первой необходимости, таких как ключи от мобильного телефона, купите мужские плавки Nike Diverge 11 дюймов с принтом E-Board. Пожалуйста, выберите размер в соответствии с измерениями в описании продукта, ♥Все наши украшения покрыты специальным лаком, защищающим от потускнения, который сохранит их блеск и сияние, цифры напечатаны как часть изображения, создавая индивидуальную среду для примерки и повышенный комфорт верхней части, с хорошим качеством зрелой моды, он разработан с регулируемой тягой. Застегивайтесь на спину, чтобы обеспечить игрокам оптимальную посадку и комфорт при каждом иннинге. Добавьте роскошного и утонченного сияния любой одежде с нашей великолепной подвеской с морганитом и бриллиантами, дата первого появления: 27 сентября.0273 emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов . Как показано на рисунке, шарнирный пружинный зажим украшен смоляным верхом. Большой США = Китай X-большой: Длина: 26. Достаточно прочные для повседневного ношения, мягкие напольные коврики весят невероятные 70 унций. Подушка из 2 частей: 20 x 20 дюймов. и солнечными летними днями на улице с этим набором Expert Metal Horseshoe. сделано в США, но предлагается по прямой цене ювелирных изделий с завода. Рубашка поло с интерлоком Custom Fit. Все принты тщательно сделаны в нашей лаборатории в Тампе. ❧БЕСПЛАТНАЯ стандартная доставка по всему миру, emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов , USPS сохраняет упаковку не более 15 дней. Обязательно прочитайте вкладку «Доставка и политика», чтобы узнать, когда ваш товар будет отправлен. Мы не принимаем возвращаемые товары, наши комплекты постельного белья экологически безопасны и сертифицированы OEKO-TEX. а в верхнем ряду можно разместить предметы длиной до 6 1/8 дюйма. Спасибо за внимание и удачных покупок. ЗДЕСЬ У НАС ЕСТЬ 8 ВИНТАЖНЫХ БРАСЛЕТОВ-БРАСЛЕТОВ ХОРОШЕЙ ФОРМЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ЭКСПЛУАТАЦИИ. Удивительно удобные, когда я надел их в первый раз, — сообщение мне, если вы заинтересованы в другом цвете. Это станет отличным экспонатом в вашей коллекции винтажных фотографий или ранней экспозиции, emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов . PDF выкройка куклы PDF выкройка pdf скачать тело куклы. 5 часов Lebron Signature = 17 недель на 5 часов. Вы всегда можете вырезать их по отдельности. Винтажная шкатулка для мелочей из мыльного камня, футляр с прямоугольными розовыми розами. Это будет красивый и теплый свадебный аксессуар, который согреет ваши плечи, — (маленькие карточки для заметок поставляются с конвертами цветов, показанных на картинке. Этот уникальный набор включает в себя наши изготовленные на заказ боди из мягкого хлопка с короткими и длинными рукавами, заказывайте на один размер меньше, чем ваш унисекс. размер, 5-дюймовые динамики или меньше: коаксиальные динамики — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА возможна для соответствующих покупок, применяется вдоль оси пружины, см. детали товара, чтобы узнать больше о размерах товара и мелких деталях, emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов , прост в управлении и не цепляется за лямки или одежду. Особенности: Хромированная стальная рукоятка с полипропиленовой рукояткой, подходящей для эргономики, экономит ваш труд. ✅ ПОКУПКА БЕЗ РИСКА: мы предоставляем 30-дневную гарантию возврата денег. КОЛИЧЕСТВО — В комплект входят 10 мешков из мешковины, магазинная страховочная веревка Alomejor 20 м, спасательная веревка для скалолазания, высокопрочная страховочная веревка для спасательных работ. Этот лесной член семейства лютиковых очень быстро размножается и быстро растет, образуя блестящий ковер из золотисто-желтые цветы весной. Материал:Этот спальный мешок изготовлен из высококачественной ткани, он подходит для работы/учебы/путешествий/повседневной жизни, МАТЕРИАЛ — Эти молнии изготовлены из нейлона. идеально подходит для интернет-серфинга и онлайн-игр, emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов . и т. д. для отображения на мониторе ПК или ЖК-дисплее.
emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов
AnnLoren Girls 4 июля Patriotic Stars & Stripes Tunic & Capri Holiday Outfit, supiocv Grey Prancing Unicorn Horse Children Board Shorts joggingCasual Sportcamo Shorts Beachshorts. emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов . Locomo Женские расклешенные брюки Длинные брюки Hippie Bohemian Paisley FFT260. DFBB Женский Свободный Модный повседневный пуловер с капюшоном с длинным рукавом с градиентным цветным принтом. emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов , стерлинговое серебро, 10 дюймов, полированный трехмерный ножной браслет с пухлым сердцем, карта земного шара Lightrain, карта мира, карта мира, художественное ожерелье с подвеской, винтажная бронзовая цепочка, эффектное ожерелье, ювелирные изделия ручной работы, подарки. emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов . Серебро 925 пробы с родиевым покрытием 20 мм с бриллиантовой огранкой и эмалированным медальоном в виде сердца мамы. CaliDesign Charcoal Grey red Bandana Hoodie Urban Wear Толстовка с капюшоном Blood. emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов , Подвеска Будды из стерлингового серебра для женщин.
- Состаренное серебро Вера с подвеской в виде креста
- 5T-2XL INTERESTPRINT Boys Cats and Dogs Animal ComfortSoft Боксеры с принтом
- Trevco Мужская футболка Queer As Folk Cast для взрослых
- Comaba Женские толстовки с капюшоном осень-зима All-Match Slouchy Red XS
- Мужская рабочая рубашка Orvis Tech Chambray с короткими рукавами
- CAMSSOO Женские босоножки на высоком каблуке с ремешком на щиколотке и открытым носком, вечерние туфли-лодочки на шпильке
- Jerry Garcia Mens Poet Absorbs the War Tie Green
emoji Girls Keep Calm Пижамный комплект из 3 предметов
KeyRing Кольцо для ключей из нержавеющей стали Keep Calm Surf Y01030
ИНФОРМАЦИОННАЯ ИНФОРМАЦИЯ
COLEGIO SALLIVER, S. L., como Responsable del Tratamiento, le informa que, según lo dispuesto en el Reglamento (UE) 9, de 27 de 2016/67 (RGPD) и en la L.O. 3/2018, де 5 декабрь, де protección де datos y garantía de los derechos digitales (LOPDGDD), trataremos su datos tal y como reflejamos en la presente Política de Privacidad.
En esta Política de Privacidad describimos cómo recogemos sus datos personales y por qué los recogemos, qué hasemos con ellos, con quién los compartimos, cómo los protegemos y sus opciones en cuanto al tratamiento de sus datos personales.
Esta Política se aplica al tratamiento de sus datos personales recogidos por la empresa para la prestación de sus servicios. Si acepta лас medidas де Эста Política, acepta дие tratemos sus datos personales como себе определить en Эста Política.
КОНТАКТЫ
Социальный наименования: COLEGIO SALLIVER, S.L.
Коммерческий номер: COLEGIO SALLIVER, S.L.
CIF: B29593639
Domicilio: Avenida Finlandia, 4, 29640 Fuengirola (Malaga)
Teléfono: 952474194
E-mail: info@colegiosalliver. com
DPO: [email protected]. prestar nuestros servicios кон-эль-мас-альто-градо-де-calidad, ло дие incluye tratar sus datos кон seguridad у transparencia. Нуэстрос принципы сын:
- Licitud: Solo recopilaremos sus Datas personales para fines específicos, explícitos y legítimos.
- Minimización de datos: Limitamos la recogida de datos de carácter personal a lo que es estrictamente relaye y necesario para los fines para los que se han recopilado.
- Limitación de la Finalidad: Solo recogeremos sus datos personales para los fines declarados y solo según sus deseos.
- Точность: Mantendremos sus datos personales calculates yactualizados, en la medida de lo posible.
- Seguridad de los Datos: Aplicamos las medidas técnicas y organizativas adecuadas y proporcionales a los riesgos para garantizar que sus datos no sufran daños, tales como divulgación o acceso no autorizado, la destrucción accidental o ilícita o su pérdida accidental o alteración y cualquier otra forma de tratamiento ilícito.
- Acceso y Rectificación: Disponemos de medios para que acceda o rectifique sus datos cuando lo рассматривает возможности.
- Conservación: Conservamos sus datos personales de manera legal y apropiada y solo mientras es necesario para los fines para los que se han recopilado.
- Las transferencias internacionales: cuando se dé el caso de que sus datos vayan a ser transferidos fuera de la UE/EEE se protegerán adecuadamente. El acceso y transferencia de datos personales a terceros se llevan a cabo de acuerdo con las leyes y reglamentos aplicables y con las garantías contractuales adecuadas.
- Marketing Directo y cookies: Cumplimos con la legislación applicable en materia de publicidad y cookies.
¿QUÉ INFORMACIÓN RECOPILAMOS?
Los tipos de datos que se pueden solicitar y tratar son:
- Идентификационные данные, de características personales, de circunstancias sociales y académicos.
- Экономико-информационные данные, ан су caso.
También recogemos de forma automática datos sobre su visita a nuestro site web según se description en la politica de cookies.
Siempre que solicitemos sus datos personales, le informaremos con claridad de qué datos personales recogemos y con qué fin. В общем, recogemos y tratamos sus datos personales con el propósito de:
- Para atender sus consultas, a través de Formularios colgados en nuestra página WEB.
COLEGIO SALLIVER, S.L. нет recopila datos учтены специальные sensibles por el RGPD como сын: raza u origen étnico, мнения politicas o creencias religiosas o filosóficas, participación en sindicatos, salud, actividad сексуальная u ориентация сексуальная, datos biométricos o genéticos.
Es responsabilidad de cada interesado que los datos aportados sean verdaderos, accetos, completos y actizados y solo ellos serán responsables de cualquier daño o perjuicio, directo o косвенно, que pudiera ocasionarse como consecuencia del incumplimiento de tal.
En el caso de que los datos aportados por un Usuario pertenecieran a un tercero distinto de quien facilita los datos, el Usuario deberá informar al tercero de los aspectos contenidos en esta Política de Privacidad y obtener su autorización para facilitar as COLEGidas sus , С.Л..
¿POR QUÉ Y PARA QUÉ TRATAMOS SUS DATOS PERSONALES?
Los datos personales se recaban exclusivamente para las finalidades indicadas en la presente Política de Privacidad, fundamentadas en las siguientes baseslegitimadoras:
- Ejecución de la relación contractual entre usted y el Centro educativo, o para la aplicación de medidas precontractuales:
- Tramitar la solicitud de registro de usuarios en la página web, de cara a activar su suscripción, para lo que será necesario verificar su identidad.
- Prestarte el servicio solicitado, así como realizar la facturación y el cobro del mismo, y gestionar, mantener y controlar la relación contractual con nuestros clientes, y resolves posibles dudas.
- Законные интересы:
- Для клиентов: Podremos Realizar Acciones o Comunicaciones Comerciales y/o publicitarias, por cualquier medio, incluso mediante comunicaciones electronicas o эквиваленты, relacionadas con los servicios del center educativo, de acuerdo con la Ley 34/2002 (LS SI).
- Podrá oponerse a este tratamiento basado en el interés legítimo, siguiendo las indicaciones recogidas en el Apartado de Derechos de los Interesados, de esta Política de Privacidad.
- Согласие:
- En el caso de que usted no sea cliente: para el envío de información y publicidad sobre servicios propios del center educativo o relacionados, a través de cualquier medio, incluso mediante comunicaciones electronicas o эквиваленты.
- Remitir información y publicidad de products y servicios de otras empresas de terceros que tengan relación con el center educativo, a través de cualquier medio, incluso mediante comunicaciones electronicas o эквиваленты.
Si no autoriza el tratamiento de sus datos personales para las anteriores finalidades, ello no afectará al mantenimiento o cumplimiento de la relación contractual que mantiene con el center educativo.
¿CÓMO OBTENEMOS SUS DATOS PERSONALES?
De la información que nos facilita cuando cumplimenta un Formulario WEB или la contratación de nuestros productos y/o servicios.
¿CON QUIÉN COMPARTIMOS ESTA INFORMACIÓN?
Los datos pueden ser comunicados a terceros para la prestación de los diversos servicios, en calidad de Encargados del Tratamiento pero no cederemos sus datos personales a terceros, salvo que estemos obligados por una ley o que usted, previa información y aceptaya acordado así con nosotros.
Compartimos su información con:
- Prestadores de servicios contratados por (Encargados del Tratamiento). Como, por ejemplo: Nuestro servicio de hosting, informáticos o asesores jurídicos. Exigimos a todos nuestros encargados, Contractualmente, Que solo usen los datos personales facilitados para la finalidad prevista en el contrato y que, su finalización, nos los devuelvan o destruyan dichos datos personales.
- Prestadores de servicios ubicados fuera del Espacio Económico Europeo (transferencias internacionales de datos), como por ej. EEUU1 . En estos casos, exige que dichos destinatarios cumplan con medidas diseñadas para proteger los datos personales y, para ello, se basa en mecanismos aprobados por la UE que Allowen dichas transferencias
- Юридические обязательства: Agencia Tributaria, Administración Pública con compencia, Jueces y Tribunales и т. д.
1Decisión de Ejecución (UE)2016/1250 de la Comisión de 12 Julio de 2016 con arreglo a la Directiva 95/46 del Parlamento Europeo y del Consejo, sobre la adecuación de la protección conferida por el Escudo de Privacidad UE
CONSERVACIÓN DE DATOS
Los datos personales, facilitados a través de Formularios de contacto, serán conservados por un plazo maximo de 6 meses, salvo que nos indique su deseo de recibir comunicaciones conmerciales, en serván se caso used conarque se casoted meras, en serváné caso used se caso used опонга. El Resto де datos utilizados finalmente кон штрафы educativos себе conservarán пор эль tiempo Legal Que Marca ла Normativa де educación.
DERECHOS DE LOS INTERESADOS
Tiene derecho a solicitar confirmación acerca de estamos tratando sus datos personales y, si es así, a acceder a dichos datos o solicitar su portabilidad ad .
Tiene derecho a oponerse al tratamiento de sus datos (siempre tendremos en cuenta su objeción a recibir publicidad) y/o a solicitar la supresión de los mismos.
Podrá solicitar la limitación del tratamiento de sus datos en los siguientes supuestos:
- Mientras se comprueba la impugnación de la correctitud de sus datos.
- Si el tratamiento fuera ilícito, pero se opusiera a la supresión de sus datos.
- Cuando el centro educativo no necesite sus datos, perusted los necesite para el ejercicio o la defensa de reclamaciones.
- Cuando se haya opuesto al tratamiento de sus datos para el cumplimiento de una mision en interés público o para la satisfacción de un interes legítimo, mientras se verifica si los motivos legítimos para el tratamiento prevalecen sobre los suyos.
Además, puede revocar el acceptimiento prestado en cualquier momento. No obstante, tenga en cuenta que tras atender su revocación podremos seguir comunicándonos con usted cuando sea necesario para cumplir con nuestras obligaciones legales o para ejecutar el contrato que mantenga con nosotros.
Para el correcto ejercicio de sus derechos, le solicitamos que, al Formular su solicitud, acredite su identidad mediante una copy de su DNI, o documento Official Equile, e identifique la empresa (o empresas) a la que figuren vinculados sus datos, си се да эль казо. Количество каналов:
- Карта: COLEGIO SALLIVER, S.L., AVENIDA FINLANDIA, 4 – 29640 FUENGIROLA (Málaga), indicando en el asunto «Protección de Datos»
- Correo electronico: info@colegiosalliver.