вес, размеры и цена в Москве
ЗАВОД ЖЕЛЕЗО-БЕТОННЫХ ИЗДЕЛИЙ
Дорожные плиты, фундаментные блоки, ПАГ
Доставка в день обращения, скидки при объемах
- Производство и склад
в пределах третьего кольца - Собственный автопарк
спецтехники - Мы не посредники,
а реальный завод - Доставка
в течении 2 часов - с 2000 года являемся
лидерами по продаже бетона
Цены указаны по состоянию на 30.09.2022
Маркировка | Габаритные размеры в мм | Вес, кг | Объем, м3 | Цена руб/шт. |
||
---|---|---|---|---|---|---|
Длина | Ширина | Высота | ||||
Фундаментные блоки ФБС 24.4.6 | 2380 | 400 | 580 | 1270 | 0,543 | 2700 |
Маркировка изделия
Согласно ГОСТ 13579-78 название «ФБС 24. 4.6-Т» расшифровывается следующим образом:
- ФБС — фундаментный блок сплошной
- 24 (первая цифра) — длина блока в метрах
- 4 (вторая цифра) — ширина блока в метрах
- 6 (третья цифра) — высота блока в метрах
- Т — тяжелый бетон. Если эта маркировка в названии отсутствует, то фундаментный блок выполнен из других видов бетона, информация о котором указана в техническом паспорте на изделие
Все изделия ФБС, выпускаемые компанией «Евроконтракт», снабжаются техническим паспортом, содержащим следующий минимум информации:
- дата изготовления ФБС;
- ГОСТ
- Морозостойкость и водонепроницаемость бетона;
- Прочность и плотность бетона;
Фундаментные блоки ФБС 24.4.6
Строительство дома, торгового, промышленного здания начинается с фундамента. Он является одной из важнейших любого здания, принимая на себя все нагрузки и распределяя их равномерно по основанию. Грамотно и по всем правилам заложенный фундамент обеспечивает долговечную эксплуатацию постройки и отвечает за ее безопасность.
В строительстве важным показателем является скорость и оперативность работ. Быстрые сроки завершения стройки. И сокращая и оптимизируя время строительства здания, следует уделить внимание выбору того типа фундамента, на возведение которого потребуется как можно меньше времени. Удачным будет выбор ленточного фундамента, при закладке которого используются сплошные фундаментные блоки, или ФБС.
Быстрая закладка фундамента с помощью бетонных блоков
Как уже говорилось выше, при закладке фундамента ленточного типа, используются сплошные фундаментные бетонные блоки ФБС. Они удобны по многим показателям:
- очень легко рассчитать количество блоков под нужную площадь основания дома;
- одинаковые размеры позволяют возводить ровный фундамент;
- блоки выдерживают большие перепады температур и воздействие атмосферных осадков;
- ФБС отличает высокая влагостойкость;
- прочность бетона, который используется в их составе позволяет выдерживать большие нагрузки от конструкций постройки и обеспечивает надежное основание здания. Тяжелый
Именно по этой причине строители выбирают именно ленточный тип фундамента и в качестве строительного материала — фундаментные бетонные блоки. Сборные блочные ленточные фундаменты будут удачным решением для построек со стенами из кирпича или любого другого тяжелого строительного материала. Они прекрасно выдерживают вес стен и распределяют по грунту всю их нагрузку.
ФБС 24.4.6 для надежного и прочного фундамента
Среди часто используемых строителями блочных изделий для фундамента, является типовой размер 24.4.6. Сплошные бетонные блоки для фундамента ФБС 24.4.6 имеют следующие характеристики:
- длина изделия — 2380 мм;
- ширина — 400 мм;
- высота — 580 мм;
- масса составляет 1270 кг;
- объем — 0,55 м3.
Блоки имеют ровную форму и поверхность, что обеспечивает их равномерную кладку. Для удобства монтажа на ФБС предусмотрены стальные петли из стержневой горячекатаной арматуры. Все изделия на производстве проходят контроль и испытания согласно действующему ГОСТ 13579-78. Это позволяет говорить об их прочности, надежности арматурных петель и о соответствии всем строительным нормам и правилам. Этот типоразмер позволяет рассчитывать нужное количество единиц для основания постройки и легко вписывается в его площадь.
Фундаментные блоки от компании «Евроконтракт»
Наша компания “Евроконтракт” изготавливает уже более 15 лет товарный бетон, дорожные плиты, фундаментные блоки и другие строительные материалов. Мы обеспечиваем ими строительные и дорожные компании, частные застройки по все стране. Заказать нужное количество фундаментных блоков ФБС 24.4.6 и рассчитать стоимость вы можете позвонив по номеру +7 992 999 19 19 или оставив заявку на сайте.
Галерея
Размеры и вес фундаментных блоков
Статьи
Категории
13 12 2020, 00:00
Оглавление
- Размеры фундаментных блоков
- Длина
- Ширина
- Высота
- Вес фундаментных блоков.
В данном обзоре мы расскажем о главных технических характеристиках фундаментных блоков ФБС – размерах и массе.
Длина фундаментных блоков, согласно ГСН (Государственным строительным нормам), бывает трех значений
- 90см
- 120см
- 240см
Ширина фундаментных блоков, также согласно ГОСТ, имеет 4 стандартных значения:
- 30см
- 40см
- 50см
- 60см
Высота фундаментных блоков, выпускаемых заводами Украины, имеет следующий стандартный размер: 60см (0,6м). Очень редко можно найти фундаментные блоки высотой 30см. По индивидуальным заказам возможно изменение высоты как в большую, так и в меньшую сторону, однако стандартной высотой является именно 60см.
Имея 3 длины, 4 ширины, и одну высоту, представим все стандартные размеры фундаментных блоков в следующей таблице:
Стандартные размеры фундаментых блоков | ||||
Ширина, см | ||||
Длина, см | 30см | 40см | 50см | 60см |
90см | ФБС 9-3-6 | ФБС 9-4-6 | ФБС 9-5-6 | ФБС 9-6-6 |
120см | ФБС 12-3-6 | ФБС 12-4-6 | ФБС 12-5-6 | ФБС 12-6-6 |
240см | ФБС 24-3-6 | ФБС 24-4-6 | ФБС 24-5-6 |
ФБС 24-6-6 |
Вес блоков ФБС напрямую зависит от их размеров. Учитывая то, что стандартный блок ФБС изготавливается из тяжелого бетона М100 и выше, а также зная удельный вес данной марки бетона, покажем вес фундаментных блоков в следующей таблице:
Наименование | Длина, см | Ширина, см | Высота, см | Объем блока, м3 | Удельный вес бетона, кг/м3 | Масса фундаметного блока, кг | Вес фундаметного блока, т | Вес блока ФБС по ГСН, т |
ФБС 9.3.6 | 90 | 30 | 60 | 0,162 | 2200 | 356,4 | 0,356 | 0,35 |
ФБС 9. 4.6 | 90 | 40 | 60 | 0,216 | 2200 | 475,2 | 0,475 | 0,468 |
ФБС 9.5.6 | 90 | 50 | 60 | 0,27 | 2200 | 594 | 0,594 | 0,586 |
ФБС 9.6.6 | 90 | 60 | 60 | 0,324 | 2200 | 712,8 | 0,713 | 0,705 |
ФБС 12.3.6 | 120 | 30 | 60 | 0,216 | 2200 | 475,2 | 0,475 | 0,49 |
ФБС 12.4.6 | 120 | 40 | 60 | 0,288 | 2200 | 633,6 | 0,634 | 0,636 |
ФБС 12. 5.6 | 120 | 50 | 60 | 0,36 | 2200 | 792 | 0,792 | 0,795 |
ФБС 12.6.6 | 120 | 60 | 60 | 0,432 | 2200 | 950,4 | 0,95 | 0,955 |
ФБС 24.3.6 | 240 | 30 | 60 | 0,432 | 2200 | 950,4 | 0,95 | 0,975 |
ФБС 24.4.6 | 240 | 40 | 60 | 0,576 | 2200 | 1267,2 | 1,267 | 1,305 |
ФБС 24.5.6 | 240 | 50 | 60 | 0,72 | 2200 | 1584 | 1,584 | 1,63 |
ФБС 24. 6.6 | 240 | 60 | 0,864 | 2200 | 1900,8 | 1,901 | 1,95 |
Посчитать размер и вес фундаментного блока достаточно просто. Из его названия мы можем сразу увидеть его размеры, а воспользовавшись несложной формулой, получим также вес блока ФБС.
Расшифруем следующий фундаментный блок: ФБС 24.5.6.
Размер данного блока составляет 2400x500x600мм. Вычислим объем данного блока в кубических метрах. Для этого есть простейшая формула из геометрии средней школы: нужно умножить длину на высоту и на ширину. Обращаем внимание, что все вышеуказанные значения нужно перевести в метры, дабы избежать ошибки в разрядности. В данном случае получается следующий пример: 2.4*0.5*0.6 = 0,72м3.
Теперь, зная объем одного блока, а также зная удельный вес (плотность) готового высохшего бетона, а имеено 2200кг, очень просто определить вес фундаментного блока в данном случае:
0,72*2200=1584кг
Таким простым образом можно рассчитать массу любого готового изделия из бетона, а не только вес фундаментного блока. Важно лишь помнить, что данный расчет можно применить только к полнотелому изделию из тяжелого бетона.
Статьи
Оцените статью:
(0.0)
ФБС 24.4.6Т фундаментный блокАртикул: 31959
0,00 грн
949,20 грн
ФБС 24.5.6Т фундаментный блокАртикул: 31962
0,00 грн
1 183,20 грн
ФБС 24.6.6Т фундаментный блокАртикул: 31966
0,00 грн
1 423,20 грн
Блоки ФБС размеры согласно ГОСТ 13579-78
Опубликовано от
ФБС согласно ГОСТ 13579-78 расшифровывается как “Фундаментные блоки сплошные”. Блоки ФБС размеры которых приведены ниже, производятся на железобетонных комбинатах посредством формовочного литья. Их используют в качестве элементов сборного фундамента. Строительстве цокольных помещений, подвалов, стен промышленных зданий.
Читать далее…
Производитель ФБС в МосквеОсновным преимуществом использования блоков ФБС является скорость строительства и прочность готового основания. Эти бетонные изделия не армируются, т.е. при их создании практически не используется арматура. Металл применяется только в качестве монтажных петель. Средний расход стали (для ФБС 24-4-6) полтора килограмма. Используемый бетон по ГОСТ – марки B-7.5 (М100) и B-15 (М200). Несмотря на низкое качество бетонной смеси, ФБС отлично держат статичные нагрузки на сжатие. Они очень хрупкие, легко ломаются при ударе. В силу своей правильной геометрической формы, сборка фундамента происходит по принципу конструктора “Лего”. Проектировщик на стадии подготовки документации подбирает элементы фундаментного строительства по заданным размерам здания.
Сводная выдержка из таблиц ГОСТ 13579-78
Буквенные индексы означают:
- Т – тяжелый бетон.
- П – пористый бетон (керамзитобетон)
- С – плотный бетон (силикатный)
ИЗДЕЛИЕ | Марка бетона | Д (l) в мм. | Ш (b) в мм. | В (h) в мм. | Вес тонн |
---|---|---|---|---|---|
ФБС 24-3-6 Т | B 7,5 (M100) | 2380 | 300 | 580 | 0.97 |
ФБС 24-4-6 Т | B 7,5 (M100) | 2380 | 400 | 580 | 1.3 |
ФБС 24-5-6 Т | B 7,5 (M100) | 2380 | 500 | 580 | 1.63 |
ФБС 24-6-6 Т | B 7,5 (M100) | 2380 | 600 | 580 | 1.96 |
ФБС 24-3-6 П | B 7,5 (M100) | 2380 | 300 | 580 | 0.73 |
ФБС 24-4-6 П | B 7,5 (M100) | 2380 | 400 | 580 | 0.98 |
ФБС 24-5-6 П | B 7,5 (M100) | 2380 | 500 | 580 | 1. 22 |
ФБС 24-6-6 П | B 7,5 (M100) | 2380 | 600 | 580 | 1.47 |
ФБС 24-3-6 С | B 15 (М200) | 2380 | 300 | 580 | 0.81 |
ФБС 24-4-6 С | B 15 (М200) | 2380 | 400 | 580 | 1.09 |
ФБС 24-5-6 С | B 15 (М200) | 2380 | 500 | 580 | 1.36 |
ФБС 24-6-6 С | B 15 (М200) | 2380 | 600 | 580 | 1.63 |
В таблице ниже представлены все типовые размеры блоков фундаментного строительства.
Блоки ФБС размерыБлоки ФБС размеры и цены
Наша компания является производителем фундаментных блоков в Московском регионе. Мы предлагаем заказчикам бетонные изделия высокого качества. ФБС нашего производства это:
- Бетон марки М 100 на гравийном щебне.
- Идеальная геометрия фундаментного блока.
- Большой складской запас самых ходовых позиций (ФБС 24-4-6, ФБС 24-6-6).
- Своевременная доставка заказчику.
- Индивидуальный подход к каждому клиенту в расчете на долговременное сотрудничество.
Размеры: 2380x300x580 мм. Масса: 0.97 т. Блоки ФБС 24-3-6 | Размеры: 2380x400x580 мм. Масса: 1.3 т. Блоки ФБС 24-4-6 | Размеры: 2380x500x580 мм. Масса: 1.63 т. Блоки ФБС 24-5-6 | Размеры: 2380x600x580 мм. Масса: 1.96 т. Блоки ФБС 24-6-6 |
Цена | Цена | Цена | Цена |
Размеры: 1180x300x580 мм. Масса: 0.51 т. Блоки ФБС 12-3-6 | Размеры: 1180x400x580 мм. Масса: 0.66 т. Блоки ФБС 12-4-6 | Размеры: 1180x500x580 мм. Масса: 0.84 т. Блоки ФБС 12-5-6 | Размеры: 1180x600x580 мм. Масса: 1.02 т. Блоки ФБС 12-6-6 |
Цена | Цена | Цена | Цена |
Размеры: 1180x400x280 мм. Масса: 0.31 т. Блоки ФБС 12-4-3 | Размеры: 1180x500x280 мм. Масса: 0.38 т. Блоки ФБС 12-5-3 | Размеры: 1180x600x280 мм. Масса: 0.46 т. Блоки ФБС 12-6-3 |
Кроме того, мы готовы принять заказ на индивидуальные требования потребителя. Например изготовить фундаментные блоки на гранитном щебне или на марке бетона М-300. Мы открыты к диалогу и готовы рассмотреть условия сотрудничества.
Компания База ЖБИ производит следующие виды железобетонных изделий:
- Во-первых, сваи железобетонные.
- Во-вторых, дорожные плиты.
- В-третьих, аэродромные плиты.
Звоните – договоримся!
+7 (495) 640-61-66
Блоки ФБС: сфера использования, размеры.
Статьи о строительстве- Главная
- Статьи
- Блоки ФБС: сфера использования, размеры
Аббревиатура ФБС расшифровывается как фундаментные блоки сплошные. Это строительный материал, используемый при возведении фундаментов под здания любого назначения. Блоки обладают монолитной конструкцией и определённой формой, оснащаются стальными петлями для выгрузки и установки на штатном месте. Благодаря высокой прочности и большим размерам, они позволяют оперативно создавать прочные фундаменты, выдерживающие серьёзные нагрузки от возводимых на них стенах.
09.12.2019
Блоки-плиты ФБС изготавливаются их следующих материалов:
Керамзитобетон или силикатный бетон – блоки из этих материалов отличаются невысокими плотностными и эксплуатационными характеристиками. Они используются для возведения фундаментов под лёгкие здания и хозяйственные постройки. Рекомендованная максимальная высота возводимых зданий – два этажа;
-
Прочный лёгкий бетон марки B100 – блоки из этого бетона годятся для малоэтажного строительства. Они лёгкие, но прочные, отличаются лёгкостью в укладке;
-
Тяжёлые марки бетона от М100 до М200 – из этого бетона делаются самые популярные на строительном рынке фундаментные блоки ФБС. Самыми распространёнными являются блоки М100, они используются как в тёплом, так и в холодном климате. Для северных условий, где свирепствуют морозы, подойдут блоки ФБС из бетона марки М150 – они выдержат серьёзные перепады температур. Для строительства многоэтажных и тяжёлых зданий используются блоки из бетона М200 – они отличаются высокой прочностью и износостойкостью.
Помимо бетона, в конструкции фундаментных блоков присутствует арматура – она придаёт им дополнительную прочность при растягивающих нагрузках.
ГОСТ на фундаментные блоки ФБС предусматривает строго определённые габариты сторон. Наибольшей популярностью пользуются следующие блоки:
-
12.6.3 – ширина 600 мм, высота 280 мм, длина 1180 мм. Масса одного блока – 460 кг;
-
12.3.6 – ширина 300 мм, высота 580 мм, длина 1180 мм. Масса одного блока – 460 кг;
-
12.4.6 – ширина 400 мм, высота 580 мм, длина 1180 мм. Масса одного блока – 640 кг;
-
12. 5.6 – ширина 500 мм, высота 580 мм, длина 1180 мм. Масса одного блока – 790 кг;
-
12.6.6 – ширина 600 мм, высота 580 мм, длина 1180 мм. Масса одного блока – 960 кг;
-
24.3.6 – ширина 300 мм, высота 580 мм, длина 2380 мм. Масса одного блока – 970 кг;
-
24.4.6 – ширина 400 мм, высота 580 мм, длина 2380 мм. Масса одного блока – 1300 кг;
-
24.5.6 – ширина 500 мм, высота 580 мм, длина 2380 мм. Масса одного блока – 1630 кг;
-
24.6.6 – ширина 600 мм, высота 580 мм, длина 2380 мм. Масса одного блока – 1960 кг.
Также в продаже присутствуют и более мелкие блоки – например, 9.6.6, 9.4.6 и 9.5.6.
Выбор блоков зависит от условий эксплуатации, размера фундамента, высоты и веса будущего здания. На слабых грунтах используются блоки 12.6.3, 12.6.6 и 24.6.6 – за счёт большой ширины они равномерно распределяют нагрузку на почву. При этом необходимо учитывать и толщину стен – для высоких и тяжёлых зданий зачастую используются блоки нескольких размеров, образующих мощный и устойчивый фундамент.
Создание фундамента из блоков
Фундаментные блоки обеспечивают самую быструю постройку фундаментов – достаточно поставить несколько плит друг на друга, связав их арматурой и цементным раствором. Установка блоков осуществляется с помощью подъёмного крана, так как их вес достигает двух тонн. Под здание площадью 100 кв. м. можно соорудить фундамент буквально за 2-3 без учёта рытья котлована.
Тот же ленточный фундамент из бетона такой оперативности не даёт. Для него нужна опалубка, на сооружение и укрепление которой уйдёт несколько дней. Также необходимо завезти на строительную площадку материалы для замешивания раствора, подготовить производительную бетономешалку. Ускорить создание ленточного фундамента поможет автомиксер с бетоном или бетононасос. Но даже эти меры не обеспечат быстрой постройки такого фундамента – на ту же постройку площадью 100 кв. м, начиная от создания опалубки до окончания работ, уйдёт дней 10.
Фундаменты из блоков ФБС активно используются в многоэтажном строительстве – на блоках из высокопрочных марок бетона сооружаются жилые здания, строятся производственные цеха, возводятся частные дома и коттеджи, здания больниц и учебных заведений. Блоки из лёгкого бетона используются для возведения ангаров, хозяйственных построек, жилых зданий из облегчённых материалов (например, из дерева или лёгкого фальшбруса, проложенного теплоизоляцией).
Фундаментные блоки: преимущества и недостатки
Рассмотрим преимущества фундаментных блоков ФБС:
-
Лёгкость в монтаже – блоки похожи на элементы конструктора, что способствует быстрой сборке фундамента. К тому же они оснащаются пазами;
-
Высокая прочность – в наибольшей степени это касается блоков из тяжёлых сортов бетона;
-
Стойкость к негативным воздействиям окружающей среды – блоки ФБС выдерживают многократные перепады температур и воздействие атмосферных осадков;
-
Подходят для любых типов зданий – достаточно правильно подобрать блоки, ориентируясь на их размеры и материалы производства.
Недостатки – блоки требуют защиты от содержащейся в грунте влаги, им нужна выровненная песком площадка для укладки. Кроме того, фундаменты из ФБС, возвышающиеся над поверхностью строительной площадки, часто требуют теплоизоляции. Достоинств гораздо больше недостатоков, что обеспечивает блокам большой спрос.
Купить ФБС-блоки дешево и с доставкой по Волжскому, Волгограду и Волгоградской области вы сможете в производственно-коммерческой фирме Тибет. Мы работаем с 2006 года, обеспечивая стройматериалами как частных лиц, так и крупные строительные компании. Мы производим блоки ФБС на собственном оборудовании, контролируя качество готовой продукции. Подберите блоки подходящего размера, а мы доставим их на строительную площадку.
Назад к списку
технические характеристики, виды, укладка — Статьи «Первый Стройцентр» в Перми
Высокопрочные бетонные изделия сегодня являются прекрасной альтернативой монолитному фундаменту. Износоустойчивые конструкции широко используют при возведении производственных, промышленных, складских и жилых объектов. Блоки ФБС обладают превосходными прочностными характеристиками и эксплуатационными качествами. Дополнительно можно отметить стабильность геометрических размеров и долговечность.
Строительный рынок предлагает богатое разнообразие видов и размеров фундаментных блоков. Изделия имеют различную маркировку, например, продукция А3 является лицевой и предназначена под покраску, А6 лицевая неотделываемая, то есть не требует обработки. Маркировка содержит информацию также о типе бетона. Понимание и знание принципа маркировки позволит проверить стройматериал по заданным критериям.
Изготовление блоков ФБС для фундамента
Стройматериал производят из тяжелого бетона, силикатно-бетонной смеси, керамзитобетона. Заготовка проходит естественную просушку в камерах в течение установленного производителем срока и пропарку. Уникальная технология производства обеспечивает необходимый коэффициент прочности.
Процесс производства выглядит следующим образом:
-
Приготовление смеси. Цемент смешивают водой в специальной емкости. Встроенные лопасти обеспечивают быстрое и эффективное перемешивание.
-
Формирование блоков. Жидкостную массу загружают в форму. На крупных производственных предприятиях имеются специальные бетононасосы-пневмонагнетатели.
-
Уплотнение продукции. Следующим этапом производится уплотнение бетона, просушка и пропарка. При этом соблюдаются установленные технологические регламенты.
На каждом предприятии имеется отдел ОТК, который проверяет блоки ФБС на соответствие требуемым характеристикам и эксплуатационным параметрам. Современные производственные мощности позволяют на выходе получать высокопрочный стройматериал, используемый для возведения различных строений.
Конструктивные особенности
Расшифровываются ФБС блоки как «фундаментные блоки сплошные». Их главная особенность в том, что они идут без пустот, способны выдерживать повышенную нагрузку, могут эксплуатироваться в течение 100 лет и более. Например, фундаментные блоки ЖБИ ФБП имеют пустоты. По своим показателям они значительно уступают блокам ФБС, выполненным по ГОСТу. Среди их конструктивных особенностей можно выделить следующие моменты.
-
Монтажные петли. Изделие изготавливают из прочной арматуры толщиной 12 мм. Петли используются для перемещения блоков на место проведения работ.
-
Фигурные выемки. Специальные конструкции предназначены для соединения изделий между собой. Места прилегания затем заливают бетонной смесью для надежной фиксации.
Бетонная система имеет также маркировку прочности, например М100 стандартное изделие, а М200 отличается повышенной прочностью. Сегодня можно купить фундаментные блоки армированного и неармированного типа. Первые выделяются прочностью и износоустойчивостью, чаще используются для возведения крупных объектов. При изготовлении используют железную арматуру марки А1. В каждом конкретном случае необходимо учитывать также показатель механических нагрузок, возможные температурные перепады и коэффициент влажности.
Характеристика фундаментных блоков
-
Высокая плотность. В среднем она составляет 1800-2500 кг/м3. В соответствии с утвержденными стандартами вес блока ФБС составляет примерно около 1500 кг, зависит от марки и типа сырья.
-
Прочность. Для больших объектов рекомендуется приобретать изделия из бетона марки В3.5 (М50) и В15 (М200). При возведении хозблоков подойдет блочная система из бетона В7.5 (М100).
-
Водонепроницаемость. Влагостойкость купленных блоков ФБС должна быть не меньше W2.
-
Морозоустойчивость. Продукция должна выдерживать более 55 циклов заморозки и разморозки.
Дополнительно следует отметить, что каждый блок ФБС отличается размерами. В основном производители поставляют модели длиной от 880 до 2380 мм. Ширина ФБС блоков может быть от 300 до 600 мм. Важным параметром при приобретении блока ФБС является высота. Чаще всего она составляет 580 мм. Если вы приобретаете изделие, промаркированное как ФБС-9-4-6п, значит продукция имеет длину 880 мм, ширину 400 мм, высоту 580 мм. Буква на конце означает из чего блок ФБС состоит, из плотного силиката, керамзитобетона или бетона.
Сфера применения
Продукция используется для формирования фундаментного основания. Инновационные технологии позволяют производить укладку блоков ФБС на различных поверхностях, даже в тех местах, где фиксируются подвижные грунты. К их ключевым преимуществам относится то, что нет необходимости возводить опалубку. Система пропаривания и вибрирования обеспечивает повышенную прочность. Рекомендуется приобретать изделие максимальной длины. Чем меньше стыков и швов, тем надежнее готовая конструкция.
Виды фундаментных блоков
Наибольшей популярностью для возведения оснований используются изделия ФБС. Они не имеют внутри пустот, характеризуются повышенной прочностью. При выборе подходящего вида ФБС блоков необходимо знать, что они подразделяются на категории. Например, А3-А6 означает, что они устанавливаются с лицевой стороны, а А7 с не лицевой.
Интернет-магазин «Первый стройцентр Сатурн-Р» предлагает приобрести фундаментные блоки по выгодной стоимости различных размеров с монтажными петлями. Реализуемая продукция полностью соответствует требованиям ГОСТ, прошла необходимые проверки. По запросу клиента готовы предоставить сертификаты и техническую документацию, которая позволит удостовериться в безукоризненном качестве продукции.
Фундамент из фундаментных блоков: основные плюсы и минусы
-
Высокая морозоустойчивость и водостойкость. Материал устойчив к перепадам температуры и агрессивной среде.
-
Быстрый монтаж. Технология устройства фундаментного основания из ФБС блоков довольно простая. Нет необходимости возводить опалубку, заливать бетонную массу и выполнять другие манипуляции.
-
Длительный эксплуатационный период. Средний срок службы составляет 100-150 лет при соблюдении схемы раскладки ФБС блоков и правильной эксплуатации объекта.
-
Повышенная прочность. Готовая конструкция имеет высокую плотность. Наличие специальных выемок помогает надежно соединять изделия между собой.
-
Доступная стоимость блоков ФБС. Возведение данной конструкции обойдется значительно дешевле монолитной. Последняя требует больших финансовых вложений.
Бетонные изделия недостатков практически не имеют, за исключением большой массы, что требует привлечения тяжелой крупногабаритной техники. Сборная конструкция требует обвязки с применением армирующего пояса из бетонной смеси. Устройство фундамента блоками ФБС выполнять достаточно легко, необходимо лишь исполнять строительные нормы и правила. Главное заранее рассчитать количество элементов для возведения объекта, чтобы исключить переплату за материал.
Особенности расчета количества блоков ФБС
При формировании инженерной документации необходимо произвести расчет следующих элементов:
-
Толщина стеновых покрытий.
-
Вес готовой конструкции.
-
Возможная устойчивость грунта.
Если на объекте фиксируется плохая устойчивость почвенного покрова, лучше использовать изделия внушительных размеров, например, блоки длиной 2380 мм. В каждом конкретном случае необходимо определить количество материала. Предварительно потребуется выполнить раскладку по длине и высоте. По мнению экспертов оптимальным вариантом будет тот, в котором на одну плоскость приходится не более 4-6 элементов.
Технология монтажа фундаментных блоков
В самом начале формируется песчано-гравийная смесь. Она выполняет важную выравнивающую функцию. Обычно толщина песчаной подушки составляет 15-20 см. Для начала изделие укладывают по углам, затем проверяют их по уровню, после этого протягивают шнур и ведут последующую укладку. Перевязка вертикальных швов производится путем заполнения пустошовных швов блоков ФБС раствором. Швы должны быть тщательно заполнены бетонной смесью.
Богатый выбор размеров позволит возвести фундамент различной конфигурации для любого объекта. Высокая прочность конструкции гарантирована на любом типе грунта при соблюдении условий монтажа.
Вес блока ФБС, зачем следует его знать, онлайн калькулятор веса блока ФБС
Содержание
- Блоки и их вес
- Зачем следует знать вес блоков ФБС?
- Онлайн-калькулятор веса и объема блоков
Традиционным материалов в отечественном строительстве можно назвать ФБС. Подобного рода материал хорошо себя зарекомендовал при возведении фундамента и стен, цокольных частей здания.
Столь высокая популярность прежде всего связана с исключительными эксплуатационными качествами, которыми обладает рассматриваемый материал.
Блоки и их вес
Несмотря на применение схожей технологии производства различными поставщиками ФБС, они могут иметь различный вес. Также для предоставления большого выбора клиентам проводится создание ФБС различных размеров.
Наиболее распространенными типами блоков можно назвать:
- ФБС – стеновой тип материала, предназначенный для возведения фундамента. Они получили большое распространение в последнее время по причине возможности существенного ускорения процесса кладки и удешевления проекта. Большая площадь торцевой поверхности позволяет также уменьшить количество швов, а значит уменьшается объем работ у каменщика и снижается расход клеящего состава.
- ФБП – материал, предназначенный также для возведения фундамента, имеет пустотелости для уменьшения массы и повышения изоляционных качеств. Высокие изоляционные свойства можно связать прежде всего с тем, что в пустотах, выполненных в виде ячеек, находится воздух, выступающий в качестве изоляционного барьера. Также пустоты становятся причиной снижения количества используемого вещества при формировании блока, что становится причиной его удешевления.
- УДБ – унифицированные дырочные варианты исполнения. Применяются они в строительстве редко, но в некоторых ситуациях могут быть незаменимы.
Зависимость блоков от размеров проявляется изменением веса: чем больше линейные размеры, тем больше масса. Однако строительный материал одного и того же размера может иметь схожий показатель.
Это связано с тем, что другие факторы также оказывают влияние на рассматриваемый показатель:
- Плотность – еще один из основных показателей, которые учитываются при расчетах.
- Наличие пустот, их объем.
Большая часть параметровматериала для возведения фундамента стандартизированы.
Зачем следует знать вес блоков ФБС?
Если с линейными размерами все просто, то при рассмотрении веса может возникнуть довольно много вопросов, к примеру, зачем его знать.
Знание веса одного блока позволяет:
- Для расчета массы всей партии, что важно при выборе транспортного средства, на котором будет проводиться доставка строительного материала.
- Для определения давления, которое будет оказываться на грунт или непосредственно сам фундамент, если материал использовался для возведения стен.
Особое внимание следует уделить второму пункту. При проведении работы по проектированию фундамента учитывается общий показатель давления, оказываемого на грунт.
Сравнив этот показатель с тем, какой несущей способностью обладает грунт согласно результат проведенных исследований определяют возможность использования тех или иных материалов при строительстве. Также общий показатель давления используется при определении степени заземления фундамента.
Поэтому проводится расчет веса всех блоков, после чего это результат складывается с другими показателями и определяется общий вес сооружения и давления на один квадратный метр.
Онлайн-калькулятор веса и объема блоков
Если всего несколько лет назад расчеты предусматривали использования специальных формул, то сегодня можно использовать онлайн-калькулятор. Наиболее популярным сегодня можно назвать: http://stroy-calc.ru/raschet-blokov.
Он предназначен для определения огромного количества параметров, в том числе и общего объема блоков и их массу, необходимые для строительства.
К особенностям данного калькулятора отнесем следующие моменты:
- Проводится ввод линейных размеров ФБС, которые могут варьировать в достаточно большом диапазоне.
- Указывается плотность, которая должна быть определена производителем и выделена в характеристиках распространяемой продукции. Также можно указать вес одного блока.
Остальные характеристики касаются особенностей сооружения: длина, высота, толщина стен и особенности кладочной сетки. После расчетов выводится вся важная информация, в том числе и масса, объем партии, оказываемое давление при создании кладки с указанной толщиной раствора.
Современное строительство можно проводить с высокой точностью, для чего используются онлайн-калькуляторы. Математическая погрешность в случае их использования сводится к нулю, то есть человеческий фактор не сыграет.
Недостатком метода можно назвать то, что зачастую создатели онлайн-калькуляторов не указывают формулы, по которым ведется расчет.
Поэтому оценить погрешность расчетов с точки зрения используемых коэффициентов достаточно сложно. Всегда нужно учитывать полученные результаты с запасом на погрешность.
Основы FBS | Thermo Fisher Scientific
Что такое эмбриональная бычья сыворотка (FBS)?
- Сыворотка – фракция крови янтарного цвета, остающаяся после естественного свертывания крови; как правило, ее дополнительно очищают с помощью центрифугирования, которое служит для удаления оставшихся клеток крови
- Фетальная телячья сыворотка (FBS) – это сыворотка, полученная из крови, полученной от бычьего плода через закрытую систему сбора
Для чего используется ФБС?
- Фетальная телячья сыворотка (FBS) используется в качестве добавки для роста для in vitro клеточная культура эукариотических клеток. Сыворотки животных — как бычьи, так и не бычьи сыворотки — используются в клеточных культурах, причем наиболее широко используется фетальная бычья сыворотка (FBS).
- FBS содержит факторы роста и очень низкие уровни антител, что обеспечивает универсальность для многих различных применений клеточных культур. В FBS содержится более 1000 компонентов, включая белки, электролиты, липиды, углеводы, гормоны, ферменты и другие неопределенные компоненты, которые необходимы во многих условиях культивирования для поддержки роста клеток.
Кто использует FBS?
- Как академические, так и промышленные исследователи, а также ученые на производстве используют фетальную бычью сыворотку (FBS) в своих средах для культивирования клеток для исследований, включая биотехнологические исследования/производство, производство вакцин, клонирование и диагностику животных.
FBS продвигает надежную культуру
Фетальная телячья сыворотка (FBS) представляет собой наиболее надежную систему культивирования самого широкого спектра типов клеток, как клеточных линий, так и первичных клеток.
FBS является источником:
- Коэффициенты роста и прикрепления для ячеек
- Липиды
- Гормоны
- Питательные вещества и источники энергии, необходимые для роста
- носители
- . Белки связывания и переноса
Важно отметить:
- Обычно используется в концентрации 5–10 % в основной среде
- Состав FBS не определен и варьируется от партии к партии
Важные факторы, которые следует учитывать при выборе FBS
ФБС защищает клетки от:
- больших сдвигов рН
- протеаз
- токсических агентов
- сил сдвига
- агентов, которые обычно разрушают монослои адгезивных клеток (клеточный рост в 900 90 0006 этих агентах инактивируется)
- наличие качественной FBS обычно:
- Быстрое
- Постоянное и воспроизводимое
- Отсутствие нежелательных изменений в дифференцировке
- Не затрудняется внедрение вредных загрязняющих веществ
Основные проблемы исследователя, касающиеся FBS:
- Непрерывность подачи
- Последовательность лота-лот
- . больше и расширить свои знания об основах FBS?
Обратитесь к нашим подробным руководствам ниже, чтобы узнать больше о сборе FBS, приложениях и многом другом.
- Что такое эмбриональная бычья сыворотка?
- Что делает эмбриональная бычья сыворотка?
- Введение в сбор эмбриональной бычьей сыворотки
- Руководство по использованию эмбриональной бычьей сыворотки в производстве вакцин
Рыночные сценарии, влияющие на доступность и цену FBS
Фетальная телячья сыворотка (ФБС) является побочным продуктом мясной промышленности. Никто не может повлиять на количество доступных FBS. Засуха, высокие цены на корма и высокий спрос на говядину приводят к увеличению доступности FBS. Когда фермеры восстанавливают свои стада, на рынке остается меньше FBS. Результат? Цена и доступность FBS может быть трудно предсказать.
В этом видео рассказывается о динамике рынка FBS/sera, а также о том, как многие аспекты (например, климат) влияют на отрасль, особенно на цену.
Важные термины, которые следует знать при оценке FBS
Термины Определения 9CFR Тестирование на вирусы Панельное тестирование на вирусы в соответствии с Кодексом федеральных правил (CFR), раздел 9.6.3.17, часть 113.13 [113.13]. Выявляется флуоресцентными антителами. Биохимический и гормональный профиль Количественное определение биохимического и гормонального профиля (эстрадиол, инсулин, прогестерон, тестостерон и тироксин), который может влиять на культуру клеток. Статус ГЭКРС ГЭКРС (губчатая энцефалопатия крупного рогатого скота) – это болезнь, для которой МЭБ ( Всемирная организация по охране здоровья животных ) официально признала санитарный статус стран и зон. Регионы с незначительным риском губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (коровье бешенство) имеют меньший риск биобезопасности при импорте. Тестирование на вирусы EMA Панельное тестирование на вирусы в соответствии с Сводом федеральных правил (CFR), раздел 9, часть 113.53 (c) [113.46, 113.47]. Выявляется флуоресцентными антителами. Тестирование эндотоксинов Эндотоксин напрямую связан с качеством сбора и обработки сыворотки, чем выше уровень, тем больше интродукция грамотрицательных бактерий. Фильтрация Тройная (0,1 мкм) фильтрация: асептический процесс, который прошел валидацию для обеспечения того, чтобы все продукты соответствовали отраслевому стандарту уровня гарантии стерильности 10 -3 . Гемоглобин/гемоглобин Индикатор правильного и/или неправильного сбора и обработки крови и/или сыворотки. Микоплазма и дополнительное тестирование на микоплазму (H-окраска) Прямая культура и окраска Hoechst. Анализ показывает, что микоплазма не обнаружена. Подтверждение происхождения Мы используем запатентованную технологию sera фингерпринтинга для сывороток Gibco, чтобы подтвердить происхождение FBS и исключить вероятность подделки продукта. Узнать больше Осмоляльность Осмоляльность FBS, мера концентрации растворенных веществ, таких как соли и сахара, должна быть аналогична культуральной среде, чтобы избежать осмотического шока, который может повлиять на жизнеспособность клеток. Эффективность: стимулирование относительного роста (RGP) Анализ стимуляции роста измеряет способность каждой партии FBS поддерживать пролиферацию требовательных диплоидных фибробластов человека посредством нескольких пересевов. pH: относительная стимуляция pH Сыворотка действует как буфер в системе культивирования клеток; рН тестируется для обеспечения точного качества и производительности клеточной культуры. Общий белок FBS богат различными белками, которые могут воздействовать на культивируемые клетки; общий белок в сыворотке измеряют с помощью биохимического анализа сыворотки. Прослеживаемость Полная прослеживаемость до исходного источника. Сертификат прослеживаемости ISIA. Узнать больше Стандартные определения крупного рогатого скота
Термины Определения Сыворотка Сыворотка представляет собой жидкую фракцию свернувшейся крови. Он обеднен клетками, фибрином и факторами свертывания крови. Сыворотка отличается от плазмы тем, что антикоагулянт никогда не добавляется в кровь после забора у животного. Сыворотку готовят центрифугированием до отделения сгустка и оставшихся клеток крови от жидкой фазы. Затем сыворотку удаляют и хранят в замороженном виде до дальнейшей обработки. Эмбриональная телячья сыворотка Полуфабрикат фетальная бычья сыворотка Эмбриональную бычью сыворотку (ФБС) получают, как описано выше, из крови плодов здоровых самок крупного рогатого скота до и/или после родов. -убойный ветеринарный осмотр. Его собирают на бойнях, инспектируемых компетентным органом страны происхождения. Кровь плода собирают в асептических условиях с помощью пункции сердца, что снижает риск микробного загрязнения и образования эндотоксинов. Сбор происходит в зоне бойни, специально отведенной для этой цели, чтобы свести к минимуму риск загрязнения другими жидкостями. Специальная фетальная бычья сыворотка Это полуфабрикат FBS или стерильно отфильтрованный FBS, подвергнутый одному или нескольким процессам модификации. Примерами являются диализированные, очищенные от угля, ультранизкие IgG, ES-клетки, MSC и истощенные экзосомами. Сыворотка новорожденных телят Сыворотка новорожденных телят (NBCS) определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здоровых, забитых телят в возрасте до 20 дней, признанных пригодными для употребления в пищу человеком путем предварительного и/или посмертный осмотр. Его собирают на бойнях, инспектируемых компетентным органом страны происхождения. Не допускается удаление или добавление (включая консерванты). Донорская телячья сыворотка (также известная как донорская телячья сыворотка) Донорская телячья сыворотка (DBS) определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здорового крупного рогатого скота в возрасте 12 месяцев или старше из контролируемых стад доноров, чьи состояние здоровья подтверждается регулярным осмотром компетентными, уполномоченными законом ветеринарами. Бычья сыворотка (также известная как сыворотка взрослого крупного рогатого скота или теленка) Бычья сыворотка определяется как жидкая фракция свернувшейся крови, полученная от здорового убитого крупного рогатого скота в возрасте 12 месяцев и старше, признанная пригодной для человека потребление при пред- и/или послеубойном осмотре. Его собирают на бойнях, инспектируемых компетентным органом страны происхождения. Истории клиентов, использующих эмбриональную бычью сыворотку
Посмотрите видео: Gibco FBS — преимущества использования нашей сыворотки для ваших исследований
Gibco Cell Culture Basics
Клеточная культура имеет решающее значение для вашего успеха, поэтому убедитесь, что все в вашей лаборатории используют лучшие процедуры и продукты для постоянно получать ожидаемые результаты. Основы клеточных культур — это введение в клеточные культуры, охватывающее такие темы, как организация лаборатории, безопасность и асептическая техника.
Узнать больше
Получите свой Gibco FBS сегодня!
Выберите правильный FBS для ваших конкретных потребностей в культуре клеток — от фундаментальных исследований до специальных анализов. Нужны ли вам сыворотки с наименьшим вирусным риском, с самым низким уровнем эндотоксина или FBS, сертифицированные для специальных применений и анализов, продукты Gibco предлагают вам лучшее соотношение цены и качества.
Купить сейчас
Мы здесь, чтобы помочь
Получите рекомендации по распространенным проблемам или свяжитесь напрямую с опытным ученым для получения технической помощи, связанной с приложениями, оборудованием и общим использованием продукта.
Свяжитесь с нами
Справочник по продуктам One Cell Bio
Мы упростили наше портфолио, чтобы показать вам, как наши самые популярные продукты и услуги используются в качестве отдельных инструментов или интегрированных системных решений. Это руководство предназначено для того, чтобы ускорить ваш поиск подходящего продукта для клеточной биологии и подробно рассказать о том, как мы можем помочь ускорить исследования.
Подробнее
Руководство по выбору контрольных и блокирующих реагентов.
Экспериментальные протоколы с использованием иммунотехнологий часто можно улучшить за счет оптимального использования блокирующих реагентов, разбавителей и контролей. Прочтите дополнительную информацию о том, как выбрать подходящие разбавители и этапы блокировки для предотвращения нежелательного фона, а также о том, как экспериментальные элементы управления могут помочь определить источник нецелевого сигнала.
Оптимизируйте свои экспериментальные протоколы с помощью контрольных, разбавляющих и блокирующих реагентов.
При разработке иммунотехнологии важно учитывать анализ результатов. Добавление правильных блокирующих реагентов и экспериментальных контролей может улучшить качество анализа и его интерпретацию. Включение положительных и отрицательных контролей важно при создании данных для публикации.
Используйте это руководство, чтобы узнать больше о выборе соответствующих контрольных, разбавляющих и блокирующих реагентов в ряде иммунометодов для:
- Уменьшить фон
- Устранение неполадок нецелевых сигналов
- Облегчить анализ.
Проточная цитометрия
Проблемы Решение Указанный продукт Фон антител, связывающих Fc-рецепторы Блокирует Fc-рецепторы. Нормальная сыворотка хозяина меченого антитела Используйте F(abʹ) 2 формат вторичного антитела, чтобы избежать захвата Fc-рецепторами. F(abʹ) 2 вторичные
антителаПодтверждение того, что первичное связывание антител обусловлено антигенной специфичностью Используйте изотипический отрицательный контроль (неспецифический IgG того же вида, что и первичное антитело), чтобы продемонстрировать специфическое связывание первичного антитела. Очищенные белки ChromPure™ Подтверждение того, что вторичное антитело не влияет на нецелевой сигнал Используйте изотипический отрицательный контроль (конъюгированный неспецифический IgG того же вида, что и вторичное антитело), чтобы продемонстрировать специфическое связывание вторичного антитела. Очищенные белки ChromPure™ Недостаток времени и отсутствие непосредственно конъюгированного первичного Fab пометьте ваши первичные антитела перед инкубацией с образцом. FabuLight™ Вестерн-блоттинг
Проблемы Решение Указанный продукт Фон (неспецифический сигнал, перекрывающий интересующие полосы) Используйте соответствующий блокирующий реагент для блокирования мембраны перед инкубацией с первичным антителом. Нормальная сыворотка (5% об./об.) вида-хозяина меченого антитела или БСА (5% об./об.) (без IgG и без протеазы) Избегайте использования молока или БСА, если используются первичные антитела, полученные от коз, лошадей или овец. Бычий IgG может взаимодействовать с антителом за счет гомологичных эпитопов близкородственных видов. Нормальная сыворотка (5% об./об.) вида-хозяина меченого антитела Интерференция из-за сниженного количества иммунопреципитирующих (IP) антител при обнаружении белков 50 или 25 кДа Чтобы избежать обнаружения тяжелых цепей IP-антител с молекулярной массой 50 кДа, проведите блот-зонд с конъюгированными специфическими антителами против легких цепей. Антитела против легких цепей Чтобы избежать обнаружения легких цепей IP-антитела с молекулярной массой 25 кДа, проведите блот-зонд с конъюгированным анти-IgG, Fc-фрагментом, специфичным после блокирования моновалентным Fab-фрагментом анти-Fc (FabuLight™). Анти-Fc-специфические антитела Фрагменты Fab (FabuLight™)
Для подтверждения активности репортерного фермента добавьте небольшой образец конъюгированного вторичного фермента непосредственно к субстрату и наблюдайте за ожидаемой реакцией.
ELISA
Проблемы Решение Указанный продукт Фон Используйте соответствующий объем блокирующего реагента, чтобы полностью заблокировать лунки перед инкубацией с первичным антителом. Нормальная сыворотка (5% об./об.) вида-хозяина меченого антитела или БСА (5% об./об.) (без IgG и без протеазы) Нет сигнала Используйте положительный контроль, чтобы продемонстрировать активность меченого вторичного антитела, покройте изотипом первичного антитела и непосредственно определите с помощью вторичного антитела Очищенные белки ChromPure™ Меры предосторожности при блокировании бычьим сывороточным альбумином (БСА) или молоком:
Бычий сывороточный альбумин (БСА) и сухое молоко иногда содержат бычий IgG. За исключением Bovine Anti-Goat IgG компании Jackson ImmunoResearch, многие вторичные антитела, такие как Anti-Bovine, Anti-Goat и Anti-Sheep, будут реагировать с бычьим IgG. Следовательно, использование БСА или сухого молока для блокирования или разбавления может значительно увеличить фон и/или снизить титр антител. Для блокировки используйте обычную сыворотку (5% об./об.) вида-хозяина меченого вторичного антитела.
Дополнительная информация о БСА, не содержащем IgG и протеаз, от Jackson ImmunoResearch.
IHC
Проблемы Решение Указанный продукт Подтверждение того, что первичное связывание антител обусловлено антигенной специфичностью Используйте изотипический отрицательный контроль (неспецифический IgG того же вида, что и первичное антитело), чтобы продемонстрировать специфическое связывание первичного антитела. Протеины ChromPure™ Фон (общий) Блокирует эндогенные сайты связывания, которые могут взаимодействовать с экспериментальными реагентами. Нормальная сыворотка хозяина меченого антитела. Развести антитела в буфере без белков-носителей. Отцентрифугировать рабочий раствор для удаления агрегатов. Правильный разбавитель и подготовка, т.е. PBS/Твин 20 Фон (распознавание гомологичного Ig) Используйте перекрестно-адсорбированные вторичные антитела с минимальной перекрестной реактивностью к анализируемым видам клеток или тканей. Вторичные антитела Min X Блокируют эндогенные иммуноглобулины. Фрагменты Fab Множественное мечение первичных антител
от одного и того же вида хозяина (например, мышь на мыши)Используйте Fab-фрагменты в предлагаемых протоколах для выполнения множественной маркировки (см. онлайн). Fab-фрагменты Иммунологическая метка первичного антитела перед инкубацией. FabuLight™ Эндогенные ферменты Инактивировать эндогенные пероксидазы перекисью водорода. Перекись водорода Инактивация эндогенных фосфатаз левамизолом. Левамизол Эндогенный биотин Блокирует эндогенный биотин. Инкубируйте со стрептавидином, а затем со свободным биотином. Ионные или гидрофобные
взаимодействияВключите моющее средство в буферы, оптимизируйте концентрацию соли и pH. Твин 20 и/или Тритон Х-100 Иммунореагенты
Компания Jackson ImmunoResearch предлагает широкий спектр иммунореагентов, предназначенных для повышения эффективности и простоты анализа. Приведенные ниже иммунореагенты выделены в этом руководстве. Посетите наш веб-сайт или ознакомьтесь с нашим каталогом для получения дополнительной информации о широком ассортименте вторичных антител и конъюгатов, производимых компанией Jackson ImmunoResearch.
- Нормальные сыворотки
- ChromPure™ Очищенные белки из нормальных сывороток
- Моновалентные Fab-фрагменты аффинно-очищенных антител
- Бычий сывороточный альбумин, не содержащий IgG и протеазы
Если вам требуется дополнительная поддержка при выборе антител или у вас возникли проблемы с экспериментом, свяжитесь с нашей технической командой по адресу tech@jacksonimmuno. com.
Нормальные сыворотки
Нормальные сыворотки получают от неиммунизированных животных и, следовательно, не обнаруживают какой-либо специфический антиген. Обычная сыворотка, разбавленная до 5% (об./об.) в PBS (или аналогичном буфере), настоятельно рекомендуется в качестве блокирующего агента для снижения фона от неспецифического связывания с консервативной последовательностью и/или Fc-рецептором. Наилучшие результаты получаются с разбавленной нормальной сывороткой того же хозяина, что и меченое антитело, используемой в качестве отдельного этапа инкубации перед добавлением первичного антитела.
Просмотр нормальных сывороток
Очищенные белки ChromPure™ из нормальных сывороток
Белки ChromPure™ в основном используются в качестве экспериментальных контролей первичных или вторичных антител. Их также можно использовать в качестве блокирующих реагентов для Вестерн-блоттинга, IHC и IF. Белки ChromPure™ получают из сыворотки неиммунизированных животных и не распознают какие-либо известные антигены. Их готовят с использованием различных хроматографических методов, чтобы получить материал без загрязняющих молекул вплоть до концентрации 20 мг/мл, что делает их идеальными для использования в качестве экспериментальных контролей для наиболее чувствительных анализов. Белки ChromPure™ доступны в различных форматов для многих видов, включая цельный иммуноглобулин, F(ab’) 2 и Fab-фрагменты.
Также доступны человеческий IgM, сывороточный IgA и другие белки. Компания Jackson ImmunoResearch предлагает широкий спектр конъюгатов для этой линейки продуктов, в том числе ряд флуоресцентных красителей и репортерных ферментов, позволяющих изолировать сигнал, полученный в результате неспецифических взаимодействий.
Просмотреть очищенные белки ChromPure™
Моновалентные Fab-фрагменты
Affinity-Purified AntibodiesFab-фрагменты можно использовать для блокирования эндогенных иммуноглобулинов с целью уменьшения фонового окрашивания и двойного мечения первичных антител одного и того же вида-хозяина. В следующем примере показано, как можно использовать Fab-фрагменты для блокирования эндогенных иммуноглобулинов при использовании мышиных первичных антител на ткани мыши.
Просмотреть фрагменты моновалентных Fab
Бычий сывороточный альбумин, не содержащий IgG и протеаз
Бычий сывороточный альбумин (БСА) широко используется в качестве белка-носителя для разбавления антител и в качестве общего блокатора белка в иммуноанализах и протоколах иммунодетекции. Если BSA является желательным разбавителем или блокирующим реагентом для вашего анализа, важно использовать BSA, подходящий для этой цели.
Большинство продуктов BSA, в том числе те, которые продаются как не содержащие обнаруживаемых IgG, загрязнены низкими уровнями бычьего IgG.
Бычьи IgG имеют много общих эпитопов с козьими, овечьими и лошадиными IgG и могут стать мишенью для вторичных антител, направленных против этих видов (исключение составляют бычьи антикозьи IgG). Это может произойти и с другими антителами, которые перекрестно реагируют с бычьим IgG. Взаимодействие может привести к потере активности антител и/или увеличению фона. Фон может возникать из-за липких, растворимых иммунных комплексов или из-за неспецифического связывания контаминирующего бычьего IgG, привлекающего перекрестно реагирующие меченые вторичные антитела.
Бычий сывороточный альбумин Jackson ImmunoResearch не содержит IgG и протеазы. Он не содержит загрязняющих IgG, что устраняет общие проблемы иммуноанализа, связанные со многими коммерческими препаратами БСА высокой чистоты. БСА без IgG поставляется в виде чистого белка, высушенного вымораживанием из деионизированной воды, в упаковках по 10 г, 50 г и 250 г.
Просмотр Бычий сывороточный альбумин
Ссылки :- Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3-е изд. Гирлянда Пресс. Лондон.
- Калюжный А. (2016) Иммуногистохимия – основные элементы и не только. Springer International Publishing Швейцария.
- Манн, М. и Дженсен, О. Н. (2003) Протеомный анализ посттрансляционных модификаций. Нац. Биотехнолог. 21, 255-261.
Подробнее: Сделайте больше: Множественное мечение с использованием вторичных антител Цельные аффинно-очищенные антитела IgG Прямой и непрямой вестерн-блоттинг Вторичные антитела, специфичные к легкой цепи Выбор вторичного антитела Вторичные антитела для обнаружения VHH Рейтинг каждого штата по футбольным командам колледжей | Новости, результаты, основные моменты, статистика и слухи
Рейтинг каждого штата по футбольным командам колледжей
0 из 42
Doug McSchooler/Associated Press
В студенческом футболе не все штаты считаются равными.
В этот очень патриотический праздник, День Памяти, мы решили отдать дань уважения одному из самых любимых видов спорта в нашей стране… а также разжечь здоровую дискуссию о том, какой штат лучше другого в сети.
Есть 128 школ, которые играют на уровне Football Bowl Subdivision, и хотя опросы 25 лучших школ и результаты чаш могут рассказать нам о том, как отдельные школы оценивают друг друга, они не принимают во внимание весь объем работы штата. Вот где мы входим.
Используя результаты их программ FBS за 2013 год в качестве барометра, мы взяли на себя инициативу ранжировать штаты на основе их футбольного мастерства. Где находится ваше содружество или территория? Проверьте это, а затем покажите свою государственную гордость в комментариях.
Штаты без рейтинга
1 из 42
USA TODAY Sports
Только в 41 штате действует программа FBS, то есть девять штатов не соответствуют требованиям этого рейтинга. В эту группу (Аляска, Делавэр, Мэн, Монтана, Нью-Гэмпшир, Северная Дакота, Род-Айленд, Южная Дакота, Вермонт) действительно входят довольно солидные команды FCS, такие как Делавэр, Мэн и трехкратный действующий национальный чемпион штата Северная Дакота.
NDSU, который потерял своего тренера (Крейга Бола) в Вайоминге в межсезонье, рассматривает возможность перехода в FBS, поэтому, если это произойдет, штат Peace Garden может вскоре присоединиться к официальному рейтингу. На данный момент тем, кто в Северной Дакоте, придется довольствоваться победами над командами FBS в каждом из последних четырех сезонов, а также шансом на пятый скальп FBS, когда Bison откроют кампанию 2014 года в штате Айова.
41. Нью-Мексико
2 из 42
Отто Китсингер/Associated Press
Команды FBS: Нью-Мексико, штат Нью-Мексико
Суммарный рекорд 2013 года: 5-19
Страна чар в последнее время очаровала только противников, поскольку ни Нью-Мексико, ни штат Нью-Мексико не закончили с рекордом побед с 2007 года.
Нью-Мексико уже несколько лет является половой тряпкой в Маунтин-Уэст, несмотря на одну из самых продуктивных беговых игр в стране, которую тренер Боб Дэви использовал, чтобы попытаться противостоять нехватке плеймейкеров в своей команде. Ситуация намного хуже в NMSU, где Эгги провели прошлый год как независимые (они присоединятся к Солнечному поясу в 2014 году) и завершили прошлый сезон, зафиксировав серию из 24 поражений от соперников из FBS.
40. Вайоминг
3 из 42
Энди Карпенан/Associated Press
Команда FBS: Wyoming
2013 Запись: 5-7-70030
. в стране есть только одна программа FBS, и жители Вайоминга любят своих «Ковбоев», независимо от того, как они поживают или какое странное сочетание желтого и коричневого цвета команда носит на поле. - . Футбольная команда штата Алоха, которая с тех пор, как в 2007 году разгромила BCS (а затем проиграла Джорджии в Sugar Bowl), провела всего один победный сезон. Rainbow Warriors достигли дна в 2013 году, набрав 1-11 и нуждаясь в победе над Army в финале, чтобы избежать своего первого безвыигрышного рекорда с 19.98.
Долгое время сюда приезжали команды силовых конференций, чтобы насладиться атмосферой в регулярном сезоне, не говоря уже о возможности провести 13-ю игру в качестве компенсации за поездку. Гавайи примут Вашингтон и штат Орегон на outset in 2014. The Warriors last beat a power conference opponent in 2011.
Это был период взлетов и падений для Вайоминга, который за последние два года был ниже 0,500 и в этом сезоне должен поехать в штаты Мичиган и Орегон под руководством нового тренера Крейга Бола.
39. Гавайи
4 из 42
Кевин С. Кокс/Гетти Изображения
Команды FBS:
2013 Запись: 1-1113. FOR FOR
38. Connecticut
5 of 42
Jessica Hill/Associated Press
FBS teams: Connecticut
Рекорд 2013 года: 3-9
С момента перехода из FCS в 2000 году это был в основном успешный заезд для Коннектикута, завершившийся появлением Fiesta Bowl после сезона 2010 года. Но с тех пор у хаски наблюдается тенденция к снижению: три кампании подряд ниже 0,500, включая прошлогоднюю попытку, которая началась с девяти поражений подряд.
С новым тренером (Боб Диако), разбавленной лигой (американской) и расписанием, в котором участвуют шесть команд, побивших рекорды в прошлом сезоне, у UConn есть шанс продвинуться вверх по этому списку. На данный момент штат Мускатный орех является худшим на Восточном побережье в FBS.
37. Колорадо
6 из 42
Джек Демпси/Associated Press
Команда FBS: Air Force, Colorado, Colorado State
2013. Запись. of the Rocky Mountains есть три команды, которые находятся на межштатной автомагистрали 25 или рядом с ней, каждая со своей собственной фанатской базой и футбольной историей. Хотя штат Колорадо является самым богатым, только штат Колорадо добился каких-либо успехов за последние два сезона.
CSU помог стильно начать сезон чаши 2013 года с безумного возвращения, чтобы победить штат Вашингтон в чаше Нью-Мексико, в то время как ВВС и Колорадо могли только сидеть сложа руки и наблюдать. У военной академии был худший сезон в истории программы, 2-10, в то время как Колорадо закончил 4-8 в своей восьмой проигрышной кампании подряд.
36. Массачусетс
7 из 42
Mary Schwalm/Associated Press
Команды FBS: Boston College, Massachusetts
Общий рекорд за 2013 год: 8-17
Хотя в 2012 году его контингент FBS удвоился с продвижением штата Массачусетс, это увеличение на самом деле понизило репутацию штата из-за того, насколько плохими были минитмены. UMass прошел 1-11 за оба года и движется к независимой неопределенности после объявления об уходе из Среднеамериканской конференции в 2015 году. и 2013 год были лучшими в этом отрезке.
35. Айдахо
8 из 42
Otto Kitsinger III/Getty Images
Команды FBS: Boise State, IDAHO
2013 года. из худших для земли картофеля за последние два десятилетия, и на этот раз это было не только из-за горестного Айдахо.
Результат штата Бойсе со счетом 8-5 в 2013 году впервые с 2005 года свидетельствует о том, что «Бронкос» не удалось выиграть с двузначным числом. Для Vandals это было почти то же самое, то есть плохие результаты, поскольку школа имела всего четыре победных рекорда с момента воссоединения с FBS в 19 году.96 пошел 1-11 как независимый.
34. Арканзас
9 из 42
USA Today Sports
FBS Teams: Arkansas, Arkansas State
2013. в противоположных направлениях, при этом Арканзас из Комиссии по ценным бумагам и биржам уступает позиции многолетнему претенденту на пояс Солнца (и тренеру по силовой программе) штату Арканзас.
Razorbacks заканчивают сезон 3-9, который включал в себя отметку 0-8 в SEC, впервые с тех пор, как они присоединились к лиге в 19-м сезоне. 90-е. Тем не менее, штат Арканзас в прошлом году был со счетом 8-5 и выиграл 28 игр (включая пару побед в чаше) за последние три сезона, несмотря на то, что каждый год у него был новый тренер.
К сожалению, эти школы никогда не встречались в игре FBS, и никаких будущих матчей не запланировано, поэтому превосходство Natural State должно оцениваться субъективно, а не на табло.
33. Невада
10 из 42
USA TODAY Sports
Команды FBS: Невада, UNLV
Общий рекорд за 2013 год: 11-14
В прошлом году команды FBS штата поменялись ролями, поскольку именно UNLV нес знамя (и трофей соперничества школ), а не Неваду.
Сезон 2013 года ознаменовался первым появлением UNLV в игре в чашу с 2000 года, но Runnin ‘Rebels должны будут смаковать все теплые воспоминания, связанные с этим сокрушительным поражением от Северного Техаса в Heart of Dallas Bowl, поскольку программа была запрещена в постсезонье. играть в 2014 году из-за низкого балла APR (Academic Progress Rate). Тем не менее, Невада имеет право на участие, и волчья стая будет стремиться вернуться в чашу после того, как в прошлом сезоне рекорд 4-8 преодолел восемь победных сезонов подряд.
32. New Jersey
11 of 42
USA TODAY Sports
FBS teams: Rutgers
2013 record: 6-7
Rutgers made its one and only year in the American (ранее Big East) скучным, поскольку Scarlet Knights начали со счетом 4: 1 только для того, чтобы выиграть в последний день регулярного сезона, чтобы попасть в игру в чашу. Затем их ловко обыграл Нотр-Дам в Чаше с полосками.
Этой осенью «Рутгерс» возглавит «большую десятку» и принесет с собой восемь победных сезонов за последние девять, а также рекордный результат 13-31 против своих будущих соперников по конференции. Это включает в себя отметку 2-22 против Penn State, которую «Рыцари» в последний раз обыграли в 1988, против которых они откроют домашнюю игру «Большой десятки» 13 сентября.
Общий рекорд за 2013 год: 18-20
Несмотря на наличие трех программ FBS — более чем в 30 других штатах — Нью-Йорк никогда не считался рассадником студенческого футбола. Не помогает и то, что все три команды находятся в северной части штата Нью-Йорк, и только одна (армия) считается поблизости от населенного пункта и медиа-мекки Нью-Йорка.
Но в прошлом году в Нью-Йорке было две команды по боулингу, в пятый раз за всю историю, и в первый раз в партнерстве с «Сиракузами» участвовали «Баффало» вместо «Арми». Баффало проиграл в своей игре, в то время как Сиракузы обыграли Миннесоту и выиграли Техасский кубок, а Арми остался дома после третьего сезона подряд из трех или менее побед.
30. Западная Вирджиния
13 из 42
Orlin Wagner/Associated Press
Команды FBS: Marshall, West Virginia
Общий рекорд 2013 года: 14-12
Чуть более 200 миль разделяет Маршалл и Западную Вирджинию вдоль межштатной автомагистрали 79, однако школы встречались только 12 раз, включая первое собрание в 1911 году. включая рекордную игру 69-34 в 2012 году, но, похоже, программа Маршалла движется в правильном направлении.
The Thundering Herd играли в титульном матче конференции USA в прошлом сезоне, и позади недооцененного квотербека Rakeem Cato они закончили с 10 победами, включая победу над Maryland в Military Bowl. В 2013 году Западная Вирджиния пошла со счетом 4–8, завершив серию «Альпинистов» из 11 сезонов подряд.
В школах не запланированы собрания на будущее.
29. Канзас
14 из 42
USA Today Sports
FBS Teams: Канзас, штат Канзас
2013. год в 2013 году, начиная с того, что штат Канзас проиграл дома школе FCS (хотя это оказалось менее досадным, когда штат Северная Дакота выиграл третий подряд титул FCS), но затем был в основном положительным для соперников из Большой 12.
K-State финишировал со счетом 8-5, несмотря на старт 2-4, и задушил Мичиган в Buffalo Wild Wings Bowl. И хотя «Канзас» пошел только со счетом 3-9, это соответствует его лучшему результату за последние четыре года, а также включает в себя победы, которые одержали победу как у соперников из «Большой 12», так и у команд FBS соответственно.
28. Иллинойс
15 из 42
Uncredited/Associated Press
Команды FBS: Иллинойс, Северный Иллинойс, Северо-Западный
Общий отчет за 2013 год: 21-17
В пятом по численности населения штате с населением более 12 миллионов человек все три программы сосредоточены в северо-восточной части Земли Линкольна, чтобы приспособиться к местам проживания большинства людей. Тем не менее, это маленький парень из трех, по крайней мере, с точки зрения национального признания, который доминировал в штате в последнее время.
Северный Иллинойс шел 46-10 за последние четыре года, отправив двух своих тренеров на программы силовых конференций, дойдя до игры в чашу BCS в 2012 году и сыграв 2-0 в прошлом сезоне против школ из Большой десятки. В 2013 году у Иллинойса и Северо-Запада было только две победы в Большой десятке, одна из которых была победой Северо-Запада над Fighting Illini в конце сезона.
27. Айова
16 из 42
Nati Harnik/Associated Press
Команда FBS: IOWA, штат Айова
2013. на Среднем Западе такие штаты, как Айова, обычно не попадают в заголовки, если только они не попадают в одну крайность или в другую. Это точно описывает влияние Айовы и штата Айова на ландшафт FBS в прошлом сезоне.
Айова пошла со счетом 8-5 и дошла до игры в новогодний боул, проиграв LSU в Outback Bowl, но ничего особенного в сезоне Hawkeyes не заслуживало внимания. То же самое касается ISU, которая, вероятно, была немного лучше, чем ее 3-9.рекорд показал бы, но это все же ознаменовало четвертый подряд сезон ниже 0,500 для Cyclones.
26. Вирджиния
17 из 42
USA Today Sports
FBS Teams: Старый Доминион, Вирджиния, Вирджиния Tech
2013 2013. в 2013 году отмечен звездочкой, поскольку показатель Old Dominion 8–4 во время его первого сезона перехода из FCS включал всего пять игр (и рекорд 1–4) против противников FBS. В этом году «Монархам» предстоит столкнуться с 11 командами FBS, включая полный список участников Conference USA.
Что касается давних членов FBS, Virginia Tech показала 8-5, но проиграла Калифорнийскому университету в Лос-Анджелесе в Sun Bowl, завершив второй подряд некачественный (для Hokies) сезон, в то время как рекорд Вирджинии 2-10, включая 0 -8 Подсказано в ACC, был худшим результатом Cavaliers с 1981 года.
25. Kentucky
18 из 42
Энди Лионс/Getty Images
FBS Teams: KENTUCKY, LOURISY KENTUCKY, LOURISY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY, LOUSLYCYY,
FBS.
2013 г. общая запись: 22-15
Вместо штата Блюграсс Кентукки можно было бы также назвать переходным штатом из-за всех движений и изменений, происходящих в его трех программах FBS.
Луисвилл и Западный Кентукки переезжают на новые конференции в 2014 году, при этом Cardinals присоединяются к ACC после финиша со счетом 12: 1 (что привело только к второму месту) в American, а WKU переходит из Sun Belt (где 8- 4 записи не сделали Hilltoppers достойными чаши) на конференции USA.
Затем есть Кентукки, который проиграл обоим соперникам из штата и пошел со счетом 2-10 второй сезон подряд, хотя «Уайлдкэтс», похоже, движется в правильном направлении под руководством тренера Марка Ступса.
24. Индиана
19 из 42
ELSA/Getty Images
FBS Teams: Ball State, Indiana, Notre Dame, Purdue
2013 2013 года. Штат Индиана не так известен в студенческом футболе, как своими программами с обручами для колледжей (несмотря на прошлый баскетбольный сезон), но у него все же есть несколько солидных программ. Только не всегда одновременно.
В 2013 году это были Ball State и Notre Dame, которые прошли со счетом 10-3 и 9-4 соответственно. «Кардиналы» стабильно растут с 2009 года со счетом 2-10, но могут быть обречены на падение из-за исхода талантов и исторической тенденции, которая показывает, что у них был аналогичный пятилетний рост с 2004 по 2008 год.
Нотр-Дам, хотя и не был на картинке BCS после достижения титульного матча после сезона 2012 года, все же провел свой четвертый год подряд с победным рекордом. Это может показаться не таким уж впечатляющим для такой легендарной программы, но с ирландцами такого не случалось с конца 19-го века.90-е.
Затем была Индиана, которая со счетом 5-7 не смогла попасть в игру в чашу шестой год подряд, и Purdue, которая со счетом 1-11 была, возможно, худшей командой в главном студенческом футболе в 2013 году.
23. Теннесси
20 из 42
Doug Pensinger/Getty Images
Команды FBS: Memphis, Middle Tennesse, Tennessee, Vanderbilt
. Чтобы этого не показать, в Теннесси есть две совершенно разные пары команд: SEC и не-SEC.
Теннесси и Вандербильт показывают 42-9 за все время против Мемфиса и Среднего Теннесси, которые играют в Америке и Конференции США соответственно. Но единственной игрой, в которой участвовали два выпускника Добровольного штата, было ежегодное столкновение SEC между Теннесси и Вандербильтом, в котором Коммодоры выиграли, чтобы Теннесси не попал в миску третий год подряд.
Вандербильт со счетом 9-4 получил лучшую оценку в штате, победив Хьюстон в турнире BBVA Compass Bowl. Мидл Теннесси был единственным другим квалификационным игроком в чашу, проиграв флоту в чаше вооруженных сил и финишировав со счетом 8–5. Теннесси был 5-7, а переход Мемфиса из C-USA в American привел к 3-9.отметка и шестой подряд проигрышный рекорд.
22. Georgia
21 из 42
Кевин С. Кокс/Getty Images
FBS Teams: Georgia, Georgia Southern, Georgia State, Georgia Thatic
Количество членов FBS в Джорджии удвоилось за последние два года: штат Джорджия вышел из FCS в прошлом сезоне, а Южная Джорджия собирается сделать это этой осенью. Из-за этих дополнений коллективный послужной список штата (и, в некоторой степени, его общая репутация) сильно пострадал.
Даже без отметки штата Джорджия 0-12 (или рекорда 7-4, который Джорджия Саутерн установила в последний год игры в FCS, что ниже, чем в предыдущие сезоны), этот год не был впечатляющим для штата. Травмы и сомнительная защита привели к тому, что Джорджия набрала 8–5 баллов, включая поражение от Небраски в Gator Bowl, в то время как Технологический институт Джорджии пошел со счетом 7–6 и проиграл Оле Мисс в Music City Bowl.
21. Пенсильвания
22 из 42
Патрик Смит/Getty Images
Команды FBS: Penn State, Pittsburgh, Temple
Общий отчет за 2013 г. : 16-21
С командами, представляющими восточную (Темпл), центральную (Пенсильвания) и западную (Питтсбург) части штата , Пенсильвания обезопасила всех своих жителей. Предоставление им чего-то экстраординарного, чтобы подбодрить, сделало бы это еще лучше.
Хотя в прошлом году в штате было две команды-победителя, ни одна из них не одержала более семи побед. И в то время как Penn State имеет лучшую оценку 7-5, Nittany Lions находятся в середине запрета на чашу, который ограничивает уровень, на котором их сезоны можно считать успешными. Питт пошел 7-6, что лишь немного лучше, чем 6-7 оценок в предыдущие два года, в то время как Темпл потерпел неудачу со счетом 2-10 и имеет только четыре победных сезона с 19-го.90.
20. Мэриленд
23 из 42
USA Today Sports
Команды FBS: Maryland, военно-морской флот
. в Аннаполисе, факт, который, вероятно, не был бы известен среднестатистическому фанату американского футбола. Похоже, что Мэриленд тоже не знал об этом, поскольку школы играли только дважды с середины 1960-х, а не с 2010 года. Маршалл в военной чаше. Terrapins пошли 7-6 и направляются в большую десятку после десятилетий в ACC.
Navy, давний независимый клуб, которому пришлось заранее оформлять приглашения на кубок, но который переедет в американский в 2015 году, пошел со счетом 9: 4 и обыграл Средний Теннесси в кубке вооруженных сил, став 10-м победным рекордом за последние 11 лет.
19. Северная Каролина
24 из 42
USA Today Sports
FBS Teams: Appalachian State, Duke, Восточная Каролина, Северная Каролина, Северная Каролина. : 38-38
Участники FBS из Северной Каролины соответствуют всем стереотипам команды в 2013 году: неожиданный победитель, поздний расцвет, недооцененная сила и неудачник. И в эту эпоху постоянной реорганизации, переходный период, когда Аппалачский штат выходит из FCS этой осенью.
Дюк был лучшим из всех, выиграв прибрежный дивизион ACC и одержав 10 побед после 12 побед за предыдущие три года. Следующей была Северная Каролина, которая пошла со счетом 7-6, но начала сезон 1-5 и обыграла Цинциннати в Белк Боул.
Восточная Каролина, сыгравшая со счетом 10-3 в своем последнем сезоне игры на Конференции США перед тем, как присоединиться к Американке, одержала победу как над UNC, так и над штатом Северная Каролина, но была одной из самых малоизвестных команд в стране.
NC State и Wake Forest со счетом 4-8 и 3-9 соответственно, в сумме 2-14 в ACC, но каждая из них сумела обыграть команду, дошедшую до игры в чашу. А Аппалачский штат, бывший национальный чемпион FCS, был 4-8 на более низком уровне.
18. Миннесота
25 из 42
ELSA/Getty Images
Команды FBS: Миннесота
2013 Запись: 8-5
. Земля 10 000 озер, лишенная успеха в студенческом футболе, стала лучшим результатом для Миннесоты с 2003 года. и штат Мичиган в игре Большой десятки, а также Сиракузы в Техасской чаше.
17. Миссисипи
26 из 42
USA Today Sports
FBS Teams: Mississippi, штат Миссисиппи, Southern Mississippi
9.202.2019. и штат Миссисипи провел еще одну пару средних сезонов в 2013 году, оба выиграли ровно столько игр в лиге (с MSU, нокаутировавшим Rebels в овертайме), чтобы иметь право на участие в чаше. Затем они оба выиграли в этих чашах, чтобы закончить на высоких нотах и дать возможность для импульса в 2014 году.
Южный Миссисипи добился собственной победы в конце прошлого года, но это было в совершенно другой сфере. «Золотые орлы» проиграли 23 матча подряд, прежде чем разгромить UAB в своем финале, и теперь они будут стремиться вернуться к своим победным путям, которые привели к 18 подряд плюс 0,500 сезонов с 1994 по 2012 год.
16. Юта
27 из 42
George Frey/Getty Images
Команды FBS: BYU, Юта, штат Юта
Общая запись за 2013 год: 22-17
Один из штатов, где все программы FBS, как правило, регулярно играют друг с другом, Юта. и новая школа конференции власти, которая еще не нашла свою опору на этой более высокой ступени.
Юта Стэйт пережила смену тренера и потерю в середине сезона захватывающего квотербека, который пошел со счетом 9-5, дошел до титульного матча Маунтин-Уэст, а затем выбил Северный Иллинойс в Кубке Пуансеттии. Эгги входят в число главных претендентов из-за пределов Группы пяти на место в плей-офф студенческого футбола, которое будет разыграно после сезона 2014 года.
BYU, который на третьем году своей независимости показал 8-5 баллов, одержал несколько хороших побед над такими громкими именами, как Технологический институт Джорджии и Техас, и проиграл Нотр-Даму, Вирджинии и Висконсину. Но с новостями о том, что ACC и SEC не будут рассматривать Cougars как часть своего плана «должны играть с мощным противником, не относящимся к конференции», шансы продолжать создавать волны без принадлежности к лиге уменьшатся.
А с Ютой, которая пошла 5-7, это стало вторым случаем за три года, когда Юты не имели права на участие в чаше с тех пор, как они доминировали в Mountain West и получили приглашение на Pac-12.
15. Вашингтон
28 из 42
Тед С. Уоррен/Ассошиэйтед Пресс
Команда FBS: Washington, Washington State
2013 2013 года. Школы FBS заканчивают свои лучшие сезоны за последнее время, хотя только одна из них увидела, что успех побудил их тренера уйти на более зеленые пастбища.
Вашингтон пошел 9-4, наибольшее количество побед Хаски с 2000 года, хотя последняя из побед (над BYU в Fight Hunger Bowl) была приписана лоскутному тренерскому штабу, который все еще работал после того, как Стив Саркисян ушел в USC.
В штате Вашингтон, хотя он финишировал ниже 0,500 в течение седьмого года подряд, оценка 6-7 действительно привела к первому приглашению в чашу школы за более чем десятилетие всего за второй сезон проекта восстановления Майка Лича с Cougars.
14. Аризона
29 из 42
Кристиан Петерсен/Гетти Изображения
Команда FBS: ARIZONA, Arizona State
2013 RICKIND:666666666666666666666. встретившись в конце ноября в Темпе, команды, казалось, двигались в противоположных направлениях. ASU обыграл Wildcats на пути к титульной игре Pac-12, в то время как Аризона в лучшем случае направлялась к игре в чашу более низкого уровня.
Но после того, как Аризона обыграла Бостонский колледж в турнире AdvoCare V100 Bowl, а ASU не только проиграл дома Стэнфорду в финале конференции, но и Техасскому технологическому институту в турнире Holiday Bowl, можно было привести аргумент (и, вероятно, он был где-то в Гранд-Каньон), что год для Аризоны был лучше.
Таким образом, это происходит в одном из пяти штатов с двумя или более программами FBS, в которых все они имели рекорды по количеству побед и достигли игр в чашу.
13. Небраска
30 из 42
Нати Харник/Associated Press
Программы FBS: Небраска
Запись 2013 года: 9-4
В Небраске есть только Небраска. Красный и белый цвета кукурузных хакеров доминируют в цветовой палитре всего штата, и поэтому каждая мельчайшая деталь тщательно продумана и разобрана. Это делает успех намного труднее ценить и труднее отмахнуться от борьбы.
Но каким-то образом, несмотря на тяжелое начало как для команды, так и для репутации тренера Бо Пелини, Небраска провела солидный, если не впечатляющий сезон, кульминацией которого стала впечатляющая победа над Джорджией в Gator Bowl. Тем не менее, девять побед были самым низким показателем для программы за последние шесть сезонов, что показывает, насколько мимолетными могут быть успех и похвала.
12. Michigan
31 of 42
Nati Harnik/Associated Press
FBS teams: Central Michigan, Eastern Michigan, Michigan, Michigan State, Western Michigan
2013 combined record: 29 -34
Иерархия в штате Великих озер выглядит следующим образом: есть штат Мичиган и штат Мичиган Большой Десятки, а затем есть специализированные школы, которые часто служат кормом для больших мальчиков в начале сезона.
И хотя в некоторые годы одна из этих среднеамериканских школ подпрыгивает и заканчивает с лучшим результатом, чем силы, в 2013 году этого не произошло. Это могло бы произойти, если бы Центральный Мичиган не проиграл Мичигану, чтобы открыть сезон, как CMU пошел 6-6 и Мичиган 7-6.
Несомненно, лучшей командой штата на данный момент является штат Мичиган, который не только выиграл свой первый с 1987 года титул Большой десятки, но и впервые с 1988 года достиг Роуз Боул. Спартанцы обыграли Стэнфорд и заняли 13-е место. 1.
Завершают список далеко внизу Восточный Мичиган (2-10) и Западный Мичиган (1-11), которые в сумме одержали одну победу над командой FBS, не входящей в их число.
11. Огайо
32 из 42
Крис Тротман/Getty Images
Программы FBS: Акрон, Боулинг-Грин, Огайо, штат Огайо, 30, штат Кент, 30
2013 комбинированная запись: 54-48
Поскольку программы FBS занимают второе место в любом штате и шесть на одной конференции (Mid-American), ежегодно проводится множество игр между восемью командами Огайо. Тем не менее, Цинциннати и штат Огайо также стараются вести себя по-соседски, регулярно играя (и обычно побеждая) команды MAC.
Если оставить в стороне личные сравнения, в целом команды Огайо в основном хороши. В основном. Майами (Огайо) пошли 0-12 и не были близки к победе в игре в прошлом сезоне, в то время как Акрон и Кент Стейт также финишировали ниже 0,500.
Другие три команды MAC из Огайо добились разной степени успеха во главе с Боулинг-Грин. «Соколы» выиграли 10 игр и завоевали титул MAC, но проиграли своего тренера Уэйк Форест, а свою игру в чашу — Питтсбургу. Огайо и Толедо выиграли семь игр, но только Огайо получил ставку на чашу, проиграв Восточной Каролине в Beef O’Brady’s Bowl.
Обе большие пушки провели хорошие сезоны, которые были бы лучше, если бы не последние потери. Штат Огайо начал со счетом 12: 0 только для того, чтобы проиграть штату Мичиган за титул Большой десятки, а затем Клемсону в Orange Bowl, в то время как Цинциннати начал 9.-2, а затем сбросил свои последние два.
10. Oregon
33 из 42
Джонатан Ферри/Гетти Изображения
Программы FBS: OREGON, OREGON State
2013 года. если бы это было сделано еще в середине октября, штат Орегон был бы намного выше в списке и серьезно продвинулся бы на первое место. Орегон и штат Орегон в сумме вели со счетом 13-1, и единственное поражение неожиданно произошло в форме того, что OSU уступил свой первый сезон FCS Eastern Washington.
Но потом год Бобров рухнул на самое дно, поднявшись с 6-1 до 6-6, прежде чем кто-либо успел моргнуть, но все же закончился на высокой ноте победой в чаше над штатом Бойсе.
Орегон дошел до 7-0 и крупного противостояния со Стэнфордом только для того, чтобы отстать от большого и проиграть в конце розыгрыша. Затем «Утки», казалось, ходили во сне в течение части оставшейся части регулярного сезона, особенно во время сокрушительного поражения от « Аризоны» , прежде чем снова включить его в « Аламо Боул» в качестве неосмотрительного прощального подарка тренеру из Техаса Маку Брауну .
9. Оклахома
34 из 42
Бретт Деринг/Гетти Изображения
FBS Программы: . Нередко все три команды FBS из Sooner State играли в боулинг, вот почему прошлый год был такой аномалией. Оценка Талсы 3–9 удержала его от участия в постсезонье и означала, что это был всего второй раз с 2005 года, когда две или меньше школ в Оклахоме получили заявку на чашу.
Оклахома и OSU внесли свой вклад, как это обычно бывает, и оба получили высокоуровневые игры в чашу в качестве награды за сезоны с 10 победами. Но только «Сунерс» одержали еще одну победу, и она была крупной: над Алабамой в «Сахарнице» одержать 11 побед в 10-й раз за 14 лет.
ОК Штат проиграл в своей чаше, поздно проиграв Миссури в Коттон Боул, но со счетом 10-3 все еще достиг двузначного числа в третий раз за четыре сезона.
8. Луизиана
35 из 42
Bill Haber/Associated Press
Программы FBS: Louisiana-Lafayette, Louisiana-Monroe, Louisiana Tech, LSU, Tulane
2013. это гарантирует соответствие всем критериям для типов программ, не смотрите дальше Луизианы. В штате Байу есть государственная школа конференции по энергетике (LSU), частный колледж (Тулейн), технический институт (Технологический институт Луизианы) и даже пара школ с прежними названиями в Луизиане-Лафайет и Луизиана-Монро.
И если не считать рекорда Технологического института 4-8 — огромное падение с 9-3 в 2012 году — в остальном штате дела шли чертовски хорошо.
LSU пошел со счетом 10-3, и хотя он не участвовал в розыгрыше SEC или национальных титулов, он все же играл в первый день Нового года и обыграл Айову в Outback Bowl. UL-Lafayette зарекомендовала себя как одна из лучших команд среднего звена в стране с третьим сезоном подряд 9-4, а также титулом Sun Belt, в то время как UL-Monroe пошла 6-6 и выиграла бы, если бы игры были добавлены для 2014 год был примерно в прошлом году.
Наконец, был Тулейн, который в большинстве лет был аутсайдером штата, но в 2013 году финишировал со счетом 7-6 и впервые с 2002 года попал на игру в чашу.
7. Висконсин
36 из 42
USA TODAY Sports
Программы FBS: Wisconsin
Рекорд 2013 года: 9-4
Публика в красных и белых одеждах у каждого жителя Небраски, Висконсин и каждое действие Барсуков в студенческом футболе. И, как и «Корнхаскерс», они испытали, каково это — провести хороший сезон, который, вероятно, мог бы быть намного лучше.
Сезон 2013 года в Висконсине был полон многих «а что, если», в том числе странного финала его поражения в штате Аризона и мозгового спазма от выступления дома в штате Пенсильвания. Несмотря на недостатки, он по-прежнему стал 12-м победным сезоном программы подряд и удержал этот штат с одной школой на первом месте в списке.
6. Миссури
37 из 42
Л.Г. Patterson/Associated Press
Программы FBS: Миссури
Рекорд за 2013 год: 12-2
В 2013 году программа Show Me State показала остальной Америке, что качество часто важнее количества, поскольку единственная в штате команда FBS провела такой отличный сезон, что превзошла почти 90 процентов территории страны. .
Второй сезон «Миссури» с момента перехода из «Большой 12» в SEC был огромным успехом, благодаря старту со счетом 7:0, который привел к победе в титульном матче SEC. «Тигры», возможно, проиграли это соревнование Оберну, но они не позволили испортить достижения года, одержав воодушевляющую победу над бывшим соперником из «Большой 12» штата Оклахома в «Коттон Боул».
5. Флорида
38 из 42
Phil Sears/Associated Press
Программы FBS: Central Florida, Florida, Florida Atlantic, Florida International, Florida State, Miami (Fla.), Флорида
Объединенная запись за 2013 год: 48-40
Если вы хотите понять, как концепция качества важнее количества может повлиять на рейтинг штата, используйте Флориду в качестве примера. Штат является домом для действующего чемпиона страны и двух из пяти победителей игр в чашу BCS. Но есть семь школ, которые находятся в FBS в Солнечном штате, и большинство из них вызвало некоторые облака, которые разрушили четкое плавание Флориды к более высокому рейтингу.
Во-первых, великие: Штат Флорида пошел со счетом 14:0 и выиграл национальный титул, сразившись со всеми претендентами — хотя некоторые критики все еще скажут, что этого было недостаточно — чтобы завоевать первое чемпионство школы с сезона 1999 года. Была также Центральная Флорида, вероятно, самый большой сюрприз 2013 года с ее рекордом 12-1 и победами над Луисвиллем в регулярном сезоне и Бэйлором в Fiesta Bowl.
Майами (Флорида) также играли в боулинг, но к тому моменту «Харрикейнз» были лишь оболочкой прежнего «я» в нападении и хромали до 9-4 рекорда после старта 7-0.
Затем следуют неудачники рейтинга, начиная с команды Флориды Атлантик со счетом 6-6, которую следует похвалить за то, что она закончила серию из четырех побед, но ей дали только половину за то, что она одержала две победы над командами 2-10 и еще две против 1- 11 клубов.
Хотя и не самые плохие с точки зрения рекордов, больше всего во Флориде разочаровали сами Gators. Мало того, что они не смогли сыграть в чашу впервые с 1990 года, их рекорд 4-8 был худшим для школы с 19 лет. 79.
Почти столь же разочаровывающей была Южная Флорида, которая после пяти лет восьми и более побед в последних трех сезонах, включая 2-10 в 2013 году, достигла 10-26. т даже так хорошо, как его 1-11 записи.
4. Техас
39 из 42
Эрик Гей/Associated Press
Программы FBS: Baylor, Houston, North Texas, Rice, Texas, Texas AMCU, TMC Тех, УТЭП, УТСА
Общий рекорд за 2013 год: 87-65
В Техасе все немного больше, включая широту и глубину студенческого футбола. С 12 командами, играющими на уровне FBS, разбросанными по пяти различным конференциям, Lone Star State стоит особняком, когда дело доходит до его отпечатков пальцев сетки.
Техас является домом для двух разных чемпионов конференции: победитель Большой 12 Бэйлор (11-2) и победитель Конференции США Райс (10-4), в то время как американец Хьюстон (8-5), Техас и Техасский технологический институт Большой 12 ( оба 8-5), Северный Техас C-США (9-4) и Texas A&M Комиссии по ценным бумагам и биржам (9-4) все отправились на игры в боулинг. Эта группа сыграла вместе 3-4 в играх с чашей.
UTSA из C-USA (7-5) и штат Техас из Sun Belt (6-6) имели право на участие в чаше, но в качестве переходных программ FCS они получили бы заявку, только если бы они были единственными оставшимися доступными командами. Тем не менее, это девять команд из 12 с победными рекордами.
Нижние фидеры в штате в прошлом году были все из алфавитного супа: SMU занял 5-7 место в Американском, TCU финишировал 4-8 в Большой 12, а UTEP занял последнее место с 2-10 из C- США.
3. Калифорния
40 из 42
Hancock, R. E. Катионные противомикробные пептиды: на пути к клиническому применению. Экспертное заключение. расследование Наркотики 9 , 1723–1729. https://doi.org/10.1517/13543784.9.8.1723 (2000 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
«>Brown, K.L. & Hancock, R.E. Катионные (противомикробные) пептиды защиты хозяина. Курс. мнение Иммунол. 18 , 24–30 (2006).
КАС пабмед Статья Google ученый
Эпанд, Р. М. и Фогель, Х. Дж. Разнообразие антимикробных пептидов и их механизмы действия. Биохим Биофиз Акта 1462 , 11–28 (1999).
КАС пабмед Статья Google ученый
Йенг А. Т., Геллатли С. Л. и Хэнкок Р. Э. Многофункциональные катионные защитные пептиды хозяина и их клиническое применение. Сотовый. Мол. Жизнь наук. ЦМЛС 68 , 2161–2176. https://doi. org/10.1007/s00018-011-0710-x (2011 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Нгуен, Л. Т., Хейни, Э. Ф. и Фогель, Х. Дж. Расширяющийся спектр антимикробных пептидных структур и способов их действия. Тенденции биотехнологии. 29 , 464–472 (2011).
КАС пабмед Статья Google ученый
7de Breij, A. и др. Антимикробный пептид SAAP-148 борется с лекарственно-устойчивыми бактериями и биопленками. Sci Transl Med . https://doi.org/10.1126/scitranslmed.aan4044 (2018 г.).
Oettl, K. & Stauber, R. E. Физиологические и патологические изменения в окислительно-восстановительном состоянии человеческого сывороточного альбумина критически влияют на его связывающие свойства. Бр. Дж. Фармакол. 151 , 580–590. https://doi.org/10.1038/sj. bjp.0707251 (2007 г.).
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Ямасаки, К., Чуанг, В. Т. Г., Маруяма, Т. и Отагири, М. Взаимодействие альбумин-лекарство и его клиническое значение. Bba-Gen Sub. 5435–5443 , 2013 г. https://doi.org/10.1016/j.bbagen.2013.05.005 (1830).
КАС Статья Google ученый
Бхаттачарья А. А., Грун Т. и Карри С. Кристаллографический анализ выявляет общие способы связывания жирных кислот со средней и длинной цепью с сывороточным альбумином человека. Дж. Мол. биол. 303 , 721–732. https://doi.org/10.1006/jmbi.2000.4158 (2000 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Schneider, E.K. и др. Взаимосвязь структуры и активности связывания белков плазмы, связанная с N-концом даптомицина. Заражение АКС. Дис. 3 , 249–258. https://doi.org/10.1021/acsinfecdis.7b00015 (2017 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Сивертсен, А. и др. Синтетические катионные противомикробные пептиды связываются своими гидрофобными частями с лекарственным участком II сывороточного альбумина человека. BMC Структура. биол. 14 , 4 (2014).
ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Гош, С. и Дей, Дж. Связывание амфифилов амидов жирных кислот с бычьим сывороточным альбумином: роль амидных водородных связей. J. Phys. хим. Б 119 , 7804–7815. https://doi.org/10.1021/acs.jpcb.5b00965 (2015 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Chen, J., Ohnmacht, C., Hage, D. S. Исследования связывания фенитоина с сывороточным альбумином человека с помощью высокоэффективной аффинной хроматографии. Ж. Хроматогр. Б, анал. Технол. Биомед. Жизнь наук. 809 , 137–145, doi: https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.06.012 (2004).
Lee, B.L., Sachdeva, M. & Chambers, H.F. Влияние связывания даптомицина с белком на MIC и антибактериальную активность. Антимикроб. Агенты Чемотер. 35 , 2505–2508 (1991).
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Шмидт, С. и др. Влияние связывания с белками на фармакологическую активность высокосвязанных антибиотиков. Антимикроб. Агенты Чемотер. 52 , 3994–4000. https://doi.org/10.1128/AAC.00427-08 (2008 г.).
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
«>18Шири, Ф., Рахими-Насрабади, М., Ахмади, Ф. и Эрлих, Х. Мультиспектроскопические исследования и молекулярное моделирование взаимодействия комплекса медь-ибупрофенат с бычьим сывороточным альбумином (БСА). Спектрохим. Акта. Часть А, Мол. биомол. Спектроск. 203 , 510–521, doi: https://doi.org/10.1016/j.saa.2018.05.098 (2018).
Сонг, Х.К., Ли, К.Н., Квон, К.С., Ю, М.Х. и Сух, С.В. Кристаллическая структура нерасщепленного альфа-1-антитрипсина показывает конформацию его ингибирующей реактивной петли. ФЭБС Письмо. 377 , 150–154 (1995).
КАС пабмед Статья Google ученый
Свенссон, Д., Лагерстедт, Дж. О., Нильссон, Б. О. и Дель Джудиче, Р. Аполипопротеин A-I ослабляет LL-37-индуцированную цитотоксичность эндотелиальных клеток. Биохим. Биофиз. Рез. коммун. 493 , 71–76 (2017).
КАС пабмед Статья Google ученый
Wang, Y., Agerberth, B., Lothgren, A., Almstedt, A. & Johansson, J. Аполипопротеин A-I связывает и ингибирует антибактериальный/цитотоксический пептид человека LL-37. Дж. Биол. хим. 273 , 33115–33118 (1998).
КАС пабмед Статья Google ученый
Пэн, К. С. и др. Пять различных писцидинов из нильской тиляпии, Oreochromis niloticus: анализ их проявлений и биологических функций. PLoS ONE 7 , e50263 (2012).
ОБЪЯВЛЕНИЯ КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Zaiou, M., Nizet, V. & Gallo, R.L. Противомикробные и протеазоингибирующие функции последовательности человеческого кателицидина (hCAP18/LL-37). Дж. Инвест. Дерматол. 120 , 810–816. https://doi.org/10.1046/j.1523-1747.2003.12132.x (2003 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Родзиевич-Мотовидло, С. и др. Антимикробные и конформационные исследования активных и неактивных аналогов пептида протегрин-1. FEBS J. 277 , 1010–1022. https://doi.org/10.1111/j.1742-4658.2009.07544.x (2010 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Chang, T.W., Lin, Y.M., Wang, C.F. & Liao, Y.D. Липопротеин наружной мембраны lpp представляет собой рецептор на поверхности клетки грамотрицательных бактерий для катионных противомикробных пептидов. J. Biol. хим. 287 , 418–428 (2012).
КАС пабмед Статья Google ученый
Лин, Ю. М. и др. Белок I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa является мишенью катионного антимикробного пептида/белка. Дж. Биол. хим. 285 , 8985–8994 (2010).
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Hill, Z.B., Martinko, A.J., Nguyen, D.P. & Wells, J.A. Химически индуцированные димеризаторы на основе человеческих антител для применения в клеточной терапии. Нац. хим. биол. 14 , 112–117. https://doi.org/10.1038/nchembio.2529 (2018 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Чанг, Т. В. и др. Гидрофобные остатки имеют решающее значение для спиралеобразующей, гемолитической и бактерицидной активности амфипатического противомикробного пептида ТР4. PLoS ONE 12 , e0186442 (2017).
ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый
1. Siegel, W. and Foster, L. Фетальная бычья сыворотка: влияние географии. БиоПроцесс J 12, 28-30 (2013).
2. Хоукс П.В. Фетальная бычья сыворотка: географическое происхождение и нормативное значение вирусного заражения. Биоресурсы и биопереработка 2:34 (2015).
3. Хоукс П.В. Высококачественные FBS могут поступать из любой разрешенной страны происхождения: соблюдение самых высоких отраслевых стандартов и нормативных требований имеет важное значение. GEN Exclusives Online 12 апреля (2017 г.).
4. Дэвис Д., Дрейк Хирши С. Фетальная сыворотка крупного рогатого скота: что следует спросить у поставщика и почему. БиоПроцесс J 13, 19-21 (2014).
5. Кассар, Ж-П. Эволюция технологий обнаружения вирусов: угроза или возможность? Устная презентация на ISIA 2016, 11th Annual Meeting, Барселона, Испания (2016).
- Вы заинтересованы в наборе футбола Оберн?
- У нас есть самые свежие рейтинги футбольных рекрутеров.
- Хотите узнать все о футбольных лагерях?
- Что такое стипендии на полную поездку?
- Когда день подписания студенческого футбола?
- Вы заинтересованы в рекрутинге футболистов Алабамы?
- Узнайте последние новости о найме Клемсона в футбол.
- Каковы преимущества рейтинга школьного футбола?
- Чем полезен футбол?
- Стэнфордский университет
- Университет Флориды
- Университет Мичигана
- Принстонский университет
- Калифорнийский университет – Лос-Анджелес – Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе
- Университет Северной Каролины в Чапел-Хилл
- Университет Джорджии
- Технологический институт Джорджии
- Калифорнийский университет – Беркли
- Университет штата Флорида
96 веб-сайт футбольного рейтинга Дивизиона 1 FBS и футбольного рейтинга Дивизиона 1 FCS Просмотрите наш полный список футбольных команд Дивизиона 1
В этом исчерпывающем списке футбольных команд Дивизиона семьи могут искать футбольные команды колледжей по штатам, конференциям, городам и т. д. Используйте эту информацию, чтобы ознакомиться с множеством доступных школ.
Полный список футбольных команд Дивизиона 1
Alabama A&M University
Normal, Alabama
South East
Southwestern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Alabama State University
Montgomery, Alabama
South East
Southwestern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Alcorn Государственный университет
Штат Алкорн, штат Миссисипи
Средний Юг
Southwestern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Auburn University
Auburn, Alabama
South East
Southeastern Conference
NCAA D1 FBS
Boston College
Chestnut Hill, Massachusetts
New England
Atlantic Coast Conference
NCAA D1 FBS
Университет Брауна
Провиденс, Род-Айленд
Новая Англия
Лига плюща
NCAA D1 FCS
Bryant University
Smithfield, Rhode Island
New England
Northeast Conference
NCAA D1 FCS
Bucknell University
Lewisburg, Pennsylvania
North East
Collegiate Water Polo Association
NCAA D1 FCS
Butler University
Indianapolis, Indiana
Great Lakes
Pioneer Football League
NCAA D1 FCS
Campbell University
Buies Creek, North Carolina
Mid East
Pioneer Football League
NCAA D1 FCS
Clemson University
Clemson, South Carolina
South East
Atlantic Coast Conference
NCAA D1 FBS
Dartmouth College
Ганновер, Нью-Гемпшир
Новая Англия
Лига плюща
NCAA D1 FCS
Колледж Дэвидсона
Дэвидсон, Северная Каролина
Mid East
Pioneer Football League
NCAA D1 FCS
Drake University
Des Moines, Iowa
Mid West
Pioneer Football League
NCAA D1 FCS
Duke University
Durham, North Carolina
Mid East
Конференция Атлантического побережья
NCAA D1 FBS
Университет Дюкен
Питтсбург, Пенсильвания
Северо-Восток
Северо-восток Конференция
NCAA D1 FCS
Elon University
Elon, North Carolina
Mid East
Colonial Athletic Association
NCAA D1 FCS
Florida A&M University
Tallahassee, Florida
South East
Mid-Eastern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Университет Фурмана
Гринвилл, Южная Каролина
Юго-Восток
Южная конференция
NCAA D1 FCS
Университет Гарднера-Уэбб
Boyling Springs, Северная Каролина
Mid East
Big South Conference
NCAA D1 FCS
Georgetown Universit
Технологический институт Джорджии
Атланта, Джорджия
Юго-Восток
Конференция Атлантического побережья
NCAA D1 FBS
Университет Хэмптона
Хэмптон, Вирджиния
Mid East
Big South Conference
NCAA D1 FCS
Harvard University
Cambridge, Massachusetts
New England
Ivy League
NCAA D1 FCS
Howard University
Washington, District Of Columbia
North East
Mid-Eastern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Университет штата Индиана
Terre Haute, Indiana
Great Lakes
Missouri Valley Football Conference
NCAA D1 FCS
Indiana University
Bloomington, Indiana
Great Lakes
Big Ten Conference
NCAA D1 FBS
Jackson State University
Jackson, Mississippi
Mid South
Southwestern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Lafayette College
Easton, Pennsylvania
North East
Patriot League
NCAA D1 FCS
Lamar University
Beaumont, Texas
Mid South
Southland Conference
NCAA D1 FCS
Lehigh University
Bethlehem, Pennsylvania
North East
Patriot League
NCAA D1 FCS
Liberty University
Lynchburg, Virginia
Mid East
Atlantic Sun Conference
NCAA D1 FCS
Marist College
Poughkeepsie, New York
North East
Metro Atlantic Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Marshall University
Huntington, West Virginia
Mid East
Conference USA
NCAA D1 FBS
Mercer University
Macon, Georgia
South East
Southern Conference
NCAA D1 FCS
Merrimack College
North Andover, Massachusetts
New England
Northeast-10 Conference
NCAA D1 FCS
Miami University
Oxford, Ohio
Great Lakes
Mid-American Conference
NCAA D1 FBS
Monmouth University
West Long Branch, New Jersey
North East
Northeast Conference
NCAA D1 FCS
Государственный университет Моргана
Балтимор, Мэриленд
Северо-Восток
Mid-Eastern Athletic Conference
NCAA D1 FCS
Университет Огайо
Афины, штат Огайо
Великие озера
Средней американской конференции
NCAA D1 FBS
Penn State
Университетский парк, Pennsylvania
North East
Big Ten Conference NCA Big Ten Conference 9003.
Doug Pensinger/Getty Images
FBS Программы: California, Fresno State, San Diego State, San Jose State, Stanford, UCLA, USC959959
. Пять из семи команд FBS играли в игры в чашу, а шесть из семи финишировали на уровне 0,500 или выше, это был золотой год для Калифорнии в 2013 году. Сияние было бы намного ярче, если бы Кэл не был включен, поскольку «Золотые медведи» нанесли 11 из 34 поражений штата.
Калифорния по проценту приглашенных в боулинг (71,4 процента) и рекордов без проигрышей (85,7 процента) лидирует по всей Америке, а штат пошел со счетом 3: 2 в играх в чашу (отметка, испорченная победой USC над штатом Фресно).
Было четыре команды с 10 или более победами, возглавляемые чемпионом Pac-12 Стэнфордом (11-2) и победителем Маунтин-Уэст Фресно (11-2), а также Калифорнийским университетом в Лос-Анджелесе (10-3) и USC (10-4). Затем последовал штат Сан-Диего, который со счетом 8-5 провел четвертый сезон подряд как минимум с восемью победами.
А штат Сан-Хосе, сыгравший со счетом 6-6, по иронии судьбы, вероятно, пропустил игру в чашу только потому, что его победа над Фресно, завершившая регулярный сезон (и получившая право на участие в чаше), выбила Фресно из рассмотрения BCS и, таким образом, уменьшила число предложений чаши, которые были у Mountain West.
2. Alabama
41 of 42
Butch Dill/Associated Press
FBS teams: Alabama, Auburn, South Alabama, Troy, UAB
2013 combined record: 37-26
Что касается тех, кто следит за Алабамой и Оберном, а в Сердце Дикси это практически все, то это единственные футбольные команды колледжей, которые имеют значение. Но мы в Bleacher Report не что иное, как исчерпывающие, как показывают наши частые рейтинги и списки, которые предоставляют информацию обо всех 128 командах FBS, и этот рейтинг состоит из каждая команда в состоянии, а не только хорошие.
Иначе Алабама была бы номером один с пулей.
Рекорд Оберна 12-2, титул SEC и место в национальном чемпионате наряду с рекордом 11-2 для Алабамы (который многие считают неудачным годом для Crimson Tide) включал в себя совокупный рекорд 14-1 против противников SEC, не участвовавших в Iron Чаша. Это действительно, очень хорошо.
Но в Алабаме пять команд FBS, а рекорд остальных трех был 14-24. И это включало две команды 6-6 из Солнечного пояса (Южная Алабама и Троя) вместе с многолетней половой тряпкой UAB (2-10) из Conference USA. Трой был претендентом на кубок в течение многих лет, а Южная Алабама, кажется, быстро поднимается вверх всего за два года игры в FBS, но эти блейзеры и их девять проигрышных сезонов подряд слишком велики, чтобы их игнорировать.
1. Южная Каролина
42 из 42
Ричард Широ/Associated Press
Команда FBS: ,
9059 . американский футбол, сверху донизу, не смотрите дальше штата Пальметто. Хотя Южная Каролина и Клемсон являются единственными программами FBS в штате, они регулярно входят в число лучших команд страны.Оба 11-2 год назад (включая поражение Клемсона от Южной Каролины), оба имеют трехлетнюю серию из 10 или более побед. Каждый выиграл свою игру в чашу в 2013 году: Клемсон выиграл Orange Bowl над штатом Огайо, а Южная Каролина победила Висконсин в Capital One Bowl.
И их потери тоже неплохие. Другое поражение Клемсона было в штате Флорида, в то время как Южная Каролина попала на пути к Джорджии и Теннесси… но также была единственной командой, которая обыграла Центральную Флориду, и одной из двух команд, вышедших на первое место в Миссури.
В то время как есть лучшие отдельные команды, а в некоторых штатах их больше, есть одна вещь, которая есть у Южной Каролины во всех них, или, скорее, ее нет: нет формы.
Фетальный бычий сывороточный альбумин ингибирует антимикробную активность пептидов и связывает лекарство только в комплексе с α1-антитрипсином
Введение
Широкое использование антибиотиков как в медицине, так и в сельском хозяйстве способствовало появлению устойчивых к лекарствам бактерий 1,2 . Таким образом, срочно необходима разработка новых противомикробных препаратов с уникальными мишенями и механизмом действия, отличными от таковых у обычных антибиотиков. Природные антимикробные пептиды (AMP) были выделены из множества источников. Они обладают амфипатической структурой (катионной и гидрофобной) и состоят из 10–50 аминокислотных остатков в длину. Они способны за несколько минут нарушать целостность мембраны бактерий даже у устойчивых к антибиотикам бактерий и не склонны вызывать резистентность к лекарствам 2,3,4 . Некоторые АМП в настоящее время проходят клинические испытания фазы III на предмет их эффективности в лечении микробных инфекций, такие как омиганан, пексиганан и исеганан. Однако их применение ограничено в первую очередь местными инфекциями, вероятно, из-за ингибирования сывороточными белками 90-180 5,6,7 90-181 .
Альбумин является наиболее распространенным белком в сыворотке (~ 45 мг/мл) и участвует в транспортировке жирных кислот, холестерина, токсинов и лекарств в кровотоке. Сывороточный альбумин человека состоит из одной полипептидной цепи с 585 аминокислотными остатками, которая организована в три α-спиральных домена, I, II, III, каждый из которых состоит из двух субдоменов A и B 8,9,10 . Аминокислотные последовательности человеческого, бычьего и мышиного альбуминов в высокой степени гомологичны с идентичностью от 70 до 76%. На нем есть два сайта связывания лекарств и семь сайтов связывания жирных кислот. Более 90% антикоагулянтного препарата варфарина и жаропонижающего препарата ибупрофена были связаны с сайтом I и сайтом II человеческого альбумина соответственно. Липопептидный антибиотик, даптомицин и некоторые короткие АМП преимущественно связываются и ингибируются сывороточным альбумином человека (от 90 до 94%) в участке II 11,12 .
В этом исследовании мы обнаружили, что бычий альбумин действует на некоторые АМП и жаропонижающие препараты ибупрофена только в комплексе с α1-антитрипсином, а не в свободной форме. Комплекс существует в бычьей сыворотке только на стадии плода, но не после рождения. Наиболее важно то, что эмбриональная бычья сыворотка (FBS) является основной добавкой среды для культивирования клеток, поэтому содержание комплекса альбумин/α1-антитрипсин очень важно для анализа и производства важных биомолекул.
Результаты
Ингибирование бактерицидной активности АМП сывороткой
Антимикробный пептид (AMP) TP4 из рыбной тиляпии проявляет широкий спектр антимикробной активности в отношении E. coli, Staphylococcus aureus и Candida albicans. Однако эта антимикробная активность заметно ингибировалась в присутствии эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) (5%, об./об.) (рис. 1а). В дополнение к TP4, эта опосредованная сывороткой репрессия AMP против E. coli была также обнаружена с AMP человека LL37, AMP, производным LL37 (SAAP159) и AMP, производным протегрина-1 (Iseganan), но не циклическим полипептидным антибиотиком. Полимиксин B (верхние панели рис. 1c). Используя анализ сдвига полосы с помощью горизонтального электрофореза в нативном геле, подвижность LL37, SAAP159, изеганан, как и TP4, замедлялся в 10–40% FBS, однако полимиксин B не замедлялся (рис. 1b, c, нижние панели). Для исследования аминокислотных остатков ТР4, которые могут быть ответственны за его чувствительность к ингибирующим эффектам сыворотки, вводили или истощали специфические гидрофобные и положительно заряженные остатки пептида ТР4 и подвергали анализу сдвига полосы. Результаты показали, что удаление гидрофобных остатков TP4-F1A,I2A, TP4-I5A,I6A и TP4-F9A,L10A уменьшало сдвиг, опосредованный FBS, в то время как введение гидрофобного остатка TP4-A12I,A15I усиливало сдвиг. . Напротив, удаление катионного остатка, TP4-R18S, R21H и TP4-dC2 (делеция R24 и R25), не изменило подвижность AMP (рис. 1d и дополнительный рисунок 1). Что касается бактерицидной активности, TP4-A12I,A15I стали более восприимчивы к ингибированию сывороткой, тогда как TP4-F1A,I2A были менее восприимчивы (рис. 1d). Этот результат указывает на то, что гидрофобные остатки АМП ответственны за связывание и ингибирование, вызываемое компонентами сыворотки.
Рисунок 1Чувствительность противомикробных препаратов к ингибированию сыворотки. ( a ) Влияние эмбриональной бычьей сыворотки на антимикробную активность TP4 в отношении бактерий E. coli (слева), Staphylococcus aureus (в центре) и Candida albicans (справа). ( b ) Сдвиг полосы TP4, вызванный эмбриональной бычьей сывороткой. ( c , d ) Влияние эмбриональной бычьей сыворотки на антимикробную активность катионных антимикробных пептидов и мутантов TP4 до E. coli (верхняя или левая панель) и сдвиг полосы противомикробных препаратов (по 4 мкг каждого), вызванный сывороткой (нижняя или правая панель). PBS, фосфатно-солевой буфер; 5% FBS, 5% (об./об.) эмбриональной бычьей сыворотки в PBS.
Изображение в полный размер
Очистка компонентов сыворотки, ответственных за связывание АМФ
Две полосы, одна основная и одна второстепенная, были извлечены из неочищенной сыворотки биотинилированными пептидами TP4-A12I, A15I, которые были иммобилизованы на конъюгированных со стрептавидином бусы (рис. 2а). Основная полоса состояла из альбумина и α1-антитрипсина, что было определено с помощью жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (ЖХ/МС/МС), а второстепенная полоса была идентифицирована как аполипопротеин AI (Apo-AI) (дополнительная таблица 1). Активные компоненты, ответственные за связывание TP4-A12I,A15I, были в основном локализованы при 70%-ной доле насыщения сульфатом аммония, что было проанализировано с помощью анализа сдвига полосы и эксперимента по вытягиванию (рис. 2b, c). Активные компоненты были дополнительно очищены с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (FPLC) Mono Q и колоночной хроматографии S12 от 70% насыщенной фракции (рис. 2d). Активные фракции элюатов обеих колонок (дополнительная рис. 2a, e) были собраны на основе анализа сдвига полосы (дополнительная рис. 2d, h), например, фракции 32–40 Mono Q и фракции 2–5 колоночной хроматографии S12. Белковые компоненты элюата каждой колонки анализировали с помощью горизонтального нативного PAGE (дополнительная рис. 2b, f) и восстановленного SDS-PAGE (дополнительная рис. 2c, g). Однородность собранного белка A (альбумин), белка B (α1-антитрипсин), белка C (серотрансферрин) и комплекса белка D (альбумин и α1-антитрипсин), как показано на профиле элюирования колоночной хроматографии FPLC Mono Q (рис. 2d). ) были дополнительно проанализированы с помощью горизонтального 8% нативного PAGE (рис. 2e) и вертикального 15% восстановленного SDS-PAGE (рис. 2f). Подробная информация о проверке этих белков A, B, C и D представлена в дополнительной таблице 1.
Рисунок 2Очистка компонентов сыворотки, ответственных за связывание AMP. ( a ) Белки, связанные с пептидами TP4-A12I, A15I. Компоненты неочищенной бычьей сыворотки удаляли биотинилированными пептидами TP4-A12I, A15I, которые иммобилизовали на шариках, конъюгированных со стрептавидином, и анализировали с помощью SDS-PAGE с восстановленным на 15% содержанием. ( b ) Сдвиг полосы пептидов TP4-A12I, A15I белками сыворотки после фракционирования сульфатом аммония. ( c ) Вытягивание белков сыворотки после фракционирования сульфата аммония с помощью биотинилированных пептидов TP4-A12I, A15I, которые были иммобилизованы на гранулах, конъюгированных со стрептавидином. ( d ) FPLC хроматография для очистки белков сыворотки от фракционирования 70% насыщенным сульфатом аммония. Интересующие белки (A, B, C и D) показаны на профилях колоночной хроматографии FPLC Mono-Q (слева) и S12 (справа). ( e , f ) Гомогенность компонентов очищенной сыворотки проанализирована с помощью горизонтального 8% нативного PAGE, pH 8,8 и вертикального 15% восстановленного SDS-PAGE, соответственно. Био, биотинилированные TP4-A12I, A15I; S.t., гранулы, конъюгированные со стрептавидином; ПД, тянущий вниз; AS70, фракционирование по 70% насыщению сульфатом аммония.
Изображение полного размера
AMP-связывающая и антитрипсиновая активность белков A, B и D
Как показано, TP4-A12I,A15I связывались только с белком D (комплекс альбумина и α1-антитрипсина), но не с белком A (альбумин) или только белок B (α1-антитрипсин), как определено с помощью анализа сдвига полосы и вытягивания вниз (рис. 3a, b). Следует отметить, что связывающая способность TP4 дикого типа с белком D была намного меньше, чем у TP4-A12I, A15I (дополнительная рис. 3a, b). Точно так же LL37, SAAP159а также изеганан также связывался с белком D, но не с белком A и белком B. Кроме того, введение гидрофобного остатка, TP4-A12I,A15I, увеличивало связывающую способность с белком D, удаление гидрофобных остатков, TP4-F1A ,I2A, TP4-I5A,I6A и TP4-F9A,L10A снижали связывающую способность. Напротив, удаление катионного остатка, TP4-R18S, R21H и TP4-dC2, не изменило связывающую способность (дополнительный рисунок 3b). Для количественного определения аффинности связывания константу связывания белка D с иммобилизованными биотинилированными TP4-A12I, A15I определяли с помощью биослойной интерферометрии с Kd = 21,7 нМ, в то время как константа связывания белков A и B не определялась (рис. 3c, d). Бактерицидная активность ТР4 (16 мкг/мл) в отношении E. coli (10 6 КОЕ/мл) ингибировалось повышением концентрации протеина D, но не протеина А или В даже до 10 мг/мл (рис. 3e). Бактерицидная активность TP4 ингибировалась 5% FBS, но ингибирование заметно уменьшалось, если белок D, а также Apo-AI в FBS истощались гранулами, иммобилизованными TP4-A12I, A15I (рис. 3f).
Рисунок 3Связывание очищенных белков с TP4-A12I,A15I. ( a ) Сдвиг полосы TP4-A12I, A15I белками A, B и D, проанализированный с помощью 8% горизонтального нативного PAGE и окрашивания кумасси синим. ( b ) Вытягивание белков A, B и D биотинилированными TP4-TP4A12I, A15I, иммобилизованными на шариках, конъюгированных со стрептавидином. ( c , d ) Биослойный интерферометрический анализ белков A, B и D. Белок D показал мощное и обратимое связывание с биотинилированными TP4-A12I, A15I ( c ), но существенного связывания с белком не наблюдалось. А и В ( d ). Жирные линии представляют собой экспериментальные данные, пунктирные линии представляют собой глобальные данные для анализа. ( e ) Ингибирование бактерицидной активности TP4 в отношении E. coli (10 6 КОЕ/мл) протеином D, а не протеином A или B. ( f ) Снижение ингибирующего действия FBS на TP4 антимикробная активность за счет истощения протеина D с помощью иммобилизованных гранул TP4-A12I, A15I. ( г ) FPLC S12 гель-фильтрационная хроматография смеси белков A/D в присутствии TP4-A12I, A15I. ( h , i ) Анализ элюатов колонки, как показано на рисунке g на 15% восстановленный ( h ) и невосстанавливающий ( i ) SDS-PAGE. Фракции, содержащие TP4-A12I, A15I, показаны в рамке.
Изображение полного размера
Для дальнейшего исследования дифференциального связывания AMP с белком A и белком D TP4-A12I, A15I и белок A/D смешивали и подвергали гель-фильтрационной хроматографии (FPLC S12). На профиле элюирования было переднее плечо (рис. 3g). Альбумин показал широкое распределение в элюатах, в то время как TP4-A12I,A15I совместно элюировались с альбумином только в передних плечевых фракциях, проанализированных с помощью восстановленного SDS-PAGE (рис. 3h). Интересно, что альбумин, совместно элюированный с TP4-A12I,A15I (фракции 2–7), проявлял очень медленную подвижность на невосстанавливающем SDS-PAGE с молекулярной массой, близкой к 130 кДа, что намного выше, чем (< 72 кДа) после восстановления с помощью 2-меркаптоэтанол (β-МЭ) (рис. 3i). Этот результат указывает на то, что альбумин, связанный с TP4, может сопровождать другие белки, такие как α1-антитрипсин, посредством дисульфидной связи.
Чтобы увидеть, обладает ли белок B (α1-антитрипсин) в комплексе белка D антитрипсиновой активностью после связывания с белком A (альбумином), мы обнаружили, что протеолитическая активность трипсина в отношении TP4 и более крупного AMP SAAP159 подавлялась белок D, а также свободный белок B, но только минимально затронутый белком A (альбумином), как было проанализировано с помощью SDS-PAGE со сниженным на 15% (дополнительный рисунок 4).
Рисунок 4Белок D состоит из альбумина и α1-антитрипсина, связанных дисульфидной связью. ( a ) Белок D диссоциирует на альбумин и α1-антитрипсин с помощью β-меркаптоэтанола (β-МЭ). Белки A, B и D (4 мкг каждого) анализировали с помощью восстановленного (2,5% β-ME) (слева) и невосстанавливающего (справа) 8% SDS-PAGE с последующим окрашиванием кумасси синим. ( b ) Диссоциация белка D на белок A и B путем повышения концентрации β-ME и анализ с помощью невосстанавливающего SDS-PAGE (слева) и вестерн-блоттинга с использованием антител, выработанных против альбумина (в центре) и α1-антитрипсина (справа). ). 1X представляет собой 0,08% β-ME (об./об.). ( c ) Диссоциация протеина D на протеины A и B путем повышения концентрации β-ME и анализ с помощью 8% нативного PAGE, pH 8,8. 1X представляет 0,05% β-ME (об./об.). ( d ) Отделение белков A и B от белка D с помощью ВЭЖХ в присутствии β-ME. Показаны профиль элюирования этих диссоциированных белков с помощью ВЭЖХ (слева) и количественный анализ отдельного белка (справа). ( e , f ) Снижение AMP-связывающей способности протеина D под действием β-ME. Связывающую способность белков D, A и B с пептидами TP4-A12I, A15I определяли с помощью анализа сдвига полосы и вытягивания вниз после восстановления с помощью β-ME. 1X представляет собой 0,05% β-ME. Био, биотинилированные TP4-A12I,A15I.
Изображение в полный размер
Дисульфидная связь между альбумином и α1-антитрипсином необходима для связывания AMP
Протеин D имеет одну большую полосу, которая двигалась очень медленно, и одну второстепенную полосу, которая двигалась быстрее, чем 72 кДа на 8% невосстанавливающем SDS -PAGE (рис. 4а, левая панель). Однако он был разделен на две полосы (D1, D2) после восстановления с помощью β-ME, и две полосы (D1 и D2) были идентифицированы как альбумин и α1-антитрипсин, соответственно, с помощью анализа ЖХ/МС/МС (рис. 4а, правая панель и дополнительная таблица 1). Кроме того, белок А (альбумин) в невосстанавливающей форме перемещался быстрее, чем в восстановленной форме. Чтобы исследовать динамику диссоциации протеина D, к протеину D добавляли β-ME в увеличивающихся концентрациях, и полученные смеси подвергали невосстанавливающему SDS-PAGE и вестерн-блоттингу с использованием антител, выработанных против альбумина и α1-антитрипсина соответственно (рис. . 4б). Результаты демонстрируют, что белок D был диссоциирован на белок A и белок B с помощью β-ME. Точно так же диссоциация белка D под действием β-ME (0,05–0,8%) также наблюдалась с помощью горизонтального нативного PAGE и высокоэффективной жидкостной хроматографии (колонка HPLC-C4) (рис. 4c, d). Чтобы исследовать роль дисульфидной связи, мы обнаружили, что АМФ-связывающая способность белка D была разрушена, если она была восстановлена β-ME, как было проанализировано сдвигом полосы (рис. 4e) и методом вытягивания вниз (рис. 4f). Следует отметить, что некоторые составляющие белка D были способны связывать TP4-A12I, A15I после диссоциации под действием β-ME (0,1–0,4%) (рис. 4f). Эти результаты демонстрируют, что дисульфидная связь между белком А (альбумином) и белком В (α1-антитрипсином) важна для структурной целостности и способности связывать АМФ.
Димеризация протеина D необходима для связывания AMP
Нередуцированный протеин D распознавался как антителами, вырабатываемыми против альбумина, так и α1-антитрипсином. Наблюдались одна основная полоса, а также две второстепенные полосы (рис. 5а). Белок D (комплекс A + B) существовал в мономерной и димерной формах, как показано на восстановленном SDS-PAGE после поперечного связывания с глутаровым альдегидом. Напротив, белки A и B все еще существовали в виде мономеров даже после перекрестного связывания, как это было сделано с белком D (рис. 5b). Мономерная и димерная формы протеина D были дополнительно подтверждены Вестерн-блоттингом с использованием соответствующих антител, выработанных против протеина А (альбумин) или протеина В (α1-антитрипсин) (рис. 5с). Димеризация протеина D ингибировалась 2 × SDS, что эквивалентно 0,125% SDS (масса/объем), а также 0,05% β-ME (масса/объем), где белок D был диссоциирован на белки A и B (рис. 5d). , д). В средах (2 × SDS), в которых димеризация была ингибирована, белок D был неспособен связываться с TP4-A12I, A15I, что было проанализировано методом вытягивания вниз (рис. 5f). Эти результаты показывают, что димеризация белка D необходима для его AMP-связывающей активности.
Рисунок 5Димеризация протеина D необходима для связывания AMP. ( a ) Белок D состоит из белков A и B, обнаруженных с помощью невосстанавливающего SDS-PAGE с последующим вестерн-блоттингом с использованием антител, выработанных против белка A (альбумин, в центре) и белка B (α1-антитрипсин, справа). ( b , c ) Димеризация белка D. Белки A, B и D сшивали глутаровым альдегидом (GA) и разделяли с помощью 8% восстановленного SDS-PAGE ( b ). Сшитый белок D был дополнительно проанализирован вестерн-блоттингом с использованием антител, выработанных против белка А (альбумин, в центре) и белка В (α1-антитрипсин, справа) (9).0134 с ). 1X GA представляет собой 0,00625% глутарового альдегида. ( d , e ) Ингибирование димеризации протеина D β-меркаптоэтанолом (β-ME) и SDS. Белок D сшивали 0,025% глутаральдегидом в присутствии β-ME ( d ) или SDS ( e ). 1X представляет 0,05% β-ME ( d ) и 0,0625% SDS ( e ) соответственно. ( f ) SDS ингибирует превращение протеина D в иммобилизованные TP4-A12I, A15I, что анализировали с помощью 15% невосстанавливающего SDS-PAGE. 1X представляет 0,0625% SDS.
Изображение полного размера
Сайты связывания пептида TP4 на белке D
Для выяснения взаимодействий между TP4-A12I, A15I и белком D (альбумином и α1-антитрипсином) комплекс AMP/белок D был сшит с глутаровым альдегидом, разделены с помощью восстановленного SDS-PAGE и проанализированы вестерн-блоттингом с использованием антител, выработанных против альбумина, α1-антитрипсина и TP4 (рис. 6a). Интересно, что TP4-A12I, A15I был связан с белком A, белком B, а также мономерным и димерным белком D (рис. 6a). Однако только белок B все еще был тесно связан с иммобилизованными TP4-A12I, A15I, если вытянутый вниз белок D был диссоциирован β-ME (рис. 6b). Эти результаты позволяют предположить, что TP4-A12I,A15I близок к белку B в комплексе альбумина и α1-антитрипсина (рис. 6c).
Рисунок 6Связывание пептидов TP4-A12I, A15I с комплексом альбумин/α1-антитрипсин. ( a ) Связывание пептидов TP4-A12I, A15I с белком D. Комплексы AMP-белок D сшивали глутаральдегидом (GA), разделяли с помощью SDS-PAGE с восстановленным на 8% или 15%, окрашивали кумасси синим и выявляли вестерн-блоттингом с использованием антител, выработанных против альбумина, α1-антитрипсина и TP4 соответственно. 1X представляет 0,00625% GA. ( b ) Связывание пептидов TP4-A12I, A15I с субъединицей α1-антитрипсина. Белок D поглощали иммобилизованными биотинилированными TP4-A12I, A15I на гранулах стрептавидина. Белки, оставшиеся после промывки β-меркаптоэтанолом (β-ME), анализировали с помощью SDS-PAGE с уменьшенным на 8% содержанием и окрашивания кумасси синим. 1X представляет собой 0,25% β-ME. ( c ) Модель взаимодействия AMP и протеина D. Активный комплекс состоит из двух идентичных протеинов D, и каждая субъединица состоит из протеина A (альбумин) и протеина B (α1-антитрипсин), связанных дисульфидной связью.
Изображение полного размера
Сайт связывания AMP и лекарственного средства в белке D
Синее смещение спектра испускания флуоресценции белка D наблюдалось после добавления TP4-A12I, A15I или жаропонижающего средства ибупрофена, но эти реагенты не вызывали синий сдвиг в белке А (альбумин) 13 . В качестве положительного контроля анионное поверхностно-активное вещество, саркозил, вызывало смещение синего цвета как для белка А, так и для белка D (рис. 7а). Напротив, синего сдвига не наблюдалось в белке А и белке D противосудорожным фенитоином, который еженедельно связывается с альбумином 14 . Кроме того, только белок D, но не белок A, связывался с TP4-A12I, A15I, проанализированными методом сдвига полосы. Интересно, что связывание протеина D с помощью TP4-A12I, A15I конкурентно ингибировалось ибупрофеном, но не варфарином или фенитоином (рис. 7b). Эти результаты позволяют предположить, что TP4-A12I, A15I и ибупрофен могут иметь один и тот же сайт связывания, вероятно, в сайте связывания лекарственного средства II альбумина в комплексе белка D.
Рисунок 7Связывание пептидов TP4-A12I, A15I и лекарственного средства с белком D. ( a ) Спектры эмиссии белков A и D в присутствии саркозила, TP4-A12I, A15I, ибупрофена и фенитоина. Реагенты добавляли к белку A и белку D в указанных концентрациях, возбуждали при 280 нм и регистрировали эмиссионный спектр в диапазоне от 300 до 450 нм. Белки А и D: по 0,75 мкМ каждого; Саркозил: линии 1–5 при 0, 5, 20, 80 и 320 мкМ; TP4-A12I, A15I: линии с 1 по 4 при 0, 30, 60, 120 мкМ; Ибупрофен; линии с 1 по 5 при 0, 3, 6, 12 и 24 мкМ; фенитоин; линии с 1 по 5 при 0, 2,5, 5, 10 и 20 мкМ. ( b ) Ингибирование связывания TP4-A12I,A15I с протеином D под действием ибупрофена. Смесь белков A и D (по 20 мкг каждого) предварительно инкубировали с ибупрофеном, варфарином или фенитоином в течение 30 минут перед инкубацией с TP4-A12I, A15I (4 мкг) при 37 °C в течение 30 минут и анализировали с помощью нативного электрофореза в электрофорезе. рН 8,8.
Увеличенное изображение
Изменение содержания протеина D в бычьей сыворотке
Бычья сыворотка является основной добавкой сред для культивирования клеток, которые обычно используются в современных медицинских исследованиях для анализа и производства биомолекул. Нас интересует количество протеина D в сыворотке крупного рогатого скота на разных стадиях развития или из источников вендеры. Белок D был обнаружен только в сыворотке крупного рогатого скота на стадии плода, но не после рождения, при анализе с помощью невосстанавливающего 15% и 8% SDS-PAGE и экспериментов с опусканием (рис. 8a, b). Гомологичный белок D не был обнаружен в сыворотке крови взрослого человека. Интересно, что Apo-AI был минимально обнаружен в FBS, но заметно увеличился в сыворотке теленка, как и в сыворотке человека (рис. 8a). Кроме того, соотношение белка D к A в FBS варьировалось в зависимости от партии сыворотки или источника поставщика (Gibco, CORNIING и Biological Industries) при анализе с помощью невосстанавливающего SDS-PAGE (рис. 8c). Предполагается, что способность сыворотки связывать AMP или лекарство может варьироваться в зависимости от источника сыворотки.
Рисунок 8Анализы альбумина и комплекса α1-антитрипсин в сыворотке. ( a , b ) 0,25 мкл эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), сыворотки новорожденного теленка (NBCS) и человеческой сыворотки (HS) поглощали биотинилированными TP4-A12I, A15I, иммобилизованными на геле, конъюгированном со стрептавидином, и подвергали 15% ( a ) и 8% ( b ) восстановленные (2,5% β-ME) и невосстанавливающие анализы SDS-PAGE. C, контрольная сыворотка без стягивания вниз; PD, опускание ( c ) Анализ содержания белков A и D в различных FBS. 0,25 мкл сырой FBS анализировали с помощью 8% невосстанавливающего SDS-PAGE. № 1-5 были получены от Gibco, Co. с номерами лотов 1233075 и 1,887,129., CORNIING с номером лота 35010170, Biological Industries с номерами лота 1823627 и 1 650 071 соответственно. ( d ) Восприимчивость TP4 к ингибированию сывороткой в PBS и среде для культивирования клеток (DMEM).
Изображение с полным размером
В PBS антимикробная активность TP4 против E. coli была заметно подавлена 10% FBS с 16-кратным увеличением MBC. Интересно, что активность TP4 также заметно ингибировалась при 32-кратном увеличении MBC, если анализ проводился только в среде DMEM без добавления FBS (рис. 8d). Точно так же бактерицидная активность TP4 дополнительно подавлялась добавлением 10% FBS в DMEM, который обычно используется для культивирования клеток (рис. 8d).
Обсуждение
Альбумин является наиболее распространенным белком в сыворотке крови человека (HSA, 45 мг/мл), за ним в порядке убывания следуют α1-антитрипсин (A1AT, 3,5 мг/мл), трансферрин (2,5 мг/мл), α2- макроглобулин (2,5 мг/мл), гаптоглобулин (1,8 мг/мл), липопротеин низкой плотности (ЛПНП, 1,2 мг/мл), α1-кислый гликопротеин (АГП, 0,8 мг/мл) и липопротеин высокой плотности (ЛПВП, 0,6 мг/мл) 11 . Эти белки участвуют в транспортировке жирных кислот, холестерина, токсинов и лекарств в кровотоке. Более 9Было показано, что 0% антикоагулянтного препарата варфарина и жаропонижающего препарата ибупрофена связываются с сайтом I и сайтом II человеческого альбумина соответственно 8,9,10 . Однако связывающая способность противосудорожного препарата фенитоина с альбумином низка, хотя 90% препарата связывается с сывороточным белком 14 . Липопептидный антибиотик даптомицин сильно связывается с компонентами сыворотки человека (от 90 до 94%) 15 в следующем порядке: альбумин > > α1-антитрипсин > липопротеин низкой плотности > липопротеин высокой плотности > трансферрин 11 . Кроме того, некоторые антибиотики, такие как цефтриаксон и моксифлоксацин, и короткие катионные АМП, такие как CAP1-CAP9, также связываются и ингибируются человеческим и бычьим сывороточным альбумином 90-180 12,16,17 . В этом исследовании мы обнаружили, что альбумин эмбриональной бычьей сыворотки был активен в связывании и ингибировании активности AMP только в комплексе с α1-антитрипсином, тогда как свободная форма альбумина или свободный α1-антитрипсин по отдельности почти не могли проявлять эти связывающие свойства при анализе. всеми следующими методами детектирования: сдвигом полосы, протягиванием вниз, интерферометрией биослоев, гель-фильтрационной хроматографией, бактерицидной активностью и синими сдвигами спектра излучения флуоресценции.
О существовании активного комплекса альбумина и α1-антитрипсина в сыворотке человека или крупного рогатого скота пока не сообщалось. Наши результаты также показывают, что относительное количество свободного и сложного альбумина в сыворотке варьировалось в зависимости от стадии развития крупного рогатого скота, партии источников сыворотки (рис. 8). Следовательно, количество комплекса альбумин/α1-антитрипсин очень важно, поскольку бычья сыворотка является основной добавкой к культуральной среде, которая используется для анализа и получения биомолекул. В дополнение к белку D (комплекс альбумин/α1-антитрипсин) культуральная среда (DMEM), которая содержит соли и двухвалентные катионы, также ингибирует противомикробную активность TP4 (рис. 8). Чтобы предотвратить ингибирующее действие компонента сыворотки на противомикробную активность AMP, белок D в FBS может быть истощен гранулами с иммобилизованным AMP перед добавлением в культуральную среду, DMEM или RPMI.
Сдвиг полосы TP4-A12I,A15I на нативном PAGE произошел с бычьим белком D, но не с белком A (рис. 3a). Интересно, что связывание между протеином D и TP4-A12I,A15I блокировалось, если смесь, содержащую протеин D, перед связыванием с TP4-A12I,A15I предварительно инкубировали с ибупрофеном, но не с варфарином или фенитоином (рис. 7b). Известно, что варфарин и ибупрофен связываются с человеческим альбумином в местах связывания I и II соответственно 10 . Кроме того, изменения конформации альбумина можно было отслеживать по синему сдвигу спектра испускания флуоресценции, вызываемому остатками триптофана. Перемещение остатков триптофана, W131 и W214, расположенных в сайтах I и II BSA, вызванное лечением лекарствами, может быть обнаружено с помощью анализа 13,18 . Например, анионное поверхностно-активное вещество саркозил приводило к синим сдвигам как в белках A, так и в белках D (рис. 7a). TP4-A12I, A15I и ибупрофен приводили к синему сдвигу только в бычьем белке D, но не к белку А, тогда как фенитоин не вызывал синего сдвига в обоих белках. Эти результаты свидетельствуют о том, что TP4-A12I, A15I и ибупрофен имеют один и тот же сайт связывания, вероятно, в сайте связывания II альбумина в белке D.
α1-антитрипсин принадлежит к семейству серпинов, являясь ингибиторами сериновых протеиназ. И белок B (свободная форма α1-антитрипсина), и белок D (комплексная форма) проявляли антипротеолитическую активность (дополнительный рисунок 4). Это гликопротеин с 394 аминокислотных остатка и состоит из 3 β-листов и 9 α-спиралей, имеющих только один цистеин в положении Cys232 для дисульфидной связи с альбумином, который содержит 17 пар дисульфидных связей и один свободный цистеин 19 . Сигналы TP4 были видны на субъединицах A и B, а также на мономерных и димерных формах белка D, что было обнаружено вестерн-блоттингом после перекрестного связывания глутаральдегидом (рис. 6a). Однако белок B все еще связывался с TP4-A12I, A15I, если белок A был удален из комплекса AMP-белок D с помощью β-ME (рис. 6b). Это указывает на то, что в комплексе AMP находится рядом с белком B (α1-антитрипсином). Кроме того, димеризация двух идентичных молекул протеина D была важна для связывания АМФ, так как вытягивание протеина D иммобилизованным АМФ ингибировалось анионным поверхностно-активным веществом SDS, которое нарушает гидрофобное взаимодействие между этими двумя субъединицами (рис. 5д, е). Модель связывания AMP в комплексе предлагается, как показано на рис. 6c. Комплекс состоит из двух идентичных молекул белка D, связанных гидрофобным взаимодействием, причем каждая субъединица белка D состоит из белков A и B, связанных дисульфидной связью.
Помимо протеина D, сывороточный белок аполипопротеин AI (Apo-AI) также был извлечен из неочищенной фетальной телячьей сыворотки иммобилизованными TP4-A12I,A15I, но в меньшем количестве (рис. 2a). Apo-AI с Mr = 28 080 Да является основным компонентом липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), которые участвуют в удалении холестерина из периферических тканей и его катаболизме. Было показано, что этот белок связывает человеческий AMP, LL37, в комплексе 1:1 и ингибирует его антимикробную и цитотоксическую активность 20,21 . Количество Apo-A1 в сыворотке плода крупного рогатого скота было намного меньше, чем количество белка D (рис. 8a, b). Интересно, что количество белка D уменьшилось, а Apo-Al увеличилось в бычьей сыворотке после рождения. Следует отметить, что отсутствие белка D и присутствие Apo-Al также наблюдались в сыворотке взрослого человека (рис. 8a). Предполагается, что протеин D может играть важную роль в развитии плода у крупного рогатого скота и, возможно, у человека, в то время как Apo-AI в ЛПВП может играть роль в нейтрализации и транспортировке AMP и лекарств в сыворотке крупного рогатого скота и человека после рождения. .
В заключение следует отметить, что альбумин активен в отношении связывания АМФ только в комплексе с α1-антитрипсином в бычьей сыворотке на стадии плода, но не после рождения. Он состоит из двух идентичных субъединиц альбумина-α1-антитрипсина, связанных дисульфидной связью. Количество комплекса альбумин/α1-антитрипсин в сыворотке крупного рогатого скота очень важно и может быть истощено гранулами с иммобилизованным AMP, поскольку FBS является основной добавкой для сред для культивирования клеток, которые используются для анализа и получения биомолекул.
Методы
Материалы
Фетальная бычья сыворотка (FBS) была получена из следующих источников: Gibco (Нью-Йорк, США) с номерами партий 1233075 и 1887129, CORNIING (Нью-Йорк, США) с номером партии 35010170 и Biological Industries (Израиль). с номерами лотов 1823627 и 1 650 071. Сыворотка новорожденного теленка была получена от Life Biotechnologies Corporation (Калифорния, США) с каталожным № 16010167 и номером партии 1999580. Кроличьи антитела, выработанные против бычьего сывороточного альбумина и человеческого α1-антитрипсина, были получены от GeneTex (Сан-Антония, США) с каталожными номерами. GTX 79816 и GTX 112 707 соответственно. Кроличьи антитела, индуцированные против ТР4, были получены компанией Yao-Hong Biotechnology (Новый Тайбэй, Тайвань) с использованием синтетического полипептида ТР4. Гранулы, конъюгированные со стрептавидином, колонки FPLC (Mono Q и Superose 12™) были получены от GE Healthcare Bio-sciences AB (Уппсала, Швеция). Антимикробные пептиды, такие как TP4 22 , LL37 23 , Iseganan 24 и SAAP159 7 , были синтезированы Kelowna International Scientific Inc. (Тайбэй, Тайвань) с более чем 95%-ная чистота и их молекулярные массы были подтверждены анализом масс-спектра. Сыворотку человека собирали и готовили из крови взрослого человека с использованием протокола, одобренного Academia Sinica IRB (AS-IRB01-18,072) 21 августа 2020 г. Ибупрофен и фенитоин были приобретены у Tokyo Chemical Industry (Токио, Япония) под каталожными номерами I0415 и D0894 соответственно. Полимиксин В (А2250) и варфарин были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США).
Анализы антимикробной активности
Грамотрицательные бактерии Escherichia coli K-12 (MG1655) культивировали и высевали в/на чашку с бульоном Луриа-Бертани/агаром (Merck Millipore, Дармштадт, Германия). Грамположительные Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) культивировали и высевали на трипсиновый соевый бульон/агар (BD, MD, USA). Грибок Candida albicans (ATCC 14,053) культивировали и высевали на бульон/агар YM (BD, MD, USA). Бактерии выращивали в течение ночи, промывали и разводили 1:2000 в фосфатно-солевом буфере (PBS), pH 7,5, или в DMEM (Life Biotech, Калифорния, США), pH 7,4. Бактерии (ок. 1 × 10 6 колониеобразующих единиц, КОЕ) смешивали с антимикробными пептидами (АМП) в 100 мкл PBS и инкубировали при 37°С (для бактерий) и при 30°С (для грибков). Были приготовлены серийные разведения каждой обработанной AMP бактерии в PBS/DMEM с добавлением FBS и высеяны для определения оставшихся жизнеспособных клеток (выраженных в КОЕ). Для каждого анализа проводили не менее трех независимых экспериментов для определения среднего значения со стандартным отклонением 25 . МБК определяли как самую низкую концентрацию АМФ, убивающую 99,9% исходного инокулята.
Очистка белков сыворотки путем фракционирования сульфатом аммония и колоночной хроматографии
Сульфат аммония добавляли к аликвотам FBS при 30%, 50%, 70% и 90% насыщении и инкубировали на льду в течение 30 минут при периодическом встряхивании. Осадки собирали центрифугированием при 12000xg, 4 °C в течение 10 мин, подвергали диализу против буфера PC (20 мМ HEPES, 50 мМ NaCl, pH 7,4) и перед использованием хранили при -80 °C. Фракция 70% компонентов, насыщенных сульфатом аммония, была дополнительно очищена с помощью быстрой жидкостной хроматографии белков (FPLC) на колонках Mono Q и Superose 12™ (S12).
Анализ сдвига связывания
Различные АМП (по 4 мкг каждого) инкубировали с компонентами эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) при комнатной температуре в 10 мкл буфера для ПК в течение 30 минут и подвергали горизонтальному нативному 8% PAGE, pH 8,0 или pH 8. 8, и окрашивание кумасси синим.
Идентификация TP4-связывающих белков в FBS
Гранулы, конъюгированные со стрептавидином, инкубировали с 10 мкг биотинилированных пептидов TP4-A12I, A15I в 600 мкл буфера PC в течение одного часа на вращающемся колесе. Иммобилизованные биотинилированные АМП далее смешивали с компонентами сыворотки в указанном 600 мкл буфера (буферов) при комнатной температуре в течение 30 минут на вращающемся колесе, затем дважды промывали 600 мкл соответствующего буфера и подвергали SDS-PAGE и окрашиванию кумасси синим. Специфические белки вырезали из геля SDS-PAGE и подвергали расщеплению трипсином в геле и жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии 26 .
Кинетика связывания белка с биотинилированными TP4-A12I,A15I
Интерферометрию биослоя измеряли с помощью прибора Octet RED384 (ForteBio). Биотинилированные TP4-A12I, A15I (10 мкМ) иммобилизовали на стрептавидиновом биосенсоре. В качестве аналита использовали серийные разведения компонентов сыворотки в 200 мкл буфера ПК. Аффинность (Kd) и кинетические параметры (k на и k на ) рассчитывали из глобальной подгонки (1:1) данных с использованием программного обеспечения Octet RED384 27 .
Анализ антитрипсиновой активности
Ингибирование протеолитической активности трипсина компонентами сыворотки на пептидах TP4 и SAAP159 определяли следующим образом. Свежеразведенный трипсин (2 нг; 0,2 мкг/мл) предварительно инкубировали с различными концентрациями компонентов сыворотки в буфере PC в течение 30 мин, а затем смесь добавляли к TP4 (2 мкг; 0,2 мг/мл) или SAAP159 (4 мкг/мл). ; 0,4 мг/мл) пептидов в 10 мкл буфера для ПК при 37 °C в течение 30 мин. Расщепленные пептидные фрагменты анализировали с помощью SDS-PAGE со сниженным на 15% и окрашиванием кумасси синим.
Анализ перекрестного связывания
Небольшие аликвоты компонентов сыворотки (4 мкг) в присутствии/отсутствии AMP (2 мкг) инкубировали с различными концентрациями глутарового альдегида в 10 мкл буфера PC при 37 °C в течение 30 мин. Сшитые комплексы анализировали с помощью восстановленного SDS-PAGE и окрашивания кумасси синим 28 .
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Образцы, обработанные 2-меркаптоэтанолом, в объеме 50 мкл загружали в колонку C4 (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм, Vydac) при 37 °C, промывали буфером A (0,1% трифторуксусной кислоты). кислоты и 2% ацетонитрила, об./об.), элюировали градиентом буфера В (0,1% трифторуксусной кислоты и 98% ацетонитрила, об./об.) при скорости потока 1 мл/мин и обнаружении при длине волны 220 нм. Относительное количество компонентов сыворотки определяли количественно с помощью программы Agilent ChemStation.
Измерение спектра эмиссии флуоресценции
Компоненты сыворотки (белок A или D, 0,75 мкМ каждый) инкубировали с различными концентрациями реагента, такого как саркозил, TP4-A12I, A15I, ибупрофен и фенитоин, в 200 мкл PC-буфера при 25 °С в течение 30 мин. Смеси возбуждали при длине волны 285 нм, а спектры их излучения регистрировали в диапазоне от 300 до 450 нм с использованием терморегулируемого флуориметра (FP8500, Jasco, Япония) 9.0180 13 .
Доступность данных
Данные, подтверждающие результаты этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.
Ссылки
Заслофф М. Антимикробные пептиды многоклеточных организмов. Природа 415 , 389–395 (2002).
ОБЪЯВЛЕНИЯ КАС пабмед Статья Google ученый
Свенсон Дж., Брандсдал Б.О., Стенсен В. и Свендсен Дж.С. Связывание коротких катионных противомикробных микропептидов с альбумином и его влияние на бактерицидный эффект in vitro. J. Med. хим. 50 , 3334–3339. https://doi.org/10.1021/jm0703542 (2007 г.).
КАС пабмед Статья Google ученый
Ссылки для скачивания
Обеспечение прослеживаемости FBS с помощью химического снятия отпечатков пальцев
30 августа 2017 г. • Автор Brandy Sargent
Качество и прослеживаемость эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) очень важны, особенно в приложениях, где продукт используется в биопроизводство. Хотя в большей части биофармацевтической промышленности наблюдается тенденция отказа от продуктов животного происхождения, вакцинная промышленность по-прежнему использует FBS в производстве вакцин.
Чтобы удовлетворить потребность в абсолютной отслеживаемости, компания Oritain™ разработала услугу по проверке происхождения эмбриональной телячьей сыворотки на основе информации о химических отпечатках пальцев, изначально присутствующей в продукте. Я рад поделиться следующим гостевым блогом, в котором рассказывается об использовании технологии химического снятия отпечатков пальцев Oritain для научной проверки происхождения FBS. GE Healthcare сотрудничала с Oritain, чтобы согласовать независимую программу отслеживания на основе тестов, чтобы предоставить подтверждение страны происхождения путем тестирования реальных образцов сыворотки в дополнение к использованию бумажных документов.
Мне посчастливилось взять интервью у двух авторов о блоге и предоставить стенограмму интервью.
Использование химического фингерпринтинга для проверки происхождения сыворотки плода крупного рогатого скота Healthcare), Сесилия Аннерен (доктор философии, менеджер по глобальному маркетингу продуктов, GE Healthcare), Кори Кард (главный научный сотрудник, GE Healthcare) и Кири Маккомб (доктор философии, главный технический директор, Oritain)
Введение
Многие существующие и новые белковые препараты и вакцины, необходимые для здоровья человека и ветеринарии, основаны на процессе производства клеточных культур. В то время как биологические препараты в основном производятся в бессывороточных условиях, для промышленного производства вакцин часто требуются FBS или производные сыворотки. FBS также используется для культивирования клеток в фундаментальных исследованиях и разработке лекарств. В то время как пользователей, занимающихся исследованиями, в основном заботит постоянство характеристик роста клеток сыворотки от партии к партии, пользователей в сегменте промышленного производства вакцин больше интересует соответствие нормативным требованиям и отсутствие случайных агентов (1). Отказ от сыворотки в целом был бы лучшим вариантом для производителей вакцин, но это нецелесообразно с экономической или нормативной точки зрения для большинства старых вакцин. Кроме того, в сыворотке есть десятки тысяч различных компонентов, в то время как самые сложные химически определенные среды содержат от 100 до 150 компонентов. Даже сегодня взаимодействие между всеми компонентами сыворотки недостаточно изучено, и для некоторых клеточных линий ничто не работает так хорошо, как сыворотка.
Независимо от страны происхождения, FBS будет укреплять среду для культивирования клеток и поддерживать рост клеток очень похожим образом. Тем не менее, вариабельность между различными партиями сыворотки остается проблемой для пользователя. Различия между партиями сыворотки внутри страны происхождения не меньше, чем между странами происхождения. Для исследователей это хорошая новость с точки зрения поставок, поскольку они могут выбрать самую дешевую сыворотку, которая может надежно воспроизвести результаты. Страна происхождения сыворотки имеет меньшее значение. Напротив, для производителей вакцин безопасность сыворотки является приоритетом номер один. Поскольку сыворотки получают от животных, присутствие вируса в сыворотке неизбежно, и разные страны происхождения представляют разные уровни риска контаминации конкретным вирусом (2). В то время как некоторые вирусы крупного рогатого скота встречаются во всем мире, другие болезни крупного рогатого скота имеют четко выраженную географическую распространенность. Что касается губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (ГЭКРС), например, FBS из Новой Зеландии и Австралии рекламировалась как «более безопасная», чем FBS другого происхождения, поскольку в этих странах есть изолированные стада крупного рогатого скота и никогда не сообщалось о вспышках. Однако в настоящее время установлено, что ГЭКРС не передается через бычью кровь или продукты крови при соблюдении соответствующих методов забоя (2, 3).
Всемирная организация по охране здоровья животных (Office International des Epizooties) — международная организация, которая отслеживает и предоставляет обновленную информацию о наличии болезней в разных странах. По состоянию на январь 2017 года в Новой Зеландии, Австралии и США был самый низкий уровень риска заражения сыворотки инфекционными агентами, включая коровью энцефалопатию, трансмиссивную губчатую энцефалопатию (ТГЭ) и ящур (ящур). По этой причине многие производители вакцин имеют одну или несколько из этих стран происхождения, указанных в их производственных протоколах, которые зарегистрированы в FDA или международных эквивалентах. Эти производители предъявляют высокие требования к своим поставщикам сыворотки, чтобы гарантировать, что страна происхождения обеспечивает точность не только с точки зрения регулирования, но и с точки зрения инфекционного агента (4).
Хотя существуют дополнительные меры, которые производители вакцин могут предпринять для ограничения риска заражения вирусом, включая гамма-облучение сыворотки, они не обязательно устраняют весь риск присутствия живого вируса в сыворотке. Фактически, недавние данные свидетельствуют о том, что некоторые небольшие безоболочечные вирусы не подвержены воздействию гамма-облучения (5). Однако вопрос о том, вызывают ли эти вирусы беспокойство, является предметом дискуссий. Кроме того, некоторые клеточные линии не так хорошо работают с облученной сывороткой, потому что гамма-облучение может оказывать негативное влияние на белки, присутствующие в сыворотке.
В связи с большим спросом на сыворотки из стран с низким уровнем риска существует значительная надбавка к цене за FBS из этих стран. Сегодня австралийские FBS, например, примерно в девять раз дороже, чем бразильские FBS. Цены на FBS определяются не только спросом, но и регулированием и доступностью сыворотки (1). Правила импорта-экспорта ограничивают, какие сыворотки можно ввозить в разные страны. Например, в соответствии с текущими нормативными условиями бразильская сыворотка может быть импортирована в Европейский Союз и большинство азиатских стран, но запрещена к ввозу в США. Более того, поскольку сыворотка является побочным продуктом мясной промышленности, погодные и другие макроэкономические факторы, влияющие на мясную промышленность, могут повлиять на доступность FBS отдельно от влияния спроса. Ограниченное предложение в США и Австралии недавно привело к рекордно высокой цене на эти сыворотки (рис. 1).
Из-за больших расхождений в ценах между странами происхождения существует финансовый стимул для мошенничества. Если просто заменить слово «Бразилия» на бутылке словом «Австралия», сыворотка моментально подорожает в девять раз. С точки зрения потребителя, невозможно определить разницу, поскольку и бразильская сыворотка, и австралийская сыворотка будут иметь схожие характеристики роста клеток. Однако риск заражения вирусом для этих двух продуктов разный. Производители и поставщики сыворотки несут моральное обязательство обеспечить 100% точную информацию о стране происхождения, а производители вакцин платят значительную надбавку странам происхождения с низким уровнем риска, чтобы гарантировать, что их вакцины, которые в конечном итоге попадают в организм людей, имеют наименьший риск. возможно причинение вреда.
Производство сывороток в значительной степени саморегулируется, а Международная ассоциация производителей сывороток (ISIA) не была создана до 2006 года. ISIA добилась значительных успехов в стандартизации терминологии в отрасли и создании независимо проверенного процесса сертификации прослеживаемости, который компании могут квалифицировать за. Эта программа отслеживания оказалась очень успешной в сокращении количества поддельных сывороток на рынке. Тем не менее, как и большинство систем прослеживаемости на основе бумажных документов, она ограничена тем, что кто-либо добровольно не подделывает документы.
Раньше, когда географическое происхождение не могло быть подтверждено путем тестирования, покупателю приходилось полагаться только на документацию для проверки происхождения. Однако ситуация изменилась, и теперь возможно тестирование прослеживаемости продуктов животного происхождения. Поэтому компания GE Healthcare решила сделать еще один шаг в проверке происхождения сыворотки и объединила усилия с Oritain в качестве поставщика, чтобы внедрить независимую программу проверки прослеживаемости, основанную на запатентованной компанией Oritain научной технологии снятия отпечатков пальцев.
В настоящее время выполняются тесты для подтверждения страны происхождения всех партий охарактеризованных и определенных FBS из Австралии, Новой Зеландии и США для GE Healthcare. Эта программа дополняет сертификацию ISIA и использование бумажных документов в качестве дополнительной гарантии целостности и подлинности FBS.
Как работает химическая дактилоскопия
Хорошо известно, что геохимия почв и климатические особенности различаются в зависимости от географии. Растения поглощают химические вещества из окружающей среды в соотношении, соответствующем местной географии, и образуют «химический отпечаток пальца». Точно так же жвачные животные, такие как крупный рогатый скот, приобретают химический отпечаток, относящийся к их происхождению, в результате потребления местной пищи и воды (рис. 2).
Компания Oritain анализирует продукты FBS с помощью химических методов и статистической интерпретации для определения химического отпечатка происхождения. Сравнение можно провести с продуктом FBS, приобретенным в любой точке цепочки поставок, что гарантирует точность заявлений об отслеживаемости.
Разработка метода химического фингерпринтинга сывороток
Для разработки уникальных фингерпринтов сывороток из разных стран компания GE предоставила образцы из отдельных партий FBS HyClone™ из четырех разных стран происхождения (таблица 1). Аликвоту 2 мл каждого образца FBS пипеткой перенесли в очищенную пробирку для разложения из политетрафторэтилена (ПТФЭ) (фиксировали точную массу образца) и в пробирку добавили 5 мл дистиллированной кварцевой HNO3, которую затем закрыли крышкой для предварительного разложения в течение 1 часа. . Давление в пробирках сбрасывали, и образцы подвергали расщеплению в микроволновой печи в течение 1 часа. Раствор переносили в новую пробирку (и промывали деионизированной водой), а раствор выпаривали досуха в графитовом горячем блоке. После этого образцы повторно растворяли в 10 мл 2% HNO3 и отправляли на анализ микроэлементов методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой (ICP-MS).
Результаты были скорректированы на холостые пробы и переваренную массу для определения истинной концентрации элементов
в частях на миллион. Качество данных было подтверждено на этом уровне с использованием материала контроля качества (QC) (охарактеризованный стандарт FBS) и сертифицированного эталонного материала (CRM, многоэлементная вода). Статистический анализ был проведен на подмножестве проанализированных концентраций элементов с использованием собственного статистического алгоритма Oritain. Качество статистических данных было проверено на нормальность, и любые выпадающие точки данных были идентифицированы и подтверждены повторными анализами. Размер набора выборки также был проверен с помощью общих методов, чтобы подтвердить, что размер подмножества был подходящим. Результаты включали одномерный и многомерный статистический анализ с использованием комбинации общих исследовательских и дискриминационных моделей.
Дифференциация сывороток различного происхождения
На рис. 3 представлена графическая интерпретация дискриминантной модели, разработанной для дифференциации сывороток различного происхождения. Каждая точка данных представляет собой химический отпечаток отдельной партии сыворотки. Проще говоря, точки, сгруппированные вместе, имеют сходные химические отпечатки пальцев и связаны по происхождению, в то время как кластеры, которые отделены друг от друга, имеют разное происхождение. Значения на оси можно считать произвольными, но они обозначают изменчивость химических отпечатков пальцев.
Важно отметить, что кластеры данных не перекрывают друг друга в этих трех измерениях. В целом, эта модель показала хорошие результаты с точки зрения способности различать сыворотки из четырех групп различного происхождения на основе их химических «отпечатков пальцев». Обратите внимание, что образцы, полученные из Бразилии (большой объем, низкое происхождение), были легко отличимы от образцов, полученных из других источников с высокой стоимостью. Примером общей производительности являются правильные данные о частоте классификации в таблице 2. Как показано, показатели ложноположительных/отрицательных результатов являются хорошими (< 2% в большинстве случаев). Хотя эта модель является основным алгоритмом, используемым Oritain, существует несколько других алгоритмов с аналогичными параметрами производительности, которые совместно используются для дальнейшего минимизации ошибок в коммерческих программах. В общей сложности компания Oritain использует 12 независимых статистических моделей для изучения химических отпечатков пальцев в связи с анализом происхождения.
Проверка происхождения HyClone FBS
Описанная модель также использовалась для проверки сыворотки заявленного происхождения. Исходные отпечатки пальцев ряда производственных партий HyClone FBS использовались для определения распределения расстояния образцов от центроида многомерного кластера для конкретного происхождения. На рис. 4 показан смоделированный пример положительного (происхождение: Новая Зеландия) и неудовлетворительного (происхождение: Бразилия) результата для заявленного происхождения из Новой Зеландии. Эталонные отпечатки пальцев новозеландских образцов изображены серыми точками с 99% доверительный интервал этих данных, обозначающий предел принятия решения (синяя линия) между тестируемыми образцами, которые считаются «согласованными» или «несовместимыми» (пройдено/не пройдено) с эталонным источником.
Эффект «смешения по происхождению» также был исследован с бинарными смесями различного происхождения. Первоначальные исследования показывают, что с помощью этого метода также можно определить «экономичные» уровни смешивания (результаты не показаны). Предел принятия решения с доверительным интервалом 99% (синяя линия) используется для определения предела годен/не годен для тестируемого образца.
Заключение
Здесь мы описываем разработку технологии Oritain для определения происхождения сыворотки. С помощью запатентованного статистического алгоритма Oritain можно проверить подлинность заявленного происхождения сыворотки и идентифицировать мошеннически заявленное происхождение. С помощью услуг Oritain компания GE Healthcare занимает лидирующие позиции в отрасли по химической проверке происхождения сыворотки и остается приверженной ISIA для развертывания более крупной отраслевой программы прослеживаемости, основанной на тестах.
Интервью с Сэмом Линдом, доктором философии, директором по коммерциализации науки, Oritain, и Робертом Карри, MBA, старшим менеджером по продуктам сыворотки, GE Healthcare
Как разрабатывалась технология химического отпечатков пальцев Oritain? Как он эволюционировал для использования в сывороточной промышленности?
Метод научной прослеживаемости Oritain основан на принципах криминалистики. Эта технология была создана нашими основателями в Университете Отаго, и они увидели, что она защищает производителей из различных отраслей от рисков мошенничества и подмены продуктов питания. Со временем возможности технологии расширились, чтобы охватить продукты садоводческой, медовой, мясной и молочной отраслей. Перенесемся вперед до недавнего времени: мы провели исследование рынка и исследование, чтобы выяснить, можно ли применить эту технологию к сыворотке, поскольку она является производной от мясной промышленности. Результаты были положительными, и отпечатки пальцев между источниками очень различны.
Почему компания GE Healthcare решила использовать химическую дактилоскопию для подтверждения происхождения сыворотки?
Компания GE хотела выйти за рамки отраслевых стандартов. Мы хотим показать, что GE является лидером на рынке сывороток и что у нас лучшая в отрасли программа отслеживания. Эта технология дает клиентам дополнительный уровень гарантии помимо стандартной прослеживаемости бумаги.
Особое беспокойство вызывает Китай. В Китае мы сталкиваемся с поддельной сывороткой. Сыворотка — это продукт, который входит в состав лекарств, которые в конечном итоге попадают в организм человека. Мы хотим дать клиентам высочайший уровень уверенности в том, что они действительно покупают то, что находится в бутылке. С помощью этой технологии снятия отпечатков пальцев можно даже протестировать сомнительную сыворотку и подобрать партию, что дает покупателям почти несомненную уверенность в том, что они купили подлинное.
Почему важно дополнить традиционную бумажную документацию технологией химического снятия отпечатков пальцев?
Чем больше бренд или компания делает для защиты своих продуктов и брендов, тем лучше. Бумажные системы, безусловно, эффективны и занимают свое место в цепочке поставок, но они зависят от сторон, предоставляющих правильную информацию. Кроме того, наличие независимого решения для тестирования, основанного на продукте, подобного тому, на котором специализируется Oritain, дополняет репертуар инструментов, которые GE Healthcare использует для минимизации рисков в цепочке поставок 9.0030
Хотя бумажные системы эффективны, они работают только в том случае, если кто-то не подделывает документы добровольно. Несмотря на то, что GE имеет строгую систему управления качеством поставщиков, все, что мы можем сделать для расширения этой системы, дает дополнительные гарантии клиентам.
Похоже, что эта технология будет очень полезна для производства сывороток в целом.
Считаете ли вы, что технология дактилоскопирования Oritain будет принята Международной ассоциацией производителей сывороток? Если да, то как это можно реализовать?Существует соглашение между Oritain и ISIA, и вместе мы работаем над тем, как эта технология может принести пользу более широкой отрасли и заинтересованным сторонам.
GE активно участвует в ISIA и продвигает распространение этой технологии на всю отрасль. Все, что можно сделать для улучшения имиджа индустрии сывороток, является положительным моментом для GE. Мы считаем себя лидерами в отрасли и рады, что вся отрасль хочет внедрить эту технологию.
Какое влияние оказывает химическая дактилоскопия происхождения сыворотки на регуляторные взаимодействия? Для использования сыворотки в производстве вакцин? Для правил импорта/экспорта?
Хотя химическое снятие отпечатков пальцев является относительно новым в области биофармацевтики (но очень хорошо воспринимается), безусловно, существует мнение, что эта технология может обеспечить поддержку в управлении рисками в случае производителей, таких как GE Healthcare, а также для регулирующих органов и клиентов. . Мы видим, что это пространство будет развиваться в будущем, поскольку эти дополнительные заинтересованные стороны вовлекаются в обсуждения и создается подходящая коммерческая структура для решения всех сторон.
Footnotes
Полный список футбольных команд Дивизиона 1
На уровне Дивизиона 1 вы найдете лучшие футбольные программы в стране. Футбольные команды Дивизиона 1 подразделяются на одно из двух подразделений: FBS и FCS. Самые элитные команды находятся в подразделении FBS. Этим школам разрешено выдавать 85 полных стипендий, и обычно они привлекают пятизвездочных и четырехзвездочных новобранцев на вершине своей игры. Тем не менее, футбольные команды FCS сами по себе чрезвычайно конкурентоспособны, поскольку в их состав также входят пятизвездочные и четырехзвездочные спортсмены. Футбольные команды FCS могут выдать максимум 63 стипендии и могут разделить свои стипендии по своему усмотрению. Узнайте секреты футбольного рекрутинга.
Футбольные команды Дивизиона 1 отличаются плотным расписанием, а футбол — это работа почти на полный рабочий день помимо учебы студента-спортсмена. Вокруг футбола D1 много ажиотажа: телевизионные трансляции игр в боулинг охватывают домохозяйства по всей стране. Тем не менее, студенты-спортсмены, которые играют в этих командах, должны быть готовы много работать и, возможно, не увидят игрового времени до младших или старших классов или вообще не увидят игрового времени. Если у спортсмена есть талант и любовь к игре, вам подойдет D1 FBS или FCS. Узнайте о футбольных колледжах D1, D2, D3 и NAIA.
Сколько футбольных команд первого дивизиона?
Есть 125 футбольных команд Дивизиона 1 FCS и 129 футбольных команд FBS. FCS, или Подразделение футбольного чемпионата, включает 14 конференций: конференции Big Sky, Big South, CAA, Independent, Ivy, MEAC, Missouri Valley, Northeast, Ohio Valley, Patriot, Pioneer, Southern, Southland и SWAC. Футбольные команды FCS соревнуются в плей-офф с участием 24 команд за футбольный чемпионат NCAA Division 1. Узнайте последние новости о наборе в американский футбол здесь.
FBS, или подразделение Football Bowl, состоит из 11 различных конференций: конференции ACC, American, Big 12, Big Ten, C-USA, Independent, MAC, Mountain West, PAC-12, SEC и Sun Belt. Футбольные команды FBS соревнуются в турнире с участием четырех команд, кульминацией которого является игра национального чемпионата, чтобы определить национального чемпиона. Все, что вам нужно знать о футбольном рекрутинге Нотр-Дам.
Статьи по теме
Футбольный рейтинг Дивизиона 1
С более чем 250 четырехлетними учебными заведениями, предлагающими американский футбол, поиск подходящей программы для студента-спортсмена может занять много времени и вызвать стресс. Чтобы уменьшить стресс и помочь учащимся-спортсменам более легко находить будущие школы, NCSA разработало рейтинги силы, которые анализируют такие данные, как стоимость, академический состав, размер и местоположение, чтобы ранжировать лучшие футбольные школы D1.